PCR Workflows (ການ​ປັບ​ປຸງ​ຄຸນ​ນະ​ພາບ​ໂດຍ​ຜ່ານ​ການ​ມາດ​ຕະ​ຖານ​)

ມາດຕະຖານຂອງຂະບວນການປະກອບມີການເພີ່ມປະສິດທິພາບແລະການສ້າງຕັ້ງຕໍ່ມາແລະການປະສົມກົມກຽວ, ອະນຸຍາດໃຫ້ປະສິດທິພາບທີ່ດີທີ່ສຸດໃນໄລຍະຍາວ - ບໍ່ຂຶ້ນກັບຜູ້ໃຊ້.ມາດຕະຖານຮັບປະກັນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການແຜ່ພັນແລະການປຽບທຽບຂອງພວກເຂົາ.

ເປົ້າຫມາຍຂອງ (ຄລາສສິກ) PCR ແມ່ນການຜະລິດຜົນໄດ້ຮັບທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ແລະສາມາດແຜ່ພັນໄດ້.ສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກສະເພາະໃດຫນຶ່ງ, ຜົນຜະລິດຂອງຜະລິດຕະພັນ PCRຍັງມີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງ.ສໍາລັບປະຕິກິລິຍາເຫຼົ່ານີ້, ຕ້ອງໄດ້ຮັບການດູແລເພື່ອຮັບປະກັນວ່າຕົວຢ່າງບໍ່ຖືກທໍາລາຍແລະຂະບວນການເຮັດວຽກ PCR ຄົງທີ່.ໂດຍສະເພາະ, ນີ້ຫມາຍຄວາມວ່າການຫຼຸດຜ່ອນການແນະນໍາການປົນເປື້ອນທີ່ສາມາດນໍາໄປສູ່ຜົນໄດ້ຮັບທາງລົບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຫຼືບໍ່ຖືກຕ້ອງຫຼືແມ້ກະທັ້ງຍັບຍັ້ງປະຕິກິລິຍາ PCR.ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, ເງື່ອນໄຂການຕິກິຣິຍາຄວນຈະຄືກັນເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້ສໍາລັບແຕ່ລະຕົວຢ່າງຂອງແຕ່ລະຄົນພາຍໃນໄລຍະຫນຶ່ງແລະຍັງສາມາດໂອນໄປຫາປະຕິກິລິຍາຕໍ່ໄປ (ຂອງວິທີການດຽວກັນ).ນີ້ຫມາຍເຖິງອົງປະກອບຂອງປະຕິກິລິຍາເຊັ່ນດຽວກັນກັບປະເພດຂອງການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມໃນ cycler ໄດ້.ຄວາມຜິດພາດຂອງຜູ້ໃຊ້, ແນ່ນອນ, ຕ້ອງໄດ້ຮັບການຫຼີກເວັ້ນຫຼາຍເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້.

ຂ້າງລຸ່ມນີ້, ພວກເຮົາຈະສະແດງໃຫ້ເຫັນສິ່ງທ້າທາຍທີ່ພົບໃນລະຫວ່າງການກະກຽມແລະຕະຫຼອດໄລຍະຂອງ PCR - ແລະວິທີການແກ້ໄຂບັນຫາທີ່ມີຢູ່ໃນເຄື່ອງມືແລະເຄື່ອງບໍລິໂພກທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການກໍານົດມາດຕະຖານຂອງຂະບວນການເຮັດວຽກ PCR.

