Paapaa botilẹjẹpe ni imọ-jinlẹ, moleku awoṣe kan yoo to, iye DNA ti o tobi pupọ ni a lo nigbagbogbo fun PCR Ayebaye, fun apẹẹrẹ, to 1 μg ti DNA mammalian genomic ati diẹ bi 1 pg ti DNA plasmid.Iye to dara julọ gbarale pupọ julọ lori nọmba awọn ẹda ti ọkọọkan ibi-afẹde, ati lori idiju rẹ.
Ti a ba lo awoṣe kekere pupọ, ilosoke ti o baamu ni nọmba awọn iyipo imudara yoo nilo lati gba iye ọja to to.A Taq polymerase ti a lo fun ọpọlọpọ awọn adanwo PCR ko ṣe ẹya iṣẹ atunṣe (3'-5' iṣẹ exonuclease);bayi, awọn aṣiṣe ti o waye lakoko imudara ko le ṣe atunṣe.Nọmba ti awọn iyipo ti o ga julọ, imudara ọja ti o ni abawọn yoo jẹ diẹ sii.Ti, ni ida keji, iye awoṣe ti ga ju, iṣeeṣe ti awọn alakoko annealing si miiran (kii ṣe idamẹrin ọgọrun kan) awọn ilana, bakanna bi dida awọn dimers alakoko, yoo pọ si, eyiti yoo ja si imudara ti nipasẹ-ọja.Ni ọpọlọpọ igba, DNA ti ya sọtọ lati awọn aṣa sẹẹli tabi lati awọn microorganisms ati lẹhinna lo bi awoṣe PCR.Lẹhin ìwẹnumọ, o jẹ dandan lati pinnu ifọkansi ti DNA lati ni anfani lati ṣalaye iwọn didun ti o nilo fun iṣeto PCR.Lakoko ti agarose gel electrophoresis le ṣe iranlọwọ lati pese iṣiro, ọna yii ko jina si deede.UV-Vis spectrophotometry ni a ti fi idi mulẹ gẹgẹbi iwọn goolu fun titobi awọn acids nucleic;taara yii ati nitorinaa rọrun ati ọna iyara ṣe iwọn gbigba ti ayẹwo ni 260 nm, ati pe a ṣe iṣiro ifọkansi pẹlu iranlọwọ ti ifosiwewe iyipada.
Ti ifọkansi DNA ba kere pupọ, sibẹsibẹ (<1 µg/mL dsDNA), tabi ti o ba ti doti pẹlu awọn nkan ti o tun fa ni iwọn 260 nm (fun apẹẹrẹ RNA, protein, iyọ), ọna yii yoo de awọn idiwọn rẹ.Ninu ọran ti awọn ifọkansi ti o kere pupọ, awọn iwe kika yoo di aiṣedeede pupọ lati jẹ lilo, ati pe awọn idoti yoo ja si (nigbakugba nla) overestimation ti iye gangan.Ni idi eyi, iwọn lilo fluorescence le ṣe afihan yiyan.Ilana yii da lori lilo awọ Fuluorisenti kan ti o so ni pato si dsDNA nikan eka ti o ni acid nucleic ati dai ni itara nipasẹ ina, ati pe yoo ṣe itusilẹ ina ti iwọn gigun diẹ ti o ga julọ.Nibi, awọn kikankikan ti awọn Fuluorisenti ifihan agbara ni iwon si iye ti DNA, ati fun ti npinnu awọn fojusi ti o ti wa ni akojopo ni ibatan si a boṣewa ti tẹ.Awọn anfani ti ọna yii da lori iyasọtọ ti mnu, eyiti o yọkuro awọn ipa ita ti a ṣe nipasẹ ibajẹ, bakannaa lori agbara abajade lati rii awọn ifọkansi kekere ti DNA.Ibamu ti ọna boya da lori ipilẹ ifọkansi ati mimọ;ni ọpọlọpọ igba o le paapaa ni imọran lati lo awọn ọna mejeeji ni afiwe.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu kọkanla-30-2022