ʻO ka standardization o nā kaʻina hana e pili ana i kā lākou optimization a me ka hoʻokumu hou ʻana a me ka harmonization, e ʻae ana i ka hana maikaʻi loa no ka wā lōʻihi - kūʻokoʻa i ka mea hoʻohana.Hōʻoia ka standardization i nā hopena kiʻekiʻe, a me kā lākou reproducibility a me ka hoʻohālikelike.
ʻO ka pahuhopu o (maʻamau) PCR ʻo ia ka hoʻokumu ʻana i kahi hopena hilinaʻi a hiki ke hana hou ʻia.No kekahi mau noi, ka hua o kahuahana PCRpili nō hoʻi.No kēia mau hopena, pono e mālama ʻia e hōʻoia ʻaʻole e hoʻopaʻa ʻia nā laʻana a paʻa mau ka PCR workflow.ʻO ka mea kikoʻī, ʻo ia ka unuhi ʻana i ka hoʻemi ʻana i ka hoʻokomo ʻana i nā mea ʻino e hiki ke alakaʻi i nā hopena maikaʻi ʻole a i ʻole nā hopena maikaʻi ʻole a i ʻole ke kāohi ʻana i ka hopena PCR.Eia kekahi, pono e like ke ano o ka hopena no kela me keia la'ana i loko o ka holo ana a hiki ke hoololiia i na hana mahope (ma ke ano like).E pili ana kēia i ke ʻano o nā hopena a me ke ʻano o ka mālama ʻana i ka mahana i loko o ka cycler.ʻO nā hewa o nā mea hoʻohana, ʻoiaʻiʻo, e pale ʻia e like me ka hiki.
Ma lalo nei, e hōʻike mākou i nā pilikia i loaʻa i ka wā hoʻomākaukau a me ka holo ʻana o kahi PCR - a me nā ala e pili ana i nā hoʻonā e kū nei e pili ana i nā mea hana a me nā mea hoʻohana i hoʻohana ʻia no ka hoʻohālikelike ʻana i nā kahe hana PCR.
Hoʻomākaukau pane
ʻO ka hāʻawi ʻana i nā ʻāpana hoʻololi i loko o nā moku PCR, a i ʻole nā palapala, kēlā me kēia, aia nā pilikia he nui e pono ke hoʻokō ʻia:
Kūlana pane
ʻO ka hoʻopaʻa ʻana pololei a me ka pololei o nā ʻāpana ponoʻī he mea nui ia i ka wā e ʻimi ai i nā kūlana hoʻohālikelike like loa.Ma waho aʻe o kahi ʻenehana pipetting maikaʻi, ke koho ʻana i ka mea hana pono he mea koʻikoʻi.Loaʻa pinepine nā PCR master-mixes i nā mea e hoʻonui ai i ka viscosity a i ʻole e hoʻoulu i ka huʻa.I ka wā o ka pipetting, alakaʻi kēia i ka pulu nui o kaʻōlelo paipai pipette, pela e hoemi ai i ka pololei o ka paipu.ʻO ka hoʻohana ʻana i nā ʻōnaehana hoʻopuka pololei a i ʻole nā ʻōlelo aʻoaʻo pipette ʻē aʻe i hiki ke hoʻomaikaʻi i ka pololei a me ka pololei o ke kaʻina pipetting.
Hoʻohaumia
I ka wā o ka hāʻawi ʻana, hana ʻia nā aerosol, inā e ʻae ʻia e komo i loko o ka pipette, hiki ke hoʻohaumia i kekahi laʻana i ka wā pipetting e hiki mai ana.Hiki ke pale ʻia kēia ma ka hoʻohana ʻana i nā ʻōlelo aʻoaʻo kānana a i ʻole nā ʻōnaehana neʻe pololei.
Nā mea hoʻohana e like meʻōlelo aʻoaʻo, nā moku a me nā papa i ho'ohana 'ia ma ka PCR workflow 'a'ole pono e loa'a nā mea e ho'opō'ino ai i ka hāpana a i 'ole e ho'opunipuni i ka hopena.Hoʻopili kēia mau mea i ka DNA, DNases, RNases a me ka PCR inhibitors, a me nā ʻāpana i hiki ke hoʻoheheʻe ʻia mai ka mea i ka wā o ka hopena - nā mea i ʻike ʻia he leachables.