ການກະກຽມປະຕິກິລິຍາ

ການແຈກຢາຍອົງປະກອບຕິກິຣິຍາເຂົ້າໄປໃນເຮືອ PCR, ຫຼືແຜ່ນ, ຕາມລໍາດັບ, ປະກອບດ້ວຍສິ່ງທ້າທາຍຫຼາຍຢ່າງທີ່ຕ້ອງໄດ້ຮັບການແກ້ໄຂ:

ເງື່ອນໄຂປະຕິກິລິຍາ

ປະລິມານຢາທີ່ຖືກຕ້ອງແລະຊັດເຈນຂອງສ່ວນປະກອບຂອງແຕ່ລະບຸກຄົນແມ່ນຂາດບໍ່ໄດ້ໃນເວລາທີ່ແນໃສ່ເງື່ອນໄຂຕິກິຣິຍາທີ່ຄ້າຍຄືກັນທີ່ສຸດທີ່ເປັນໄປໄດ້.ນອກເຫນືອໄປຈາກເຕັກນິກການທໍ່ທີ່ດີ, ການເລືອກເຄື່ອງມືທີ່ເຫມາະສົມແມ່ນສໍາຄັນ.PCR master-mixes ເລື້ອຍໆມີສານທີ່ເພີ່ມຄວາມຫນືດຫຼືສ້າງໂຟມ.ໃນ​ລະ​ຫວ່າງ​ການ​ຂະ​ບວນ​ການ pipetting​, ເຫຼົ່າ​ນີ້​ນໍາ​ໄປ​ສູ່​ການ wetting ຢ່າງ​ຫຼວງ​ຫຼາຍ​ຂອງ​ຄໍາແນະນໍາ pipette, ດັ່ງນັ້ນການຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຖືກຕ້ອງ pipetting.ການນໍາໃຊ້ລະບົບການແຜ່ກະຈາຍໂດຍກົງຫຼືຄໍາແນະນໍາ pipette ທາງເລືອກທີ່ມີຄວາມສ່ຽງຫນ້ອຍທີ່ຈະ wetting ສາມາດປັບປຸງຄວາມຖືກຕ້ອງແລະຄວາມແມ່ນຍໍາຂອງຂະບວນການ pipetting ໄດ້.

ການປົນເປື້ອນ

ໃນລະຫວ່າງຂະບວນການແຈກຢາຍ, aerosols ໄດ້ຖືກສ້າງຂື້ນ, ຖ້າອະນຸຍາດໃຫ້ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ທໍ່, ອາດຈະປົນເປື້ອນຕົວຢ່າງອື່ນໃນຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປຂອງທໍ່ທໍ່.ນີ້ສາມາດປ້ອງກັນໄດ້ໂດຍການໃຊ້ຄໍາແນະນໍາການກັ່ນຕອງຫຼືລະບົບການເຄື່ອນຍ້າຍໂດຍກົງ.
ເຄື່ອງບໍລິໂພກເຊັ່ນຄໍາແນະນໍາ, ເຮືອແລະແຜ່ນທີ່ຖືກນໍາໃຊ້ໃນຂະບວນການເຮັດວຽກ PCR ຈະຕ້ອງບໍ່ມີສານທີ່ທໍາລາຍຕົວຢ່າງຫຼືປອມຜົນໄດ້ຮັບ.ເຫຼົ່ານີ້ລວມມີ DNA, DNases, RNases ແລະ PCR inhibitors, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບອົງປະກອບທີ່ອາດຈະ leach ຈາກວັດສະດຸໃນລະຫວ່າງການຕິກິຣິຍາ - ສານທີ່ເອີ້ນວ່າ leachables.

