Iwọnwọn ti awọn ilana pẹlu iṣapeye wọn ati idasile atẹle ati isọdọkan, gbigba iṣẹ ṣiṣe to gun-gun - ominira ti olumulo.Isọdiwọn ṣe idaniloju awọn abajade didara-giga, bakanna bi atunbi wọn ati afiwera.
Ibi-afẹde ti (Ayebaye) PCR jẹ iran ti abajade ti o gbẹkẹle ati atunṣe.Fun awọn ohun elo, awọn ikore ti awọnPCR ọjajẹ tun wulo.Fun awọn aati wọnyi, a gbọdọ ṣe itọju lati rii daju pe awọn ayẹwo ko ni ipalara ati pe ṣiṣiṣẹsẹhin PCR wa ni iduroṣinṣin.Ni pataki, eyi tumọ si idinku ifihan ti awọn idoti ti o le ja si rere eke tabi awọn abajade odi eke tabi paapaa ṣe idiwọ esi PCR.Pẹlupẹlu, awọn ipo ifasẹyin yẹ ki o jẹ aami bi o ti ṣee fun ayẹwo kọọkan laarin ṣiṣe kan ati tun jẹ gbigbe si awọn aati ti o tẹle (ti ọna kanna).Eyi tọka si akopọ ti awọn aati bii si iru iṣakoso iwọn otutu ninu cycler.Awọn aṣiṣe olumulo, dajudaju, ni lati yago fun bi o ti ṣee ṣe.
Ni isalẹ, a yoo ṣe afihan awọn italaya eyiti o ba pade lakoko igbaradi ati jakejado ṣiṣe PCR kan - ati awọn isunmọ si awọn solusan eyiti o wa pẹlu ọwọ si awọn ohun elo ati awọn ohun elo ti a lo fun isọdọtun ti ṣiṣan iṣẹ PCR.
Ifaseyin igbaradi
Pipinfunni awọn paati ifaseyin sinu awọn ọkọ oju omi PCR, tabi awọn awo, ni atele, ni awọn italaya lọpọlọpọ ti o gbọdọ bori:
Awọn ipo ifaseyin
Iwọn deede ati kongẹ ti awọn paati ọkọọkan jẹ pataki nigba ti ifọkansi fun awọn ipo ifaseyin kanna ti o ṣeeṣe.Ni afikun si ilana pipetting ti o dara, yiyan ọpa ti o tọ jẹ pataki.PCR titunto si-dapọ nigbagbogbo ni awọn oludoti ti o mu iki tabi ina foomu.Lakoko ilana pipetting, awọn wọnyi yorisi jijẹ idaran ti awọnpipette awọn italolobo, bayi din pipetting pipe.Lilo awọn ọna ṣiṣe fifunni taara tabi awọn imọran pipette omiiran ti ko ni itara si rirọ le mu ilọsiwaju ati deede ti ilana pipetting.
Awọn idoti
Lakoko ilana ipinfunni, awọn aerosols ti wa ni ipilẹṣẹ eyiti, ti o ba gba ọ laaye lati de inu pipette, o le ṣe akoran ayẹwo miiran lakoko igbesẹ pipetting atẹle.Eyi le ṣe idiwọ nipasẹ lilo awọn imọran àlẹmọ tabi awọn ọna gbigbe taara.
Awọn ohun elo biiawọn italolobo, awọn ohun elo ati awọn awo ti a lo ninu ṣiṣiṣẹsẹhin PCR ko gbọdọ ni awọn nkan ti o ba ayẹwo naa jẹ tabi iro ni abajade.Iwọnyi pẹlu DNA, DNases, RNases ati awọn inhibitors PCR, bakanna bi awọn paati ti o le fa lati inu ohun elo lakoko iṣesi - awọn nkan ti a mọ si awọn leachables.
