L-istandardizzazzjoni tal-proċessi tinkludi l-ottimizzazzjoni tagħhom u l-istabbiliment u l-armonizzazzjoni sussegwenti, li jippermettu prestazzjoni ottimali fit-tul - indipendenti mill-utent.L-istandardizzazzjoni tiżgura riżultati ta' kwalità għolja, kif ukoll ir-riproduċibbiltà u l-komparabbiltà tagħhom.
L-għan tal-PCR (klassiku) huwa l-ġenerazzjoni ta 'riżultat affidabbli u riproduċibbli.Għal ċerti applikazzjonijiet, ir-rendiment tal-prodott PCRhija rilevanti wkoll.Għal dawn ir-reazzjonijiet, trid tingħata attenzjoni biex jiġi żgurat li l-kampjuni ma jiġux kompromessi u li l-fluss tax-xogħol tal-PCR jibqa’ stabbli.Speċifikament, dan jittraduċi biex tiġi minimizzata l-introduzzjoni ta 'kontaminazzjonijiet li jistgħu jwasslu għal riżultati pożittivi foloz jew negattivi foloz jew saħansitra jinibixxu r-reazzjoni tal-PCR.Barra minn hekk, il-kundizzjonijiet tar-reazzjoni għandhom ikunu identiċi kemm jista' jkun għal kull kampjun individwali f'ġirja u jkunu wkoll trasferibbli għal reazzjonijiet sussegwenti (ta' l-istess metodu).Dan jirreferi għall-kompożizzjoni tar-reazzjonijiet kif ukoll għat-tip ta 'kontroll tat-temperatura fiċ-ċiklur.Żbalji tal-utent, ovvjament, għandhom jiġu evitati kemm jista 'jkun.
Hawn taħt, ser nuru l-isfidi li jiltaqgħu magħhom waqt il-preparazzjoni u matul il-ġirja ta’ PCR – u l-approċċi għal soluzzjonijiet li jeżistu fir-rigward tal-istrumenti u l-konsumabbli użati għall-istandardizzazzjoni tal-flussi tax-xogħol tal-PCR.
Preparazzjoni ta' reazzjoni
It-tqassim ta' komponenti ta' reazzjoni f'kontenituri tal-PCR, jew pjanċi, rispettivament, jinkludi sfidi multipli li jridu jingħelbu:
Kundizzjonijiet ta' reazzjoni
Id-dożaġġ eżatt u preċiż tal-komponenti individwali huwa indispensabbli meta wieħed jimmira għall-aktar kundizzjonijiet ta' reazzjoni identiċi possibbli.Minbarra teknika tajba tal-pipettar, l-għażla tal-għodda t-tajba hija kritika.It-taħlitiet prinċipali tal-PCR spiss ikun fihom sustanzi li jżidu l-viskożità jew jiġġeneraw fowm.Matul il-proċess tal-pipetta, dawn iwasslu għal tixrib sostanzjali tal-ponot tal-pipetta, u b'hekk titnaqqas l-eżattezza tal-pipetta.L-użu ta 'sistemi ta' tqassim dirett jew ponot alternattivi tal-pipetta li huma inqas suxxettibbli għat-tixrib jista 'jtejjeb l-eżattezza u l-preċiżjoni tal-proċess tal-pipetta.
Kontaminazzjonijiet
Matul il-proċess ta' tqassim, jiġu ġġenerati aerosols li, jekk jitħallew jilħqu ġewwa tal-pipetta, jistgħu potenzjalment jikkontaminaw kampjun ieħor matul il-pass li jmiss tal-pipetta.Dan jista 'jiġi evitat bl-użu ta' ponot tal-filtri jew sistemi ta 'spostament dirett.
Konsumabbli bħalpariri, reċipjenti u pjanċi li jintużaw fil-fluss tax-xogħol tal-PCR m'għandux ikun fihom sustanzi li jikkompromettu l-kampjun jew jiffalsifikaw ir-riżultat.Dawn jinkludu DNA, DNases, RNases u inibituri tal-PCR, kif ukoll komponenti li jistgħu potenzjalment joħorġu mill-materjal matul ir-reazzjoni - sustanzi magħrufa bħala leachables.
