הסטנדרטיזציה של התהליכים כוללת אופטימיזציה שלהם ולאחר מכן הקמת והרמוניזציה, המאפשרים ביצועים אופטימליים לטווח ארוך – ללא תלות במשתמש.סטנדרטיזציה מבטיחה תוצאות באיכות גבוהה, כמו גם את יכולת השחזור וההשוואה שלהן.
המטרה של PCR (קלאסי) היא יצירת תוצאה אמינה וניתנת לשחזור.עבור יישומים מסוימים, התשואה שלמוצר PCRרלוונטי גם.עבור תגובות אלו, יש להקפיד על כך שהדגימות אינן נפגעות ושזרימת העבודה של PCR תישאר יציבה.באופן ספציפי, זה מתורגם למזעור החדרת זיהומים שעלולים להוביל לתוצאות חיוביות שגויות או שליליות שגויות או אפילו לעכב את תגובת ה-PCR.יתר על כן, תנאי התגובה צריכים להיות זהים ככל האפשר עבור כל דגימה בודדת בתוך ריצה וגם להיות ניתנים להעברה לתגובות עוקבות (מאותה שיטה).זה מתייחס להרכב התגובות כמו גם לסוג בקרת הטמפרטורה במחזור.שגיאות משתמש, כמובן, יש להימנע ככל האפשר.
להלן, נדגים את האתגרים שנתקלים בהם במהלך ההכנה ולאורך הריצה של PCR - ואת הגישות לפתרונות הקיימים ביחס למכשירים וחומרים מתכלים המשמשים לסטנדרטיזציה של זרימות העבודה של PCR.
הכנת תגובה
חלוקת רכיבי התגובה לכלי PCR, או לוחות, בהתאמה, מורכבת ממספר אתגרים שיש להתגבר עליהם:
תנאי תגובה
המינון המדויק והמדויק של הרכיבים הבודדים הוא הכרחי כאשר מכוונים לתנאי התגובה הכי זהים שאפשר.בנוסף לטכניקת פיפטציה טובה, בחירת הכלי הנכון היא קריטית.תערובות מאסטר PCR מכילות לעתים קרובות חומרים המגבירים את הצמיגות או יוצרים קצף.במהלך תהליך הפיפטינג, אלה מובילים להרטבה משמעותית של ה-קצות פיפטה, ובכך להפחית את דיוק הפיפטינג.השימוש במערכות לחלוקה ישירה או בקצות פיפטה חלופיות שפחות מועדות להרטבה יכול לשפר את הדיוק והדיוק של תהליך הפיפטה.
זיהומים
במהלך תהליך ההפצה, נוצרים אירוסולים אשר, אם נותנים להם להגיע אל פנים הפיפטה, עלולים לזהם דגימה נוספת במהלך שלב הפיפטציה הבא.ניתן למנוע זאת על ידי שימוש בקצות סינון או מערכות עקירה ישירה.
חומרים מתכלים כגוןטיפים, כלי וצלחות המשמשים בזרימת העבודה של PCR לא חייבים להכיל חומרים הפוגעים בדגימה או מזייפים את התוצאה.אלה כוללים DNA, DNases, RNases ומעכבי PCR, כמו גם רכיבים שעלולים לדלוף מהחומר במהלך התגובה - חומרים הידועים כ-leachables.
שגיאת משתמש
ככל שמעבדים יותר דגימות, כך הסיכון לשגיאות גבוה יותר.זה יכול לקרות בקלות שדגימה מועברת לפיפטה לכלי הלא נכון או לבאר הלא נכונה.ניתן להפחית סיכון זה במידה ניכרת על ידי סימון קל להבחין של הבארות.באמצעות אוטומציה של שלבי ההפצה, ה"גורם האנושי", כלומר, שגיאות וגיוון הקשור למשתמש, ממוזער, ובכך מגדיל את יכולת השחזור, במיוחד במקרה של נפחי תגובה קטנים.הדבר מחייב שימוש בלוחות בעלות יציבות מימדית מספקת בתחנת עבודה.ברקודים מצורפים מספקים קריאה נוספת במכונה, מה שמפשט את המעקב אחר דוגמאות לאורך כל התהליך.
תכנות של התרמוסילר
תכנות מכשיר יכול להתגלות כגוזל זמן כמו גם מועד לשגיאות.תכונות מחזור תרמי PCR שונות פועלות יחד כדי לפשט את שלב התהליך הזה, והכי חשוב, כדי להפוך אותו לבטוח:
תפעול קל והנחיית משתמש טובה הם הבסיס לתכנות יעיל.בהתבסס על הבסיס הזה, ניהול משתמשים מוגן בסיסמה ימנע את שינוי התוכניות שלך על ידי משתמשים אחרים.אם מספר מחזורים (מאותו סוג) נמצאים בשימוש, מועיל אם ניתן להעביר תוכנית ישירות ממכשיר אחד למשנהו באמצעות USB או קישוריות.תוכנת מחשב מאפשרת ניהול מרכזי ומאובטח של תוכנות, זכויות משתמש ומסמכים במחשב.
הפעלת PCR
במהלך הריצה, ה-DNA מוגבר בכלי התגובה, כאשר כל דגימה צריכה להיות נתונה לתנאי תגובה זהים ועקביים.ההיבטים הבאים רלוונטיים לתהליך:
בקרת טמפרטורה
דיוק מעולה בבקרת טמפרטורה והומוגניות של בלוק המחזור הם הבסיס למיזוג טמפרטורה אחיד של כל הדגימות.האיכות הגבוהה של גופי החימום והקירור (אלמנטים פלטיירים), כמו גם האופן שבו הם מחוברים לבלוק, הם הגורמים הקובעים שיקבעו את הסיכון לאי התאמות בטמפרטורה המכונה "אפקט הקצה".
אידוי
הריכוזים של מרכיבי התגובה הבודדים אינם אמורים להשתנות במהלך התגובה עקב אידוי.אחרת, ייתכן כי מעט מאודמוצר PCRעשוי להיווצר, או בכלל לא.לכן חיוני למזער את האידוי על ידי הבטחת אטימה מאובטחת.במקרה זה, המכסה המחומם של התרמוסילר והאטם של הכלי עובדים יד ביד.אפשרויות איטום שונות זמינות עבורלוחות PCR (קישור: מאמר איטום), לפיו האיטום הטוב ביותר מושג באמצעות איטום בחום.סגירות אחרות עשויות להתאים גם הן, כל עוד ניתן להתאים את לחץ המגע של מכסה המחזור לאיטום הנבחר.
סטנדרטיזציה של תהליכים קיימת על מנת לשמור על תוצאות מדויקות וניתנות לשחזור בטווח הארוך.זה כולל תחזוקה שוטפת של הציוד כדי להבטיח שהוא תמיד במצב תקין.כל החומרים המתכלים צריכים להיות באיכות גבוהה באופן עקבי בכל החלקים המיוצרים, ויש להבטיח את זמינותם האמינה.
זמן פרסום: 29 בנובמבר 2022