Ahakoa i roto i te ariā, ka ranea tetahi ngota ngota o te tauira, he nui ake te rahi o te DNA ka whakamahia mo te PCR matarohia, hei tauira, tae atu ki te 1 µg o te DNA mammalian genomic me te 1 pg o te DNA plasmid.Ko te nui tino pai ka whakawhirinaki ki te maha o nga kape o te raupapa whaainga, me tona uaua.
Mena he iti noa te tauira e whakamahia ana, me piki ake te maha o nga huringa whakakaha kia whiwhi rawaka te hua.Ko te Taq polymerase e whakamahia ana mo te nuinga o nga whakamatautau PCR kaore he mahi whakatika (3′-5′ exonuclease mahi);no reira, kaore e taea te whakatika nga hapa i te wa e whakakaha ana.Ka piki ake te maha o nga huringa, ka kaha ake te whakanui i nga hua kohakore.Mena, he nui rawa te rahi o te tauira, ka piki ake te tupono o te whakaurunga o nga mea tuatahi ki etahi atu (kaore i te kotahi rau paiheneti te whakahiato), tae atu ki te hanganga o nga dimer tuatahi, ka piki ake, ka hua ake te whakakaha hua-hua.I te nuinga o nga wa, ka wehea te DNA mai i nga ahurea pūtau, mai i nga microorganisms ka whakamahia hei tauira PCR.I muri i te purenga, he mea tika ki te whakatau i te kukū o te DNA kia taea ai te tautuhi i te rōrahi e hiahiatia ana mo te tatūnga PCR.Ahakoa ka taea e te electrophoresis gel agarose ki te whakatau tata, kaore tenei tikanga i te tika.Kua whakapumauhia te spectrophotometry UV-Vis hei paerewa koura mo te inenga o nga waikawa karihi;Ko tenei tikanga tika me te ngawari me te tere ka ine i te whakaurunga o te tauira ki te 260 nm, a ka tatauhia te kukū ki te awhina o te tauwehe hurihanga.
Mēnā he iti rawa te kukū o te DNA, heoi (< 1 µg/mL dsDNA), mena kua pokea ki nga matū ka uru ano ki roto i te awhe 260 nm (hei tauira, te RNA, te pūmua, te tai), ka eke tenei tikanga ki ona herenga.Mēnā he iti rawa te kukū, ka kore e tika ana nga panui ki te kore e whakamahia, a ko te poke ka arahi ki te (i etahi wa ka nui) te whakaaro nui o te uara.I roto i tenei take, ko te ine ma te whakamahi i te fluorescence he rereke.I ahu mai tenei tikanga i runga i te whakamahinga o te waikano rewharewha e hono ana ki te dsDNA anake te matatini kei roto ko te waikawa karihi me te waikano e hikaka ana e te marama, a muri iho ka puta te marama o te roangaru teitei ake.I konei, ko te kaha o te tohu rewharewha he rite ki te nui o te DNA, a, mo te whakatau i te kukū ka aromatawaihia e pa ana ki te pihi paerewa.Ko nga painga o tenei tikanga e noho ana i runga i te motuhake o te here, kaore i te whakakore i nga awe o waho i whakauruhia e te poke, me te kaha ki te kite i nga tino iti o te DNA.Ko te pai o enei tikanga ka whakawhirinaki te nuinga ki te kukū tauira me te ma;i te nuinga o nga wa ka pai pea kia whakarara nga tikanga e rua.
Wā tuku: Nov-30-2022