Стандартызацыя працэсаў ўключае ў сябе іх аптымізацыю і наступнае ўсталяванне і гарманізацыю, што дазваляе доўгатэрміновую аптымальную прадукцыйнасць - незалежна ад карыстальніка.Стандартызацыя забяспечвае высокую якасць вынікаў, а таксама іх узнаўляльнасць і супастаўнасць.
Мэта (класічнай) ПЦР - атрымаць надзейны і ўзнаўляльны вынік.Для некаторых прыкладанняў, выхадПрадукт ПЦРтаксама актуальны.Пры гэтых рэакцыях неабходна сачыць за тым, каб узоры не былі пашкоджаныя і каб працоўны працэс ПЦР заставаўся стабільным.У прыватнасці, гэта азначае звядзенне да мінімуму ўвядзення забруджванняў, якія могуць прывесці да прытворнададатных або прытворнаадмоўных вынікаў або нават затармазіць рэакцыю ПЦР.Акрамя таго, умовы рэакцыі павінны быць максімальна аднолькавымі для кожнага асобнага ўзору ў серыі, а таксама быць прыдатнымі для наступных рэакцый (таго ж метаду).Гэта адносіцца да складу рэакцый, а таксама да тыпу кантролю тэмпературы ў цыклеры.Натуральна, варта пазбягаць памылак карыстальнікаў.
Ніжэй мы прадэманструем праблемы, якія ўзнікаюць падчас падрыхтоўкі і падчас правядзення ПЦР, а таксама падыходы да рашэнняў, якія існуюць у дачыненні да інструментаў і расходных матэрыялаў, якія выкарыстоўваюцца для стандартызацыі працоўных працэсаў ПЦР.
Падрыхтоўка рэакцыі
Дазаванне рэакцыйных кампанентаў у ПЦР-сасуды або пласціны, адпаведна, уключае ў сябе мноства праблем, якія неабходна пераадолець:
Умовы рэакцыі
Дакладнае і дакладнае дазаванне асобных кампанентаў неабходна, калі імкнуцца да максімальна ідэнтычных умоў рэакцыі.У дадатак да добрай тэхнікі піпетавання крытычна важна выбраць правільны інструмент.Майстар-міксы для ПЦР часта ўтрымліваюць рэчывы, якія павялічваюць глейкасць або ўтвараюць пену.У працэсе піпетавання яны прыводзяць да значнага змочваннянаканечнікі піпеткі, што зніжае дакладнасць піпетавання.Выкарыстанне сістэм непасрэднага дазавання або альтэрнатыўных наканечнікаў піпетак, якія менш схільныя да змочвання, можа павысіць дакладнасць і дакладнасць працэсу піпеткі.
Забруджвання
У працэсе дазавання ўтвараюцца аэразолі, якія, калі дасягнуць унутранага боку піпеткі, патэнцыйна могуць забрудзіць іншы ўзор падчас наступнага этапу піпеткі.Гэтага можна прадухіліць, выкарыстоўваючы наканечнікі фільтраў або сістэмы прамога выцяснення.
Расходныя матэрыялы, такія якпарады, посуд і пласціны, якія выкарыстоўваюцца ў працоўным працэсе ПЦР, не павінны ўтрымліваць рэчываў, якія псуюць узор або фальсіфікуюць вынік.Сюды ўваходзяць ДНК, ДНКазы, РНКазы і інгібітары ПЦР, а таксама кампаненты, якія патэнцыйна могуць вымывацца з матэрыялу падчас рэакцыі - рэчывы, вядомыя як вымывальныя рэчывы.
Памылка карыстальніка
Чым больш узораў апрацоўваецца, тым вышэй рызыка памылкі.Лёгка можа здарыцца так, што ўзор будзе нанесены піпеткай не ў той посуд або не ў тую лунку.Гэтую рызыку можна значна знізіць, калі добра заўважыць маркіроўку свідравін.Дзякуючы аўтаматызацыі этапаў дазавання, «чалавечы фактар», г.зн. памылкі і варыяцыі, звязаныя з карыстальнікам, зведзены да мінімуму, што павялічвае ўзнаўляльнасць, асабліва ў выпадку малых аб'ёмаў рэакцыі.Гэта патрабуе пласцін з дастатковай стабільнасцю памераў для выкарыстання ў працоўнай станцыі.Прымацаваныя штрых-коды забяспечваюць дадатковую машыначытальнасць, што спрашчае адсочванне проб на працягу ўсяго працэсу.
Праграмаванне термоциклера
Праграмаванне прыбора можа апынуцца працаёмкім, а таксама схільным да памылак.Розныя функцыі термоциклера ПЦР працуюць разам, каб спрасціць гэты этап працэсу і, самае галоўнае, зрабіць яго бяспечным:
Лёгкае кіраванне і добрае кіраўніцтва карыстальнікам - аснова эфектыўнага праграмавання.Абапіраючыся на гэтую аснову, абароненае паролем адміністраванне карыстальнікаў не дазволіць іншым карыстальнікам змяніць уласныя праграмы.Калі выкарыстоўваецца некалькі цыклераў (аднаго тыпу), будзе выгадна, калі праграма можа быць перанесена непасрэдна з аднаго інструмента на іншы праз USB або злучэнне.Кампутарнае праграмнае забеспячэнне дазваляе цэнтралізаванае і бяспечнае адміністраванне праграм, правоў карыстальнікаў і дакументаў на камп'ютары.
Прагон ПЦР
Падчас прагону ДНК амплифицируется ў рэакцыйнай ёмістасці, дзе кожны ўзор павінен быць падвергнуты ідэнтычным, паслядоўным умовам рэакцыі.Для працэсу важныя наступныя аспекты:
Тэмпературны кантроль
Выдатная дакладнасць кантролю тэмпературы і аднастайнасць блока цыклера з'яўляюцца асновай для раўнамернага тэмпературнага кандыцыянавання ўсіх узораў.Высокая якасць награвальных і астуджальных элементаў (элементаў Пельцье), а таксама спосаб іх злучэння з блокам з'яўляюцца вырашальнымі фактарамі, якія будуць вызначаць рызыку разыходжанняў тэмператур, вядомых як «эфект краю»
Выпарэнне
Канцэнтрацыі асобных кампанентаў рэакцыі не павінны змяняцца на працягу рэакцыі з-за выпарэння.У адваротным выпадку, магчыма, што вельмі малаПрадукт ПЦРможа быць згенераваны або не стварацца наогул.Таму вельмі важна звесці да мінімуму выпарэнне, забяспечыўшы надзейнае ўшчыльненне.У гэтым выпадку нагрэтая вечка термоциклера і ўшчыльненне ёмістасці працуюць рука аб руку.Даступныя розныя варыянты ўшчыльненняПЦР-пласціны (спасылка: Артыкул аб герметызацыі), у выніку чаго найлепшае ўшчыльненне дасягаецца шляхам тэрмічнага зварвання.Іншыя зачынкі таксама могуць быць прыдатнымі, калі кантактны ціск вечка цыклера можна адрэгуляваць у адпаведнасці з абраным ушчыльненнем.
Для забеспячэння дакладных і ўзнаўляемых вынікаў у доўгатэрміновай перспектыве праводзіцца стандартызацыя працэсаў.Гэта ўключае ў сябе рэгулярнае тэхнічнае абслугоўванне абсталявання, каб гарантаваць, што яно заўсёды ў добрым працоўным стане.Усе расходныя матэрыялы павінны быць нязменна высокай якасці ва ўсіх вырабленых партыях, і іх надзейная даступнасць павінна быць гарантавана.
Час публікацыі: 29 лістапада 2022 г