ווי פיל מוסטער זאָל מיר לייגן צו מיין פּקר רעאַקציע?

כאָטש אין טעאָריע, איין מאָלעקולאַר פון די מוסטער וואָלט זיין גענוג, פיל גרעסערע אַמאַונץ פון דנאַ זענען טיפּיקלי געניצט פֿאַר אַ קלאַסיש פּקר, למשל, אַרויף צו 1 μג פון גענאָמיק מאַממאַליאַן דנאַ און ווי קליין ווי 1 פּג פון פּלאַזמיד דנאַ.די אָפּטימאַל סומע דעפּענדס לאַרגעלי אויף די נומער פון עקזעמפלארן פון די ציל סיקוואַנס, ווי געזונט ווי אויף זייַן קאַמפּלעקסיטי.

אויב זייער קליין מוסטער איז געניצט, אַ קאָראַספּאַנדינג פאַרגרעסערן אין די נומער פון אַמפּלאַפאַקיישאַן סייקאַלז וועט זיין דארף צו באַקומען אַ גענוג סומע פון ​​פּראָדוקט.א טאַק פּאָלימעראַסע וואָס איז געניצט פֿאַר רובֿ פּקר יקספּעראַמאַנץ טוט נישט האָבן אַ קערעקשאַן פֿונקציע (3′-5′ עקסאָנוקלעאַסע טעטיקייט);אזוי, ערראָרס געשעעניש בעשאַס אַמפּלאַפאַקיישאַן קענען ניט זיין קערעקטאַד.די העכער די נומער פון סייקאַלז, די מער פאַרשפּרייטונג די אַמפּלאַפאַקיישאַן פון פלאַד פּראָדוקט וועט זיין.אויב, אויף די אנדערע האַנט, די סומע פון ​​​​טעמפּלאַטע איז צו הויך, די מאַשמאָעס פון אָנפאַנגער אַנילינג צו אנדערע (ניט דערט פּראָצענט פּאָזיטיוו) סיקוואַנסיז, ווי געזונט ווי די פאָרמירונג פון אָנפאַנגער דימערז, וועט פאַרגרעסערן, וואָס וועט רעזולטאַט אין אַמפּלאַפאַקיישאַן פון ביי-פּראָדוקטן.אין פילע קאַסעס, דנאַ איז אפגעזונדערט פון צעל קאַלטשערז אָדער פֿון מייקראָואָרגאַניזאַמז און דערנאָך געוויינט ווי אַ פּקר מוסטער.נאָך רייניקונג, עס איז נייטיק צו באַשטימען די קאַנסאַנטריישאַן פון די דנאַ צו קענען צו דעפינירן דעם באַנד וואָס איז פארלאנגט פֿאַר די פּקר סעטאַפּ.בשעת אַגאַראָסע געל עלעקטראָפאָרעסיס קען דינען צו צושטעלן אַן אָפּשאַצונג, דעם אופֿן איז ווייַט פון פּינטלעך.UV-Vis ספּעקטראָפאָטאָמעטרי איז געגרינדעט ווי דער גאָלד סטאַנדאַרט פֿאַר די קוואַנטיפיקאַטיאָן פון נוקלעיק אַסאַדז;דעם דירעקט און דעריבער גרינג און שנעל אופֿן מעסטן די אַבזאָרבאַנס פון די מוסטער ביי 260 נם, און די קאַנסאַנטריישאַן איז קאַלקיאַלייטיד מיט די קאַנווערזשאַן פאַקטאָר.

אויב די דנאַ קאַנסאַנטריישאַן איז זייער נידעריק, אָבער (<1 μg/mL dsDNA), אָדער אויב עס איז קאַנטאַמאַנייטאַד מיט סאַבסטאַנסיז וואָס אויך אַרייַנציען אין די 260 נם קייט (למשל רנאַ, פּראָטעין, סאָלץ), דעם אופֿן וועט דערגרייכן זייַן לימיטיישאַנז.אין פאַל פון זייער נידעריק קאַנסאַנטריישאַנז, די רידינגז וועט באַלד ווערן צו ומפּינקטלעך צו זיין פון נוצן, און קאַנטאַמאַניישאַנז וועט פירן צו (מאל ריזיק) אָוווערעסטאַמיישאַן פון די פאַקטיש ווערט.אין דעם פאַל, קוואַנטיפיקאַטיאָן ניצן פלואָרעססענסע קען פאָרשטעלן אַן אנדער ברירה.די טעכניק איז באזירט אויף די נוצן פון אַ פלורעסאַנט פאַרב וואָס ביינדז ספּאַסיפיקלי צו dsDNA בלויז די קאָמפּלעקס וואָס קאַמפּרייזיז נוקלעיק זויער און פאַרב איז יקסייטאַד דורך די ליכט, און עס וועט דערנאָך אַרויסלאָזן ליכט פון אַ ביסל העכער ווייוולענגט.דאָ, די ינטענסיטי פון די פלורעסאַנט סיגנאַל איז פּראַפּאָרשאַנאַל צו די סומע פון ​​דנאַ, און פֿאַר דיטערמאַנינג די קאַנסאַנטריישאַן עס איז עוואַלואַטעד אין באַציונג צו אַ נאָרמאַל ויסבייג.די אַדוואַנטידזשיז פון דעם אופֿן זענען באזירט אויף די ספּעציפֿישקייט פון די בונד, וואָס יקסקלודז די פונדרויסנדיק ינפלואַנסיז ינטראָודוסט דורך קאַנטאַמאַניישאַן, ווי געזונט ווי אויף די ריזאַלטינג פיייקייט צו דעטעקט זייער נידעריק קאַנסאַנטריישאַנז פון דנאַ.די סוטאַביליטי פון יעדער אופֿן דעפּענדס דער הויפּט אויף מוסטער קאַנסאַנטריישאַן און ריינקייַט;אין פילע פאלן, עס קען אפילו זיין קעדייַיק צו צולייגן ביידע מעטהאָדס אין פּאַראַלעל.