Ua hewa ka mea hoʻohana
ʻOi aku ka nui o nā laʻana, ʻoi aku ka kiʻekiʻe o ka hewa.Hiki ke maʻalahi ke hoʻokomo ʻia kahi laʻana i loko o ka moku hewa a i ʻole ka luawai hewa.Hiki ke hoʻemi nui ʻia kēia pilikia ma ka mākaʻikaʻi maʻalahi o nā pūnāwai.Ma o ka automation o ka hāʻawi ʻana i nā ʻanuʻu, ua hōʻemi ʻia ka "human factor", ʻo ia hoʻi, nā hewa a me nā ʻano like ʻole e pili ana i ka mea hoʻohana, no laila e hoʻonui ai i ka reproducibility, ʻoi aku ka nui o ka nui o ka hopena.Pono kēia i nā papa o ke kūpaʻa kūpono e hoʻohana ʻia i kahi hale hana.Hāʻawi nā barcode i hoʻopili ʻia i ka hiki ke heluhelu i ka mīkini, e hoʻomaʻamaʻa i ka nānā ʻana i ka laʻana ma ke kaʻina holoʻokoʻa.
Ka papahana o ka thermocycler
ʻO ka hoʻolālā ʻana i kahi mea hana hiki ke hoʻopau i ka manawa a me ka hewa.Hana pū nā hiʻohiʻona PCR thermal cycles e hoʻomaʻamaʻa i kēia kaʻina hana a, ʻo ka mea nui loa, e palekana ia:
ʻO ka hana maʻalahi a me ke alakaʻi mea hoʻohana maikaʻi ke kumu o ka hoʻolālā kūpono.Ke kūkulu ʻia nei ma luna o kēia kumu, ʻo ka hoʻokele hoʻohana ʻana i ka ʻōlelo huna e pale aku i nā polokalamu ponoʻī mai ka hoʻololi ʻia e nā mea hoʻohana ʻē aʻe.Inā hoʻohana ʻia nā mea hoʻokele he nui (o ke ʻano like), he mea maikaʻi inā hiki ke hoʻololi pololei ʻia kahi papahana mai kekahi mea hana i kekahi ma o USB a i ʻole ka pilina.Hiki i nā polokalamu kamepiula ke hoʻokele i nā papahana, nā kuleana o nā mea hoʻohana a me nā palapala ma ke kamepiula.
holo PCR
I ka wā o ka holo ʻana, hoʻonui ʻia ka DNA i loko o ka moku pane, kahi e hoʻopili ʻia ai kēlā me kēia hāpana i nā kūlana hoʻohālikelike like.Ua pili kēia mau ʻaoʻao no ke kaʻina hana:
Hoʻomalu mahana
ʻO ka pololei maikaʻi loa i ka mālama ʻana i ka wela a me ka homogeneity o ka poloka cycler ke kumu no ka hoʻomaʻamaʻa wela o nā laʻana āpau.ʻO ke ʻano kiʻekiʻe o nā mea hoʻomehana a me nā mea hoʻoluʻu (peltier elements), a me ke ʻano o ka pili ʻana o kēia mau mea i ka poloka, ʻo ia nā mea hoʻoholo e hoʻoholo ai i ka pilikia o nā ʻokoʻa wela i kapa ʻia ʻo "ka hopena hopena".
Hoʻohuehu
ʻAʻole pono e hoʻololi nā manaʻo o nā ʻāpana hoʻololi i ka wā o ka hopena ma muli o ka evaporation.A i ʻole, hiki i ka liʻiliʻi loahuahana PCRhiki ke hana ʻia, a ʻaʻole loa.No laila he mea koʻikoʻi ia e hōʻemi i ka evaporation ma ka hōʻoia ʻana i kahi sila paʻa.I kēia hihia, hana lima lima ka uhi wela o ka thermocycler a me ke sila o ka moku.Loaʻa nā koho hoʻopaʻa ʻokoʻa noNā pā PCR (loulou: ʻatikala hoʻopaʻa ʻana), kahi e loaʻa ai ka sila maikaʻi loa ma o ka sila wela.Hiki ke kūpono nā pani ʻē aʻe, inā hiki ke hoʻololi ʻia ke kaomi hoʻopili o ka poʻi cycler i ke sila i koho ʻia.
Hoʻonohonoho ʻia ka hana maʻamau i mea e pale ai i nā hopena pololei a hiki ke hana hou ʻia i ka wā lōʻihi.Hoʻopili kēia i ka mālama mau ʻana i nā mea hana e hōʻoia i ka maikaʻi o ka hana.Pono nā mea hoʻohana a pau i ke kūlana kiʻekiʻe ma waena o nā ʻāpana āpau i hana ʻia, a pono e hōʻoia ʻia ko lākou loaʻa pono.
Ka manawa hoʻouna: Nov-29-2022