که څه هم په تیوري کې، د ټیمپلیټ یو مالیکول به کافي وي، د DNA خورا لوی مقدار معمولا د کلاسیک PCR لپاره کارول کیږي، د مثال په توګه، د جینومیک تی لرونکو DNA تر 1 µg پورې او د پلازمیډ DNA تر 1 pg پورې. غوره اندازه په لویه کچه د هدف ترتیب د کاپيونو شمیر پورې اړه لري، او همدارنګه د هغې پیچلتیا پورې اړه لري.
که چیرې ډیر لږ ټیمپلیټ وکارول شي، نو د کافي مقدار محصول ترلاسه کولو لپاره به د امپلیفیکیشن دورې شمیر کې ورته زیاتوالي ته اړتیا وي. یو ټاک پولیمریز چې د ډیری PCR تجربو لپاره کارول کیږي د سمون فعالیت (3′-5′ exonuclease فعالیت) نلري؛ په دې توګه، د امپلیفیکیشن پرمهال رامینځته شوي غلطۍ نشي سم کیدی. د دورې شمیر څومره لوړ وي، د نیمګړتیا لرونکي محصول امپلیفیکیشن به ډیر عام وي. که له بلې خوا، د ټیمپلیټ اندازه ډیره لوړه وي، د پرائمرونو د نورو (سل سلنه بشپړونکي نه) ترتیبونو سره د انیل کولو احتمال، او همدارنګه د پرائمر ډیمرونو رامینځته کیدو احتمال به ډیر شي، کوم چې به د فرعي محصولاتو امپلیفیکیشن پایله ولري. په ډیری قضیو کې، DNA د حجرو کلتورونو یا مایکرو ارګانیزمونو څخه جلا کیږي او وروسته د PCR ټیمپلیټ په توګه کارول کیږي. د پاکولو وروسته، دا اړینه ده چې د DNA غلظت وټاکي ترڅو وکولی شي هغه حجم تعریف کړي چې د PCR تنظیم لپاره اړین دی. پداسې حال کې چې د اګاروز جیل الیکټروفوریسس ممکن د اټکل چمتو کولو لپاره خدمت وکړي، دا طریقه له دقیق څخه لرې ده. د UV-Vis سپیکٹروفوټومیټري د نیوکلیک اسیدونو د اندازې لپاره د سرو زرو معیار په توګه رامینځته شوی؛ دا مستقیم او له همدې امله اسانه او چټکه طریقه د نمونې جذب په 260 nm کې اندازه کوي، او غلظت د تبادلې فکتور په مرسته محاسبه کیږي.
که چیرې د DNA غلظت ډیر ټیټ وي، په هرصورت (< 1 µg/mL dsDNA)، یا که دا د هغو موادو سره ککړ وي چې د 260 nm حد کې هم جذب کیږي (د بیلګې په توګه RNA، پروټین، مالګې)، دا طریقه به خپلو محدودیتونو ته ورسیږي. د ډیر ټیټ غلظت په صورت کې، لوستل به ډیر ژر د کارولو لپاره ډیر غلط شي، او ککړتیا به د اصلي ارزښت (کله ناکله خورا لوی) ډیر اټکل لامل شي. پدې حالت کې، د فلوروسینس په کارولو سره اندازه کول ممکن یو بدیل وړاندې کړي. دا تخنیک د فلوروسینټ رنګ کارولو پراساس دی چې په ځانګړي ډول د dsDNA سره تړلی دی یوازې هغه پیچلی چې نیوکلیک اسید او رنګ لري د رڼا لخوا هڅول کیږي، او دا به وروسته د یو څه لوړ طول موج رڼا خپروي. دلته، د فلوروسینټ سیګنال شدت د DNA مقدار سره متناسب دی، او د غلظت ټاکلو لپاره دا د معیاري منحني په تړاو ارزول کیږي. د دې میتود ګټې د بانډ ځانګړتیا پورې اړه لري، کوم چې د ککړتیا لخوا معرفي شوي بهرني نفوذ خارجوي، او همدارنګه د DNA د خورا ټیټ غلظت کشف کولو پایله لرونکي وړتیا باندې. د دواړو میتودونو مناسبیت په عمده توګه د نمونې غلظت او پاکوالي پورې اړه لري؛ په ډیری مواردو کې دا ممکن مشوره وي چې دواړه میتودونه په موازي ډول پلي کړئ.
د پوسټ وخت: نومبر-۳۰-۲۰۲۲