Etsi in theoria, unum moleculum Formulae sufficeret, aliquanto maior copia DNA typice adhibita est pro classico PCR, exempli gratia, usque ad 1 µg mammalium genomicorum DNA et minus quam 1 pg plasmidis DNA.Optima copia late ex numero exemplarium scopo seriei pendet, necnon in multiplicitate eius.
Si minimi propositio adhibeatur, par numerus incrementi amplificationis cyclorum necessaria erit ad sufficientem operis quantitatem obtinendam.A Taq polymerasis quae pluribus PCR experimentis adhibetur, munus correctionis non refert (actio 3′-5′ exonuclease);sic errores in amplificatione orientes corrigi non possunt.Quo superior numerus cyclorum, eo magis multiplicatio operis vitiosi erit.Si, ex altera parte, moles templates nimis alta est, probabilitas primariorum furnum aliis (non centum centesimis honorifica) sequentia, necnon primariorum dimers formatio, augebit, quod in amplificatione evenit. per-products.In multis casibus, DNA a culturarum cellularum vel a microorganismis semotus est et postea sicut in figura PCR usus est.Post purificationem necesse est intentionem DNA determinare ut volumen quod requiritur ad PC per setup definire possit.Dum agarose gel electrophoresis aestimationi inservire potest, haec methodus ab accurata abest.UV-Vis spectrophotometria ut vexillum aureum pro quantitate acidorum nucleicorum stabilita est;haec directa et ideo facilis et velox methodus absorbentiam specimen in 260 um mensurat, et intentio calculatur ope conversionis factoris.
Si DNA coniunctio valde demissior est, tamen (< 1 µg/mL dsDNA), vel si inficiatur substantiis quae etiam 260 um ambitum absorbent (eg RNA, interdum, sales), haec methodus limitationes suas attinget.In casu demissionibus valde demissis, lectiones cito nimis inaccurate erunt ut usui sint, et contaminationes (interdum enormitatis) aestimationem in pretio habebunt.In hoc casu, quantitas fluorescentiae utens jocus potest exhibere.Haec ars in usu tingeris fluorescentis fundatur, quae specie dsDNA adstringit solum complexum, quod acidi nucleici comprehendens et tinctura luce excitatur, et postea lucem paulo altioris necem lucebit.Hic, intensio signorum fluorescentium quantitatem DNA proportionalis est, et ad determinandum intentionem aestimatur quoad curvam vexillum.Commoda huius methodi incumbunt in vinculi specificitate, quae externas influxus contagione introductas excludit, tum etiam in facultate consequendi concentrationes DNA nimis humiles deprehendendi.Utriusque methodi convenientia maxime dependet ab intentione specimen et puritatem;in multis etiam in parallelis methodis utramque adhibere visum est.
Post tempus: Nov-30-2022