Ego ole ka template ka anyị ga-agbakwunye na mmeghachi omume PCR m?

Ọ bụ ezie na na tiori, otu molekul nke template ahụ ga-ezuru, a na-ejikarị DNA buru ibu maka PCR kpochapụwo, dịka ọmụmaatụ, ruo 1 μg nke DNA mammalian genomic na ihe dị ka 1 pg nke DNA plasmid. Ọnụ ego kacha mma na-adabere n'ụzọ dị ukwuu na ọnụọgụ nke mbipụta nke usoro ebumnuche, yana na mgbagwoju anya ya.

Ọ bụrụ na ejiri obere ndebiri mee ihe, ọ ga-adị mkpa ka mmụba kwekọrọ na ọnụ ọgụgụ okirikiri nkwalite iji nweta oke ngwaahịa zuru oke. A Taq polymerase nke a na-eji maka ọtụtụ nyocha PCR adịghị arụ ọrụ mgbazi (ọrụ 3'-5' exonuclease); yabụ, enweghị ike idozi njehie na-eme n'oge mmụba. Ọnụ ọgụgụ nke okirikiri dị elu, ka mmụba nke ngwaahịa nwere ntụpọ ga-adị. Ọ bụrụ na, n'aka nke ọzọ, ọnụ ọgụgụ nke template dị oke elu, ohere nke primers annealing na ndị ọzọ (ọ bụghị otu narị pasent ekele) usoro, yana nhazi nke primer dimers, ga-abawanye, nke ga-eme ka mmụba nke ngwaahịa. N'ọtụtụ ọnọdụ, DNA dịpụrụ adịpụ na omenala cell ma ọ bụ site na microorganisms wee jiri ya mee ihe dịka ndebiri PCR. Na-esote nchacha, ọ dị mkpa iji chọpụta ntinye nke DNA iji nwee ike ịkọwapụta olu achọrọ maka nhazi PCR. Ọ bụ ezie na agarose gel electrophoresis nwere ike inye atụmatụ, usoro a abụghị eziokwu. Emebela UV-Vis spectrophotometry dị ka ọkọlọtọ ọla edo maka ọnụọgụ nucleic acid; Nke a kpọmkwem na ya mere dị mfe na ngwa ngwa usoro jikoro absorbance nke sample na 260 nm, na ịta na-gbakọọ na-enyemaka nke a ntughari ihe.

Ọ bụrụ na ntinye DNA dị ntakịrị, Otú ọ dị (<1 µg/mL dsDNA), ma ọ bụ ọ bụrụ na ejiri ihe ndị na-etinye aka na 260 nm (dịka RNA, protein, salts), usoro a ga-eru oke ya. N'ihe gbasara mkpokọta dị ala, n'oge na-adịghị anya, agụ ga-abụ nke na-ezighi ezi iji mee ihe, na mmetọ ga-eduga na (mgbe ụfọdụ nnukwu) oke uru nke uru ahụ n'ezie. N'okwu a, ọnụọgụ n'iji fluorescence nwere ike iwepụta ihe ọzọ. Usoro a gbadoro ụkwụ na iji akwa fluorescent na-ejikọta kpọmkwem na dsDNA naanị mgbagwoju anya nke nwere nucleic acid na agba na-enwe obi ụtọ site na ìhè, ọ ga-emesịa na-amụnye ìhè nke obere ifegharị dị elu. N'ebe a, ike nke mgbaàmà fluorescent na-adaba na ọnụọgụ DNA, na maka ikpebi ntinye ya, a na-enyocha ya na usoro ọkọlọtọ. Uru nke usoro a dabere na nkọwapụta nke njikọ ahụ, nke na-ewepụ mmetụta mpụga sitere na mmetọ butere, yana n'ikike a na-enweta iji chọpụta mkpokọta DNA dị obere. Kwesịrị ekwesị nke usoro ọ bụla na-adabere karịsịa na nlele nlele na ịdị ọcha; n'ọtụtụ ọnọdụ, ọ nwere ike ịdị mma ka itinye usoro abụọ ahụ n'otu oge.