ຜູ້ໃຊ້ຜິດພາດ

ການປະມວນຜົນຕົວຢ່າງຫຼາຍ, ຄວາມສ່ຽງຂອງຄວາມຜິດພາດສູງ.ມັນສາມາດເກີດຂຶ້ນໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍວ່າຕົວຢ່າງຖືກທໍ່ເຂົ້າໄປໃນເຮືອທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຫຼືດີ.ຄວາມສ່ຽງນີ້ສາມາດຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໂດຍການເຮັດເຄື່ອງຫມາຍທີ່ເຫັນໄດ້ຊັດເຈນຂອງນໍ້າສ້າງ.ໂດຍຜ່ານລະບົບອັດຕະໂນມັດຂອງຂັ້ນຕອນການແຈກຢາຍ, "ປັດໄຈຂອງມະນຸດ", ຫມາຍຄວາມວ່າ, ຄວາມຜິດພາດແລະການປ່ຽນແປງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຜູ້ໃຊ້ໄດ້ຖືກຫຼຸດລົງ, ດັ່ງນັ້ນການເພີ່ມການແຜ່ພັນ, ໂດຍສະເພາະໃນກໍລະນີຂອງປະລິມານຕິກິຣິຍາຂະຫນາດນ້ອຍ.ອັນນີ້ຕ້ອງການແຜ່ນທີ່ມີຄວາມຫມັ້ນຄົງດ້ານມິຕິທີ່ພຽງພໍເພື່ອໃຊ້ໃນບ່ອນເຮັດວຽກ.ບາໂຄດທີ່ຕິດຄັດມາໃຫ້ເຄື່ອງອ່ານເພີ່ມເຕີມ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ການຕິດຕາມຕົວຢ່າງງ່າຍຕະຫຼອດຂະບວນການທັງໝົດ.

ການຂຽນໂປລແກລມຂອງ thermocycler

ການຂຽນໂປຣແກຣມເຄື່ອງມືສາມາດພິສູດໄດ້ວ່າໃຊ້ເວລາຫຼາຍເຊັ່ນດຽວກັນກັບຄວາມຜິດພາດ.ຄຸນສົມບັດເຄື່ອງໄຊ້ຄວາມຮ້ອນ PCR ທີ່ແຕກຕ່າງກັນເຮັດວຽກຮ່ວມກັນເພື່ອເຮັດໃຫ້ຂັ້ນຕອນຂະບວນການນີ້ງ່າຍ ແລະ, ສໍາຄັນທີ່ສຸດ, ເພື່ອເຮັດໃຫ້ມັນປອດໄພ:
ການດໍາເນີນງານງ່າຍແລະການຊີ້ນໍາຂອງຜູ້ໃຊ້ທີ່ດີແມ່ນພື້ນຖານຂອງການຂຽນໂປຼແກຼມທີ່ມີປະສິດທິພາບ.ການກໍ່ສ້າງໃນພື້ນຖານນີ້, ການຄຸ້ມຄອງຜູ້ໃຊ້ທີ່ມີລະຫັດຜ່ານປ້ອງກັນຈະປ້ອງກັນບໍ່ໃຫ້ໂປຼແກຼມຂອງຕົນເອງຖືກດັດແປງໂດຍຜູ້ໃຊ້ອື່ນໆ.ຖ້າເຄື່ອງໃຊ້ລົດຖີບຫຼາຍຕົວ (ປະເພດດຽວກັນ), ມັນເປັນປະໂຫຍດຖ້າໂຄງການສາມາດໂອນໂດຍກົງຈາກອຸປະກອນຫນຶ່ງໄປຫາອີກອັນຫນຶ່ງໂດຍຜ່ານ USB ຫຼືການເຊື່ອມຕໍ່.ຊອບ​ແວ​ຄອມ​ພິວ​ເຕີ​ເຮັດ​ໃຫ້​ການ​ບໍ​ລິ​ຫານ​ສູນ​ກາງ​ແລະ​ຄວາມ​ປອດ​ໄພ​ຂອງ​ໂຄງ​ການ​, ສິດ​ທິ​ຂອງ​ຜູ້​ໃຊ້​ແລະ​ເອ​ກະ​ສານ​ໃນ​ຄອມ​ພິວ​ເຕີ​ໄດ້​.

ແລ່ນ PCR

ໃນລະຫວ່າງການແລ່ນ, DNA ໄດ້ຖືກຂະຫຍາຍຢູ່ໃນເຮືອຕິກິຣິຍາ, ບ່ອນທີ່ແຕ່ລະຕົວຢ່າງຄວນໄດ້ຮັບການປະຕິບັດຕາມເງື່ອນໄຂຕິກິຣິຍາທີ່ຄືກັນ.ລັກສະນະຕໍ່ໄປນີ້ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບຂະບວນການ:

ການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມ

ຄວາມ​ຖືກ​ຕ້ອງ​ທີ່​ດີ​ເລີດ​ໃນ​ການ​ຄວບ​ຄຸມ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ແລະ​ຄວາມ​ເປັນ​ເອ​ກະ​ລັກ​ຂອງ​ຕັນ cycler ເປັນ​ພື້ນ​ຖານ​ສໍາ​ລັບ​ການ​ປັບ​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ແມ້​ກະ​ທັ້ງ​ຂອງ​ຕົວ​ຢ່າງ​ທັງ​ຫມົດ​.ຄຸນນະພາບສູງຂອງອົງປະກອບຄວາມຮ້ອນແລະຄວາມເຢັນ (ອົງປະກອບ peltier), ເຊັ່ນດຽວກັນກັບວິທີການເຫຼົ່ານີ້ເຊື່ອມຕໍ່ກັບຕັນ, ແມ່ນປັດໃຈຕັດສິນໃຈທີ່ຈະກໍານົດຄວາມສ່ຽງຂອງຄວາມແຕກຕ່າງຂອງອຸນຫະພູມທີ່ເອີ້ນວ່າ "ຜົນກະທົບຂອງຂອບ".

ການລະເຫີຍ

ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງອົງປະກອບຕິກິຣິຍາແຕ່ລະບຸກຄົນບໍ່ຄວນປ່ຽນແປງໃນໄລຍະເວລາຂອງປະຕິກິລິຍາເນື່ອງຈາກການລະເຫີຍ.ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນ, ມັນເປັນໄປໄດ້ວ່າຫນ້ອຍຫຼາຍຜະລິດຕະພັນ PCRອາດຈະຖືກສ້າງຂື້ນ, ຫຼືບໍ່ມີເລີຍ.ດັ່ງນັ້ນ, ມັນເປັນສິ່ງ ສຳ ຄັນທີ່ຈະຫຼຸດຜ່ອນການລະເຫີຍໃຫ້ໜ້ອຍທີ່ສຸດໂດຍການຮັບປະກັນການປະທັບຕາທີ່ປອດໄພ.ໃນກໍລະນີນີ້, ຝາປິດຄວາມຮ້ອນຂອງເຄື່ອງເຮັດຄວາມຮ້ອນແລະປະທັບຕາຂອງເຮືອເຮັດວຽກຢູ່ໃນມື.ທາງເລືອກການຜະນຶກທີ່ແຕກຕ່າງກັນແມ່ນມີຢູ່ແຜ່ນ PCR (ການເຊື່ອມຕໍ່: ບົດຄວາມການຜະນຶກ), ຊຶ່ງການປະທັບຕາທີ່ດີທີ່ສຸດແມ່ນບັນລຸໄດ້ໂດຍຜ່ານການປະທັບຕາຄວາມຮ້ອນ.ການປິດອື່ນໆອາດຈະເຫມາະສົມ, ຕາບໃດທີ່ຄວາມກົດດັນການຕິດຕໍ່ຂອງ lid cycler ສາມາດປັບໄດ້ກັບປະທັບຕາທີ່ເລືອກ.

ມາດຕະຖານຂະບວນການແມ່ນຢູ່ໃນສະຖານທີ່ເພື່ອປົກປ້ອງຜົນໄດ້ຮັບທີ່ຖືກຕ້ອງແລະສາມາດແຜ່ພັນໄດ້ໃນໄລຍະຍາວ.ນີ້ປະກອບມີການບໍາລຸງຮັກສາອຸປະກອນເປັນປົກກະຕິເພື່ອຮັບປະກັນວ່າມັນຢູ່ໃນສະພາບທີ່ເຮັດວຽກດີສະເຫມີ.ເຄື່ອງບໍລິໂພກທັງໝົດຄວນມີຄຸນນະພາບສູງຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງໃນທົ່ວທຸກອັນທີ່ຜະລິດ, ແລະຄວາມພ້ອມທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ຂອງພວກມັນຕ້ອງໄດ້ຮັບການຮັບປະກັນ.

 


ເວລາປະກາດ: 29-11-2022