Standardizimi i proceseve përfshin optimizimin e tyre dhe më pas vendosjen e harmonizimin, duke lejuar performancë optimale afatgjatë - të pavarur nga përdoruesi. Standardizimi siguron rezultate me cilësi të lartë, si dhe riprodhueshmërinë dhe krahasueshmërinë e tyre.
Qëllimi i PCR (klasik) është gjenerimi i një rezultati të besueshëm dhe të riprodhueshëm. Për aplikime të caktuara, rendimenti iProdukti i PCR-sëështë gjithashtu e rëndësishme. Për këto reaksione, duhet të tregohet kujdes për të siguruar që mostrat të mos kompromentohen dhe që rrjedha e punës së PCR të mbetet e qëndrueshme. Në mënyrë specifike, kjo përkthehet në minimizimin e futjes së ndotjeve që mund të çojnë në rezultate të rreme pozitive ose negative ose edhe të pengojnë reaksionin e PCR. Për më tepër, kushtet e reaksionit duhet të jenë sa më identike të jetë e mundur për secilën mostër individuale brenda një serie dhe gjithashtu të jenë të transferueshme në reaksionet pasuese (të së njëjtës metodë). Kjo i referohet përbërjes së reaksioneve, si dhe llojit të kontrollit të temperaturës në ciklizues. Gabimet e përdoruesit, sigurisht, duhet të shmangen sa më shumë që të jetë e mundur.
Më poshtë, do të demonstrojmë sfidat që hasen gjatë përgatitjes dhe gjatë gjithë ekzekutimit të një PCR - dhe qasjet ndaj zgjidhjeve që ekzistojnë në lidhje me instrumentet dhe materialet e konsumueshme të përdorura për standardizimin e rrjedhave të punës së PCR.
Përgatitja e reagimit
Shpërndarja e komponentëve të reaksionit në enët e PCR-së, ose përkatësisht në pllaka, përfshin sfida të shumta që duhen kapërcyer:
Kushtet e reagimit
Dozimi i saktë dhe preciz i përbërësve individualë është i domosdoshëm kur synohet të arrihen kushtet më identike të mundshme të reagimit. Përveç një teknike të mirë të pipetimit, zgjedhja e mjetit të duhur është thelbësore. Përzierjet kryesore të PCR shpesh përmbajnë substanca që rrisin viskozitetin ose gjenerojnë shkumë. Gjatë procesit të pipetimit, këto çojnë në lagie të konsiderueshme tëmajat e pipetave, duke zvogëluar kështu saktësinë e pipetimit. Përdorimi i sistemeve të shpërndarjes direkte ose majave alternative të pipetave që janë më pak të prirura ndaj lagies mund të përmirësojë saktësinë dhe precizitetin e procesit të pipetimit.
Kontaminime
Gjatë procesit të shpërndarjes, gjenerohen aerosole të cilat, nëse lejohen të arrijnë brenda pipetës, mund të kontaminojnë një mostër tjetër gjatë hapit tjetër të pipetimit. Kjo mund të parandalohet duke përdorur maja filtri ose sisteme zhvendosjeje të drejtpërdrejtë.
Materiale të konsumueshme si p.sh.këshilla, enët dhe pllakat që përdoren në rrjedhën e punës së PCR nuk duhet të përmbajnë substanca që kompromentojnë mostrën ose falsifikojnë rezultatin. Këto përfshijnë ADN-në, ADN-të, RNazat dhe frenuesit e PCR-së, si dhe përbërës që mund të rrjedhin nga materiali gjatë reagimit - substanca të njohura si lëndë të rrjedhshme.
