Stöðlun ferla felur í sér hagræðingu þeirra og síðari stofnun og samhæfingu, sem gerir langtímaákjósanlegan árangur – óháð notanda.Stöðlun tryggir hágæða niðurstöður, sem og endurgerðanleika þeirra og samanburðarhæfni.
Markmið (klassísks) PCR er að búa til áreiðanlega og endurtakanlega niðurstöðu.Fyrir ákveðnar umsóknir, ávöxtun afPCR varaá einnig við.Fyrir þessi viðbrögð verður að gæta þess að sýni séu ekki í hættu og að PCR vinnuflæðið haldist stöðugt.Nánar tiltekið þýðir þetta að lágmarka tilkomu mengunar sem gæti leitt til falskar jákvæðar eða rangar neikvæðar niðurstöður eða jafnvel hamlað PCR viðbrögðum.Ennfremur ættu hvarfaðstæður að vera eins eins og hægt er fyrir hvert einstakt sýni í keyrslu og einnig vera hægt að yfirfæra á síðari hvarf (með sömu aðferð).Hér er átt við samsetningu hvarfanna sem og tegund hitastýringar í hringrásinni.Að sjálfsögðu ber að forðast notendavillur eins og hægt er.
Hér að neðan munum við sýna fram á áskoranirnar sem steðja að við undirbúning og í gegnum keyrslu PCR – og nálgunin að lausnum sem til eru með tilliti til tækja og rekstrarvara sem notuð eru til að staðla PCR verkflæði.
Undirbúningur viðbragða
Afgreiðsla hvarfþátta í PCR-ílát, eða plötur, í sömu röð, samanstendur af mörgum áskorunum sem þarf að sigrast á:
Viðbragðsskilyrði
Nákvæm og nákvæm skömmtun einstakra íhluta er ómissandi þegar stefnt er að eins sams konar hvarfskilyrðum og mögulegt er.Auk góðrar píptutækni er mikilvægt að velja rétt verkfæri.PCR master-blöndur innihalda oft efni sem auka seigju eða mynda froðu.Meðan á pípettunarferlinu stendur leiða þetta til verulegrar bleytu ápípettuábendingar, og dregur þannig úr nákvæmni pípulagningar.Notkun beinskömmtunarkerfa eða annarra pípettutoppa sem eru síður viðkvæm fyrir bleyta getur bætt nákvæmni og nákvæmni píptuferlisins.
Mengun
Á meðan á skömmtunarferlinu stendur myndast úðabrúsa sem, ef þeim er leyft að berast inn í pípettuna, geta hugsanlega mengað annað sýni í næsta pípettunarþrepi.Hægt er að koma í veg fyrir þetta með því að nota síuspár eða bein tilfærslukerfi.
Rekstrarvörur eins ogábendingar, ílát og plötur sem eru notaðar í PCR vinnuflæðinu mega ekki innihalda efni sem koma í veg fyrir sýnið eða falsa niðurstöðuna.Þar á meðal eru DNA, DNasa, RNases og PCR hemlar, svo og efnisþættir sem hugsanlega geta skolað úr efninu við hvarfið – efni sem kallast útskolunarefni.
Notendavilla
Því fleiri sýni sem eru unnin, því meiri er villuhættan.Það getur auðveldlega gerst að sýni sé pípettað í rangt ílát eða rangan brunn.Hægt er að draga verulega úr þessari hættu með auðskiljanlegum merkingum á holunum.Með sjálfvirkni skömmtunarþrepa er „mannlegi þátturinn“, þ.e. villur og notendatengd afbrigði, lágmarkað og eykur þannig endurgerðanleika, sérstaklega þegar um er að ræða lítið hvarfmagn.Þetta krefst þess að plötur með nægilega víddarstöðugleika séu notaðar á vinnustöð.Meðfylgjandi strikamerki veita aukinn læsileika vélarinnar, sem einfaldar sýnishornsrakningu í öllu ferlinu.
Forritun hitahjóls
Forritun tækis getur reynst tímafrekt og villuhætt.Mismunandi PCR hitauppstreymi eiginleikar vinna saman til að einfalda þetta ferli skref og, síðast en ekki síst, til að gera það öruggt:
Auðveld notkun og góð notendaleiðsögn eru undirstaða skilvirkrar forritunar.Byggt á þessum grunni, mun lykilorðsvarin notendastjórnun koma í veg fyrir að eigin forritum sé breytt af öðrum notendum.Ef margir hringrásartæki (af sömu gerð) eru í notkun, er hagkvæmt ef hægt er að flytja forrit beint frá einu hljóðfæri í annað í gegnum USB eða tengingu.Tölvuhugbúnaður gerir miðlæga og örugga umsjón með forritum, notendaréttindum og skjölum á tölvu.
PCR keyrt
Meðan á keyrslunni stendur er DNA magnað upp í hvarfílátinu, þar sem hvert sýni ætti að sæta sömu, samræmdu hvarfskilyrðum.Eftirfarandi þættir skipta máli fyrir ferlið:
Hitastýring
Framúrskarandi nákvæmni í hitastýringu og einsleitni hringrásarblokkarinnar er grundvöllur jafnrar hitastigsmeðferðar allra sýna.Hágæði hitunar- og kælihlutanna (peltier-eininga), sem og hvernig þeir eru tengdir við blokkina, eru afgerandi þættir sem ákvarða hættuna á hitamisræmi sem kallast „brúnáhrif“.
Uppgufun
Styrkur einstakra hvarfþátta ætti ekki að breytast á meðan á hvarfinu stendur vegna uppgufunar.Annars er mögulegt að mjög lítiðPCR varagæti myndast, eða engin.Það er því mikilvægt að lágmarka uppgufun með því að tryggja örugga innsigli.Í þessu tilviki vinna upphitað lok hitahjólsins og innsiglið á skipinu hönd í hönd.Mismunandi þéttingarvalkostir eru í boði fyrirPCR plötur (tengill: Innsigli grein), þar sem besta þéttingin næst með hitaþéttingu.Aðrar lokanir gætu einnig verið hentugar, svo framarlega sem hægt er að stilla snertiþrýsting hjólhjólaloksins að valinni innsigli.
Ferlastöðlun er til staðar til að tryggja nákvæmar og endurtakanlegar niðurstöður til lengri tíma litið.Þetta felur í sér reglulegt viðhald á búnaðinum til að tryggja að hann sé alltaf í góðu ástandi.Allar rekstrarvörur ættu að vera stöðugt hágæða í öllum framleiðslulotum og tryggja þarf áreiðanlegt framboð þeirra.
Pósttími: 29. nóvember 2022