Normalizasyon nan pwosesis gen ladan optimize yo ak etablisman ki vin apre ak amonizasyon, ki pèmèt alontèm pèfòmans optimal - endepandan de itilizatè a.Normalisation asire bon jan kalite rezilta yo, ansanm ak reproductibilité yo ak comparabilité.
Objektif PCR (klasik) se jenerasyon yon rezilta serye ak repwodiktif.Pou sèten aplikasyon, sede a nanpwodwi PCRenpòtan tou.Pou reyaksyon sa yo, yo dwe pran prekosyon pou asire echantiyon yo pa konpwomèt e ke workflow PCR la rete estab.Espesyalman, sa a tradui nan minimize entwodiksyon an nan kontaminasyon ki ta ka mennen nan fo rezilta pozitif oswa fo negatif oswa menm anpeche reyaksyon an PCR.Anplis de sa, kondisyon reyaksyon yo ta dwe idantik ke posib pou chak echantiyon endividyèl nan yon kouri epi tou yo dwe transfere nan reyaksyon ki vin apre (nan menm metòd la).Sa a refere a konpozisyon reyaksyon yo ak kalite kontwòl tanperati a nan sikilasyon an.Erè itilizatè, nan kou, yo dwe evite otank posib.
Anba a, nou pral montre defi yo rankontre pandan preparasyon ak pandan tout kouri nan yon PCR - ak apwòch yo nan solisyon ki egziste yo ki gen rapò ak enstriman ak consommables yo itilize pou normalisation nan workflows PCR yo.
Preparasyon reyaksyon
Distribisyon konpozan reyaksyon nan veso PCR, oswa plak, respektivman, gen plizyè defi ki dwe simonte:
Kondisyon reyaksyon yo
Dòz la egzak ak egzak nan eleman endividyèl yo endispansab lè vize pou kondisyon ki pi idantik reyaksyon posib.Anplis de sa nan yon bon teknik pipèt, chwazi zouti nan dwa se kritik.PCR mèt-melanj yo souvan gen sibstans ki ogmante viskozite oswa jenere kim.Pandan pwosesis la pipette, sa yo mennen nan mouye sibstansyèl nan lakonsèy pipèt, konsa diminye presizyon pipette.Itilizasyon sistèm distribisyon dirèk oswa konsèy pipèt altènatif ki gen mwens tandans mouye ka amelyore presizyon ak presizyon pwosesis pipet la.
Kontaminasyon
Pandan pwosesis distribisyon an, ayewosòl yo pwodwi ki, si yo pèmèt yo rive nan andedan pipèt la, ka potansyèlman kontamine yon lòt echantiyon pandan pwochen etap la pipet.Sa a ka anpeche lè w itilize konsèy filtre oswa sistèm deplasman dirèk.
Consommables tankoukonsèy, veso ak plak ki itilize nan workflow PCR la pa dwe genyen sibstans ki konpwomèt echantiyon an oswa fo rezilta a.Men sa yo enkli ADN, DNases, RNases ak inhibiteurs PCR, osi byen ke eleman ki ka potansyèlman leach soti nan materyèl la pandan reyaksyon an - sibstans ke yo rekonèt kòm leachables.
Erè itilizatè
Plis echantiyon yo trete, se pi gwo risk erè a.Li ka fasilman rive ke yo pipete yon echantiyon nan veso ki mal oswa nan pi bon an.Risk sa a ka redwi konsiderableman lè yo make pi fasil yo.Atravè automatisation nan etap distribisyon, "faktè imen an", sa vle di, erè ak varyasyon ki gen rapò ak itilizatè, yo minimize, kidonk ogmante repwodibilite, espesyalman nan ka ti volim reyaksyon.Sa a mande pou plak ki gen ase estabilite dimansyon yo dwe anplwaye nan yon estasyon travay.Kod bar ki tache bay machin-lizibilite adisyonèl, ki senplifye swiv echantiyon pandan tout pwosesis la.
Pwogramasyon thermocycler la
Pwogramasyon yon enstriman ka pwouve ke yo pran tan epi li gen tandans fè erè.Diferan karakteristik PCR tèmik sikilasyon travay ansanm pou senplifye etap pwosesis sa a epi, sa ki pi enpòtan, fè li an sekirite:
Operasyon fasil ak bon konsèy itilizatè yo se baz pwogramasyon efikas.Bati sou fondasyon sa a, administrasyon itilizatè ki pwoteje pa modpas pral anpeche lòt itilizatè yo chanje pwòp pwogram yo.Si plizyè siklis (nan menm kalite) yo itilize, li benefisye si yon pwogram ka transfere dirèkteman nan yon enstriman nan yon lòt atravè USB oswa koneksyon.Lojisyèl òdinatè pèmèt administrasyon santral ak an sekirite nan pwogram, dwa itilizatè ak dokiman sou yon òdinatè.
PCR kouri
Pandan kouri a, ADN anplifye nan veso reyaksyon an, kote chak echantiyon ta dwe sibi kondisyon reyaksyon ki idantik ak konsistan.Aspè sa yo enpòtan pou pwosesis la:
Kontwòl tanperati
Ekselan presizyon nan kontwòl tanperati ak omojèn nan blòk sikilasyon an se baz pou kondisyone tanperati menm nan tout echantiyon.Bon jan kalite segondè nan eleman chofaj ak refwadisman (eleman peltier), osi byen ke fason sa yo konekte nan blòk la, se faktè ki deside ki pral detèmine risk pou diferans tanperati ke yo rekonèt kòm "efè kwen".
Evaporasyon
Konsantrasyon yo nan eleman reyaksyon endividyèl yo pa ta dwe chanje sou kou a nan reyaksyon an akòz evaporasyon.Sinon, li posib ke anpil ti kraspwodwi PCRka pwodwi, oswa pa gen okenn nan tout.Se poutèt sa, li enpòtan pou minimize evaporasyon lè w asire yon sele ki an sekirite.Nan ka sa a, kouvèti a chofe nan thermocycler la ak sele a nan veso a travay men nan men.Opsyon sele diferan ki disponib pouPlak PCR (lyen: atik sele), kote pi bon sele a reyalize nan sele chalè.Lòt fèmti yo ka apwopriye tou, osi lontan ke presyon an kontak nan kouvèti sikilasyon an ka ajiste nan sele a chwazi.
Pwosesis normalisation an plas pou pwoteje rezilta egzat ak reproductibles alontèm.Sa a gen ladan antretyen regilye nan ekipman an asire ke li toujou nan bon kondisyon travay.Tout consommables yo ta dwe toujou gen bon jan kalite segondè atravè tout lot yo pwodwi, epi disponiblite serye yo dwe garanti.
Tan pòs: 29-Nov-2022