Gabim i përdoruesit
Sa më shumë mostra të përpunohen, aq më i lartë është rreziku i gabimit. Mund të ndodhë lehtësisht që një mostër të pipetohet në enën e gabuar ose në pusin e gabuar. Ky rrezik mund të reduktohet ndjeshëm duke shënuar lehtësisht pusetat. Përmes automatizimit të hapave të shpërndarjes, "faktori njerëzor", d.m.th., gabimet dhe ndryshimet që lidhen me përdoruesin, minimizohen, duke rritur kështu riprodhueshmërinë, veçanërisht në rastin e vëllimeve të vogla të reagimit. Kjo kërkon që pllaka me stabilitet të mjaftueshëm dimensional të përdoren në një stacion pune. Barkodet e bashkangjitura ofrojnë lexueshmëri shtesë nga makina, gjë që thjeshton gjurmimin e mostrës gjatë gjithë procesit.
Programimi i termociklit
Programimi i një instrumenti mund të jetë kohë-kërkues, si dhe i prirur ndaj gabimeve. Karakteristikat e ndryshme të ciklit termik PCR punojnë së bashku për të thjeshtuar këtë hap të procesit dhe, më e rëndësishmja, për ta bërë atë të sigurt:
Funksionimi i lehtë dhe udhëzimet e mira për përdoruesit janë baza e programimit efikas. Duke u bazuar në këtë themel, administrimi i përdoruesit i mbrojtur me fjalëkalim do të parandalojë ndryshimin e programeve të dikujt nga përdorues të tjerë. Nëse janë në përdorim disa ciklues (të të njëjtit lloj), është e dobishme nëse një program mund të transferohet direkt nga një instrument në tjetrin nëpërmjet USB-së ose lidhjes. Softueri kompjuterik mundëson administrimin qendror dhe të sigurt të programeve, të drejtave të përdoruesit dhe dokumenteve në një kompjuter.
Ekzekutimi i PCR-së
Gjatë procesit, ADN-ja amplifikohet në enën e reagimit, ku çdo mostër duhet t'i nënshtrohet kushteve identike dhe konsistente të reagimit. Aspektet e mëposhtme janë të rëndësishme për procesin:
Kontroll i temperaturës
Saktësia e shkëlqyer në kontrollin e temperaturës dhe homogjeniteti i bllokut të ciklit janë baza për kushtëzimin e njëtrajtshëm të temperaturës së të gjitha mostrave. Cilësia e lartë e elementëve të ngrohjes dhe ftohjes (elementët Peltier), si dhe mënyra se si këto janë të lidhura me bllokun, janë faktorët vendimtarë që do të përcaktojnë rrezikun e mospërputhjeve të temperaturës të njohura si "efekti i skajit".
Avullimi
Përqendrimet e përbërësve individualë të reaksionit nuk duhet të ndryshojnë gjatë rrjedhës së reaksionit për shkak të avullimit. Përndryshe, është e mundur që shumë pakProdukti i PCR-sëmund të gjenerohet, ose aspak. Prandaj është thelbësore të minimizohet avullimi duke siguruar një vulë të sigurt. Në këtë rast, kapaku i nxehtë i termociklizuesit dhe vula e enës funksionojnë krah për krah. Opsione të ndryshme vulosjeje janë të disponueshme përPllaka PCR (lidhja: Artikull vulosës), me anë të së cilës vulosja më e mirë arrihet nëpërmjet vulosjes me nxehtësi. Mbyllje të tjera mund të jenë gjithashtu të përshtatshme, për sa kohë që presioni i kontaktit të kapakut të ciklit mund të rregullohet sipas vulosjes së zgjedhur.
Standardizimi i procesit është në vend për të siguruar rezultate të sakta dhe të riprodhueshme në planin afatgjatë. Kjo përfshin mirëmbajtjen e rregullt të pajisjeve për të siguruar që ato të jenë gjithmonë në gjendje të mirë pune. Të gjitha materialet e konsumueshme duhet të jenë të një cilësie të lartë vazhdimisht në të gjitha lotet e prodhuara dhe duhet të garantohet disponueshmëria e tyre e besueshme.
Koha e postimit: 29 nëntor 2022