Żball tal-utent
Aktar ma jiġu pproċessati kampjuni, iktar ikun għoli r-riskju ta 'żball.Jista 'faċilment jiġri li kampjun jiġi pipettat f'reċipjent ħażin jew fil-bir ħażin.Dan ir-riskju jista' jitnaqqas b'mod konsiderevoli permezz ta' immarkar tal-bjar faċilment dixxernibbli.Permezz tal-awtomazzjoni tal-passi tad-dispensing, il-"fattur uman", jiġifieri, żbalji u varjazzjonijiet relatati mal-utent, huma minimizzati, u b'hekk tiżdied ir-riproduċibilità, speċjalment fil-każ ta 'volumi ta' reazzjoni żgħar.Dan jeħtieġ pjanċi ta' stabbiltà dimensjonali suffiċjenti biex jiġu impjegati f'post tax-xogħol.Barcodes mehmuża jipprovdu aktar leġibilità mill-magna, li tissimplifika t-traċċar tal-kampjuni matul il-proċess kollu.
Programmazzjoni tat-termoċiklu
L-ipprogrammar ta' strument jista' jirriżulta li jieħu ħafna ħin kif ukoll li huwa suxxettibbli għall-iżbalji.Karatteristiċi differenti taċ-ċiklatur termali tal-PCR jaħdmu flimkien biex jissimplifikaw dan il-pass tal-proċess u, l-aktar importanti, biex jagħmluh sikur:
Operazzjoni faċli u gwida tajba għall-utent huma l-bażi ta 'programmazzjoni effiċjenti.Filwaqt li tibni fuq din il-pedament, l-amministrazzjoni tal-utent protetta minn password tipprevjeni li l-programmi tiegħu stess jiġu mibdula minn utenti oħra.Jekk qed jintużaw ċiklaturi multipli (ta 'l-istess tip), huwa ta' benefiċċju jekk programm jista 'jiġi trasferit direttament minn strument għal ieħor permezz ta' USB jew konnettività.Softwer tal-kompjuter jippermetti amministrazzjoni ċentrali u sigura ta' programmi, drittijiet tal-utent u dokumenti fuq kompjuter.
PCR run
Matul il-ġirja, id-DNA jiġi amplifikat fir-reċipjent tar-reazzjoni, fejn kull kampjun għandu jkun soġġett għal kundizzjonijiet ta' reazzjoni identiċi u konsistenti.L-aspetti li ġejjin huma rilevanti għall-proċess:
Kontroll tat-temperatura
Preċiżjoni eċċellenti fil-kontroll tat-temperatura u l-omoġeneità tal-blokka taċ-ċiklatur huma l-bażi għal kondizzjonament uniformi tat-temperatura tal-kampjuni kollha.Il-kwalità għolja tal-elementi tat-tisħin u tat-tkessiħ (elementi peltier), kif ukoll il-mod li bih dawn huma konnessi mal-blokka, huma l-fatturi deċiżivi li jiddeterminaw ir-riskju ta 'diskrepanzi fit-temperatura magħrufa bħala "l-effett tat-tarf"
Evaporazzjoni
Il-konċentrazzjonijiet tal-komponenti ta' reazzjoni individwali m'għandhomx jinbidlu matul ir-reazzjoni minħabba l-evaporazzjoni.Inkella, huwa possibbli li ftit li xejnprodott PCRjistgħu jiġu ġġenerati, jew xejn.Għalhekk huwa kruċjali li tiġi minimizzata l-evaporazzjoni billi jiġi żgurat siġill sigur.F'dan il-każ, l-għatu imsaħħan tat-termoċiklu u s-siġill tal-bastiment jaħdmu id f'id.Għażliet ta 'siġillar differenti huma disponibbli għalPjanċi PCR (link: Artiklu tas-siġillar), li biha l-aħjar siġill jinkiseb permezz tas-siġillar bis-sħana.Għeluq ieħor jista 'jkun adattat ukoll, sakemm il-pressjoni ta' kuntatt tal-għatu taċ-ċiklur tista 'tiġi aġġustata għas-siġill magħżul.
L-istandardizzazzjoni tal-proċess hija fis-seħħ sabiex tissalvagwardja riżultati preċiżi u riproduċibbli fit-tul.Dan jinkludi manutenzjoni regolari tat-tagħmir biex jiġi żgurat li jkun dejjem f'kondizzjoni tajba tax-xogħol.Il-konsumabbli kollha għandhom ikunu ta' kwalità għolja b'mod konsistenti fil-lottijiet kollha prodotti, u d-disponibbiltà affidabbli tagħhom għandha tkun garantita.
Ħin tal-post: 29-Nov-2022