Aṣiṣe olumulo
Awọn ayẹwo diẹ sii ti wa ni ilọsiwaju, ti o ga julọ ewu aṣiṣe.O le ni rọọrun ṣẹlẹ pe ayẹwo kan ti paipu sinu ọkọ ti ko tọ tabi kanga ti ko tọ.Ewu yii le dinku pupọ nipasẹ siṣamisi ti o rọrun ti awọn kanga.Nipasẹ adaṣe ti awọn igbesẹ fifunni, “ifosiwewe eniyan”, ie, awọn aṣiṣe ati awọn iyatọ ti o ni ibatan olumulo, ti dinku, nitorinaa jijẹ atunṣe, paapaa ni ọran ti awọn iwọn aati kekere.Eyi nilo awọn awo ti iduroṣinṣin onisẹpo to lati gba iṣẹ ni ibi iṣẹ kan.Awọn barcodes ti o somọ pese afikun kika kika ẹrọ, eyiti o rọrun titele ayẹwo jakejado gbogbo ilana.
Siseto ti awọn thermocycler
Siseto ohun elo le jẹri lati jẹ akoko-n gba bi daradara bi aṣiṣe-prone.Awọn ẹya ẹrọ cycler gbona PCR oriṣiriṣi ṣiṣẹ papọ lati ṣe irọrun igbesẹ ilana yii ati, pataki julọ, lati jẹ ki o jẹ ailewu:
Išišẹ ti o rọrun ati itọsọna olumulo ti o dara jẹ ipilẹ ti siseto daradara.Ilé sori ipilẹ yii, iṣakoso olumulo ti o ni aabo ọrọ igbaniwọle yoo ṣe idiwọ awọn eto tirẹ lati yipada nipasẹ awọn olumulo miiran.Ti ọpọlọpọ awọn cyclers (ti iru kanna) ba wa ni lilo, o jẹ anfani ti eto kan ba le gbe taara lati ohun elo kan si omiiran nipasẹ USB tabi Asopọmọra.Sọfitiwia Kọmputa ngbanilaaye iṣakoso aarin ati aabo ti awọn eto, awọn ẹtọ olumulo ati awọn iwe aṣẹ lori kọnputa kan.
PCR ṣiṣe
Lakoko ṣiṣe, DNA ti pọ si ninu ohun elo ifaseyin, nibiti ayẹwo kọọkan yẹ ki o wa labẹ aami kanna, awọn ipo ifaseyin deede.Awọn aaye wọnyi jẹ pataki fun ilana naa:
Iṣakoso iwọn otutu
Iṣe deede ti o dara julọ ni iṣakoso iwọn otutu ati isokan ti bulọọki cycler jẹ ipilẹ fun paapaa iwọn otutu ti gbogbo awọn ayẹwo.Didara giga ti alapapo ati awọn eroja itutu agbaiye (awọn eroja peltier), bakanna bi ọna eyiti awọn wọnyi ti sopọ mọ bulọọki, jẹ awọn ipinnu ipinnu eyiti yoo pinnu eewu awọn aarẹ iwọn otutu ti a mọ ni “ipa eti”
Evaporation
Awọn ifọkansi ti awọn paati ifaseyin ẹni kọọkan ko yẹ ki o yipada lakoko iṣe iṣe nitori evaporation.Bibẹẹkọ, o ṣee ṣe pupọ diẹPCR ọjale ti wa ni ipilẹṣẹ, tabi kò si ni gbogbo.Nitorina o ṣe pataki lati dinku evaporation nipa aridaju edidi to ni aabo.Ni idi eyi, ideri ti o gbona ti thermocycler ati idii ti ọkọ naa n ṣiṣẹ ni ọwọ.Awọn aṣayan lilẹ oriṣiriṣi wa funAwọn awo PCR (ọna asopọ: Nkan lilẹ), nipa eyiti o ti wa ni ti o dara ju asiwaju nipasẹ ooru lilẹ.Awọn pipade miiran le tun dara, niwọn igba ti titẹ olubasọrọ ti ideri cycler le ṣe atunṣe si ami ti o yan.
Isọdiwọn ilana wa ni aye lati le daabobo deede ati awọn abajade atunṣe ni igba pipẹ.Eyi pẹlu itọju ohun elo nigbagbogbo lati rii daju pe o wa ni ipo iṣẹ to dara nigbagbogbo.Gbogbo awọn ohun elo yẹ ki o jẹ didara giga nigbagbogbo ni gbogbo awọn ọpọlọpọ ti a ṣe, ati pe wiwa igbẹkẹle wọn gbọdọ jẹ iṣeduro.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu kọkanla-29-2022