Procesų standartizavimas apima jų optimizavimą ir vėlesnį nustatymą bei harmonizavimą, leidžiantį užtikrinti ilgalaikį optimalų veikimą – nepriklausomai nuo vartotojo.Standartizavimas užtikrina kokybiškus rezultatus, taip pat jų atkuriamumą ir palyginamumą.
(Klasikinio) PGR tikslas yra gauti patikimą ir atkuriamą rezultatą.Tam tikrais atvejais išeigaPGR produktastaip pat aktualu.Dėl šių reakcijų reikia užtikrinti, kad mėginiai nebūtų pažeisti ir kad PGR darbo eiga išliktų stabili.Konkrečiai, tai reiškia, kad iki minimumo sumažinamas užteršimas, galintis sukelti klaidingai teigiamus arba klaidingai neigiamus rezultatus arba net slopinti PGR reakciją.Be to, reakcijos sąlygos turi būti kiek įmanoma identiškesnės kiekvienam atskiram mėginiui bandymo metu ir taip pat turi būti perkeliamos į vėlesnes reakcijas (taikant tą patį metodą).Tai susiję su reakcijų sudėtimi, taip pat su ciklerio temperatūros valdymo tipu.Žinoma, reikia kiek įmanoma vengti vartotojų klaidų.
Žemiau parodysime iššūkius, su kuriais susiduriama rengiantis ir atliekant PGR, ir esamus sprendimus, susijusius su instrumentais ir eksploatacinėmis medžiagomis, naudojamomis PGR darbo eigoms standartizuoti.
Reakcijos paruošimas
Reakcijos komponentų išpilstymas į PGR indus arba atitinkamai plokšteles apima daugybę iššūkių, kuriuos reikia įveikti:
Reakcijos sąlygos
Tikslus ir tikslus atskirų komponentų dozavimas yra būtinas siekiant kuo identiškesnių reakcijos sąlygų.Be geros pipetavimo technikos, labai svarbu pasirinkti tinkamą įrankį.PGR pagrindiniuose mišiniuose dažnai yra medžiagų, kurios padidina klampumą arba sukuria putas.Pipetavimo proceso metu jie labai sušlapinapipetės antgaliai, todėl sumažėja pipetės tikslumas.Naudojant tiesioginio dozavimo sistemas arba alternatyvius pipetės antgalius, kurie mažiau drėksta, gali pagerėti pipetavimo proceso tikslumas ir tikslumas.
Užteršimai
Dozavimo proceso metu susidaro aerozoliai, kurie, jei jiems leidžiama patekti į pipetės vidų, kitame pipetavimo etape gali užteršti kitą mėginį.To galima išvengti naudojant filtrų antgalius arba tiesioginio poslinkio sistemas.
Eksploatacinės medžiagos, pvzpatarimai, induose ir plokštelėse, kurie naudojami atliekant PGR darbo eigą, neturi būti medžiagų, kurios pakenktų mėginiui arba suklastotų rezultatą.Tai apima DNR, DNazes, RNazes ir PGR inhibitorius, taip pat komponentus, kurie reakcijos metu gali išsiplauti iš medžiagos – medžiagos, žinomos kaip išplaunamos medžiagos.
Vartotojo klaida
Kuo daugiau mėginių apdorojama, tuo didesnė klaidų rizika.Nesunkiai gali atsitikti taip, kad mėginys pipete įlašinamas į ne tą indą arba ne tą šulinį.Šią riziką galima žymiai sumažinti lengvai pastebimu šulinių žymėjimu.Automatizuojant dozavimo veiksmus, „žmogiškasis faktorius“, ty klaidos ir su vartotoju susiję variacijos, yra sumažinamas iki minimumo, todėl padidėja atkuriamumas, ypač esant mažiems reakcijos tūriams.Tam reikia, kad darbo vietoje būtų naudojamos pakankamo matmenų stabilumo plokštės.Pridedami brūkšniniai kodai suteikia papildomo mašininio nuskaitomumo, o tai supaprastina mėginių sekimą viso proceso metu.
Termociklerio programavimas
Priemonės programavimas gali užtrukti daug laiko ir sukelti klaidų.Skirtingos PGR terminio ciklo funkcijos veikia kartu, kad supaprastintų šį procesą ir, svarbiausia, kad jis būtų saugus:
Lengvas valdymas ir geras vartotojo nurodymas yra efektyvaus programavimo pagrindas.Remiantis šiuo pagrindu, slaptažodžiu apsaugotas vartotojų administravimas neleis kitiems vartotojams keisti savo programų.Jei naudojami keli (to paties tipo) dviračiai, pravartu, jei programą galima tiesiogiai perkelti iš vieno instrumento į kitą per USB arba jungtį.Kompiuterių programinė įranga leidžia centralizuotai ir saugiai administruoti programas, vartotojo teises ir dokumentus kompiuteryje.
PGR paleidimas
Vykdymo metu DNR amplifikuojama reakcijos inde, kur kiekvienas mėginys turi būti veikiamas identiškomis, nuosekliomis reakcijos sąlygomis.Procesui svarbūs šie aspektai:
Temperatūros kontrolė
Puikus temperatūros reguliavimo tikslumas ir ciklerio bloko homogeniškumas yra tolygaus visų mėginių temperatūros kondicionavimo pagrindas.Aukšta šildymo ir aušinimo elementų (peltier elementų) kokybė, taip pat jų prijungimo prie bloko būdas yra lemiami veiksniai, lemiantys temperatūros skirtumų, vadinamų „krašto efektu“, riziką.
Garavimas
Atskirų reakcijos komponentų koncentracijos reakcijos eigoje neturėtų keistis dėl garavimo.Priešingu atveju gali būti, kad labai mažaiPGR produktasgali būti sugeneruotas arba iš viso nėra.Todėl labai svarbu sumažinti garavimą užtikrinant saugų sandarumą.Šiuo atveju šildomas termociklerio dangtis ir indo sandariklis veikia ranka rankon.Galimi įvairūs sandarinimo variantaiPGR plokštės (nuoroda: sandarinimo straipsnis), kur geriausias sandarinimas pasiekiamas termiškai sandarinant.Gali tikti ir kiti uždoriai, jei tik dviračio dangčio kontaktinį slėgį galima reguliuoti pagal pasirinktą sandariklį.
Siekiant užtikrinti tikslius ir atkuriamus rezultatus ilgalaikėje perspektyvoje, taikomas procesų standartizavimas.Tai apima reguliarią įrangos priežiūrą, siekiant užtikrinti, kad ji visada būtų geros darbinės būklės.Visos eksploatacinės medžiagos turi būti nuolat aukštos kokybės visose gaminamose partijose ir turi būti garantuotas patikimas jų prieinamumas.
Paskelbimo laikas: 2022-11-29