Leha ho ea ka khopolo-taba, molek'hule e le 'ngoe ea thempleite e tla lekana, palo e kholoanyane ea DNA hangata e sebelisoa bakeng sa PCR ea khale, mohlala, ho fihla ho 1 µg ea DNA ea mammalian ea genomic le hanyenyane joalo ka 1 pg ea plasmid DNA.Chelete e nepahetseng e itšetlehile haholo ka palo ea likopi tsa tatellano ea sepheo, hammoho le ho rarahana ha eona.
Haeba ho sebelisoa thempleite e nyane haholo, ho tla hlokahala keketseho e tsamaellanang palong ea lipotoloho tsa amplification ho fumana palo e lekaneng ea sehlahisoa.Taq polymerase e sebelisoang bakeng sa liteko tse ngata tsa PCR ha e na mosebetsi oa ho lokisa (3'-5′ mosebetsi oa exonuclease);ka hona, liphoso tse hlahang nakong ea ho holisa li ke ke tsa lokisoa.Ha palo ea lipotoloho e phahame, ke moo keketseho ea sehlahisoa se nang le liphoso e tla ata haholo.Haeba, ka lehlakoreng le leng, palo ea template e phahame haholo, monyetla oa li-primers annealing ho tse ling (eseng karolo ea lekholo lekholong) tatellano, hammoho le ho thehoa ha li-primer dimers, li tla eketseha, tse tla fella ka ho holisa ka lihlahisoa.Maemong a mangata, DNA e qheleloa ka thoko ho litloaelo tsa lisele kapa ho likokoana-hloko ebe e sebelisoa e le template ea PCR.Ka mor'a tlhoekiso, hoa hlokahala ho tseba hore na DNA e hokae ho khona ho hlalosa molumo o hlokahalang bakeng sa ho seta PCR.Le hoja agarose gel electrophoresis e ka thusa ho fana ka khakanyo, mokhoa ona o hole le ho nepahala.UV-Vis spectrophotometry e thehiloe e le tekanyetso ea khauta bakeng sa quantification ea nucleic acid;mokhoa ona o tobileng ka hona o bonolo le o potlakileng o lekanya ho monya sampuli ho 260 nm, 'me mahloriso a baloa ka thuso ea phetoho ea phetoho.
Haeba mahloriso a DNA a le tlase haholo, leha ho le joalo (< 1 µg/mL dsDNA), kapa haeba e silafalitsoe ke lintho tse monyang le 260 nm range (mohlala, RNA, protein, salts), mokhoa ona o tla fihlela mefokolo ea oona.Tabeng ea likhakanyo tse tlase haholo, haufinyane lipalo li tla fetoha tse sa nepahalang hoo li ka se sebelisoeng, 'me tšilafalo e tla lebisa (ka linako tse ling e le kholo) ho feta tekano ea boleng ba nnete.Tabeng ena, quantification e sebelisa fluorescence e ka fana ka mokhoa o mong.Mokhoa ona o ipapisitse le ts'ebeliso ea dae ea fluorescent e tlamellang ka ho khetheha ho dsDNA feela e rarahaneng e nang le asiti ea nucleic le dae e hlasimolohileng ke khanya, 'me ka mor'a moo e tla hlahisa khanya ea bolelele bo holimo hanyane.Mona, matla a lets'oao la fluorescent a lekana le palo ea DNA, 'me bakeng sa ho lekola mahloriso a hlahlojoa mabapi le lekhalo le tloaelehileng.Melemo ea mokhoa ona e itšetlehile ka ho khetheha ha tlamo, e sa kenyelletseng tšusumetso e ka ntle e hlahisoang ke tšilafalo, hammoho le bokhoni bo hlahisoang ba ho lemoha likhahla tse tlaase haholo tsa DNA.Ho tshwaneleha ha mokgwa ofe kapa ofe ho itshetlehile haholo hodima sampole ya mahloriso le bohlweki;maemong a mangata ho ka ba molemo ho sebelisa mekhoa e 'meli ka nako e tšoanang.
Nako ea poso: Nov-30-2022