Penyeragaman proses termasuk pengoptimumannya dan penubuhan dan penyelarasan seterusnya, membolehkan prestasi optimum jangka panjang – bebas daripada pengguna.Standardisasi memastikan hasil yang berkualiti tinggi, serta kebolehulangan dan kebolehbandingannya.
Matlamat PCR (klasik) ialah penjanaan hasil yang boleh dipercayai dan boleh dihasilkan semula.Untuk aplikasi tertentu, hasil daripadaproduk PCRjuga relevan.Untuk tindak balas ini, penjagaan mesti diambil untuk memastikan bahawa sampel tidak terjejas dan aliran kerja PCR kekal stabil.Secara khusus, ini diterjemahkan kepada meminimumkan pengenalan pencemaran yang boleh membawa kepada keputusan positif palsu atau negatif palsu atau malah menghalang tindak balas PCR.Tambahan pula, keadaan tindak balas hendaklah sama yang mungkin untuk setiap sampel individu dalam larian dan juga boleh dipindahkan kepada tindak balas berikutnya (daripada kaedah yang sama).Ini merujuk kepada komposisi tindak balas dan juga jenis kawalan suhu dalam kitar.Ralat pengguna, sudah tentu, harus dielakkan sebanyak mungkin.
Di bawah, kami akan menunjukkan cabaran yang dihadapi semasa penyediaan dan sepanjang menjalankan PCR – dan pendekatan kepada penyelesaian yang wujud berkenaan dengan instrumen dan bahan guna guna yang digunakan untuk penyeragaman aliran kerja PCR.
Penyediaan tindak balas
Pemberian komponen tindak balas ke dalam kapal PCR, atau plat, masing-masing terdiri daripada pelbagai cabaran yang mesti diatasi:
Keadaan tindak balas
Dos yang tepat dan tepat bagi setiap komponen adalah amat diperlukan apabila mensasarkan keadaan tindak balas yang paling serupa yang mungkin.Selain teknik pipet yang baik, pemilihan alat yang betul adalah penting.Campuran induk PCR selalunya mengandungi bahan yang meningkatkan kelikatan atau menghasilkan buih.Semasa proses paip, ini membawa kepada pembasahan yang ketarapetua pipet, sekali gus mengurangkan ketepatan paip.Penggunaan sistem pendispensan terus atau petua pipet alternatif yang kurang terdedah kepada pembasahan boleh meningkatkan ketepatan dan ketepatan proses pipet.
Pencemaran
Semasa proses pendispensan, aerosol dijana yang, jika dibenarkan sampai ke bahagian dalam pipet, boleh berpotensi mencemari sampel lain semasa langkah pipet seterusnya.Ini boleh dicegah dengan menggunakan petua penapis atau sistem anjakan terus.
Bahan habis pakai sepertipetua, vesel dan plat yang digunakan dalam aliran kerja PCR tidak boleh mengandungi bahan yang menjejaskan sampel atau memalsukan hasilnya.Ini termasuk DNA, DNases, RNases dan perencat PCR, serta komponen yang berpotensi terlarut daripada bahan semasa tindak balas - bahan yang dikenali sebagai bahan larut lesap.
Ralat pengguna
Lebih banyak sampel diproses, lebih tinggi risiko ralat.Ia boleh berlaku dengan mudah bahawa sampel disalurkan ke dalam bekas yang salah atau telaga yang salah.Risiko ini boleh dikurangkan dengan ketara dengan tanda telaga yang mudah dilihat.Melalui automasi langkah pendispensan, "faktor manusia", iaitu, ralat dan variasi berkaitan pengguna, diminimumkan, sekali gus meningkatkan kebolehulangan, terutamanya dalam kes volum tindak balas yang kecil.Ini memerlukan plat yang mempunyai kestabilan dimensi yang mencukupi untuk digunakan di stesen kerja.Kod bar yang dilampirkan menyediakan kebolehbacaan mesin tambahan, yang memudahkan penjejakan sampel sepanjang keseluruhan proses.
Pengaturcaraan mesin termos
Pengaturcaraan instrumen boleh terbukti memakan masa serta terdedah kepada ralat.Ciri pengitar terma PCR yang berbeza berfungsi bersama untuk memudahkan langkah proses ini dan, yang paling penting, untuk menjadikannya selamat:
Operasi yang mudah dan panduan pengguna yang baik adalah asas pengaturcaraan yang cekap.Berdasarkan asas ini, pentadbiran pengguna yang dilindungi kata laluan akan menghalang program sendiri daripada diubah oleh pengguna lain.Jika berbilang cyclers (daripada jenis yang sama) sedang digunakan, adalah berfaedah jika program boleh dipindahkan terus dari satu instrumen ke instrumen lain melalui USB atau sambungan.Perisian komputer membolehkan pentadbiran berpusat dan selamat bagi program, hak pengguna dan dokumen pada komputer.
larian PCR
Semasa larian, DNA dikuatkan dalam bekas tindak balas, di mana setiap sampel harus tertakluk kepada keadaan tindak balas yang sama dan konsisten.Aspek berikut adalah relevan untuk proses:
Kawalan suhu
Ketepatan yang sangat baik dalam kawalan suhu dan kehomogenan blok cycler adalah asas untuk penyaman suhu sekata bagi semua sampel.Kualiti tinggi elemen pemanasan dan penyejukan (elemen peltier), serta cara ia disambungkan ke blok, adalah faktor penentu yang akan menentukan risiko percanggahan suhu yang dikenali sebagai "kesan tepi"
Penyejatan
Kepekatan komponen tindak balas individu tidak boleh berubah sepanjang tindak balas disebabkan oleh penyejatan.Jika tidak, mungkin sangat sedikitproduk PCRmungkin dihasilkan, atau tiada langsung.Oleh itu, adalah penting untuk meminimumkan penyejatan dengan memastikan pengedap yang selamat.Dalam kes ini, penutup yang dipanaskan dari mesin termosikal dan meterai kapal berfungsi seiring.Pilihan pengedap yang berbeza tersedia untukPlat PCR (pautan: artikel pengedap), di mana pengedap terbaik dicapai melalui pengedap haba.Penutupan lain juga mungkin sesuai, asalkan tekanan sentuhan penutup basikal boleh dilaraskan kepada pengedap yang dipilih.
Penyeragaman proses disediakan untuk melindungi keputusan yang tepat dan boleh dihasilkan semula dalam jangka panjang.Ini termasuk penyelenggaraan tetap peralatan untuk memastikan ia sentiasa dalam keadaan baik.Semua bahan habis pakai mestilah berkualiti tinggi secara konsisten di semua lot yang dihasilkan, dan ketersediaannya yang boleh dipercayai mesti dijamin.
Masa siaran: Nov-29-2022