Er y byddai un moleciwl o'r templed yn ddigonol mewn theori, defnyddir symiau llawer mwy o DNA fel arfer ar gyfer PCR clasurol, er enghraifft, hyd at 1 µg o DNA mamalaidd genomig a chyn lleied ag 1 pg o DNA plasmid. Mae'r swm gorau posibl yn dibynnu'n fawr ar nifer y copïau o'r dilyniant targed, yn ogystal ag ar ei gymhlethdod.
Os defnyddir ychydig iawn o dempled, bydd angen cynnydd cyfatebol yn nifer y cylchoedd ymhelaethu i gael digon o gynnyrch. Nid oes gan bolymeras Taq a ddefnyddir ar gyfer y rhan fwyaf o arbrofion PCR swyddogaeth gywiro (gweithgaredd exoniwcleas 3′-5′); felly, ni ellir cywiro gwallau sy'n digwydd yn ystod yr ymhelaethu. Po uchaf yw nifer y cylchoedd, y mwyaf cyffredin fydd ymhelaethu cynnyrch diffygiol. Os, ar y llaw arall, mae faint o dempled yn rhy uchel, bydd y tebygolrwydd y bydd primerau'n anelio i ddilyniannau eraill (nid cant y cant yn gyflenwol), yn ogystal â ffurfio dimerau primer, yn cynyddu, a fydd yn arwain at ymhelaethu sgil-gynhyrchion. Mewn llawer o achosion, caiff DNA ei ynysu o ddiwylliannau celloedd neu o ficro-organebau ac yna ei ddefnyddio fel templed PCR. Ar ôl puro, mae angen pennu crynodiad y DNA er mwyn gallu diffinio'r gyfaint sydd ei angen ar gyfer y gosodiad PCR. Er y gall electrofforesis gel agaros ddarparu amcangyfrif, mae'r dull hwn ymhell o fod yn gywir. Mae sbectroffotometreg UV-Vis wedi'i sefydlu fel y safon aur ar gyfer meintioli asidau niwclëig; Mae'r dull uniongyrchol ac felly hawdd a chyflym hwn yn mesur amsugnedd y sampl ar 260 nm, a chyfrifir crynodiad gyda chymorth ffactor trosi.
Os yw crynodiad y DNA yn isel iawn, fodd bynnag (< 1 µg/mL dsDNA), neu os yw wedi'i halogi â sylweddau sydd hefyd yn amsugno yn yr ystod 260 nm (e.e. RNA, protein, halwynau), bydd y dull hwn yn cyrraedd ei gyfyngiadau. Yn achos crynodiadau isel iawn, bydd y darlleniadau'n fuan yn rhy anghywir i fod o ddefnydd, a bydd halogiadau'n arwain at oramcangyfrif (weithiau'n enfawr) o'r gwerth gwirioneddol. Yn yr achos hwn, gall meintioli gan ddefnyddio fflwroleuedd gyflwyno dewis arall. Mae'r dechneg hon yn seiliedig ar ddefnyddio llifyn fflwroleuol sy'n rhwymo'n benodol i dsDNA; dim ond y cymhlyg sy'n cynnwys asid niwclëig a llifyn sy'n cael ei gyffroi gan y golau, a bydd yn allyrru golau o donfedd ychydig yn uwch wedyn. Yma, mae dwyster y signal fflwroleuol yn gymesur â faint o DNA, ac ar gyfer pennu'r crynodiad caiff ei werthuso mewn perthynas â chromlin safonol. Mae manteision y dull hwn yn dibynnu ar benodolrwydd y bond, sy'n eithrio'r dylanwadau allanol a gyflwynir gan halogiad, yn ogystal ag ar y gallu canlyniadol i ganfod crynodiadau isel iawn o DNA. Mae addasrwydd y naill ddull neu'r llall yn dibynnu'n bennaf ar grynodiad a phurdeb y sampl; mewn llawer o achosion efallai y byddai hyd yn oed yn ddoeth defnyddio'r ddau ddull ar yr un pryd.
Amser postio: Tach-30-2022