Գործընթացների ստանդարտացումը ներառում է դրանց օպտիմալացումը և հետագա հաստատումն ու ներդաշնակեցումը, ինչը թույլ է տալիս երկարաժամկետ օպտիմալ կատարում՝ անկախ օգտագործողից:Ստանդարտացումը ապահովում է բարձրորակ արդյունքներ, ինչպես նաև դրանց վերարտադրելիություն և համեմատելիություն:
(դասական) PCR-ի նպատակը հուսալի և վերարտադրելի արդյունքի ստեղծումն է:Որոշ կիրառումների համար, եկամտաբերությունըPCR արտադրանքարդիական է նաև.Այս ռեակցիաների համար պետք է ուշադրություն դարձնել, որպեսզի նմուշները չվնասվեն, և որ PCR աշխատանքային հոսքը մնա կայուն:Մասնավորապես, սա նշանակում է նվազագույնի հասցնել աղտոտումների ներմուծումը, որոնք կարող են հանգեցնել կեղծ դրական կամ կեղծ բացասական արդյունքների կամ նույնիսկ արգելակել PCR ռեակցիան:Ավելին, ռեակցիայի պայմանները պետք է հնարավորինս նույնական լինեն յուրաքանչյուր առանձին նմուշի համար, ինչպես նաև փոխանցելի լինեն հետագա ռեակցիաներին (նույն մեթոդով):Սա վերաբերում է ռեակցիաների բաղադրությանը, ինչպես նաև ցիկլերի մեջ ջերմաստիճանի վերահսկման տեսակին:Օգտագործողի սխալներից, իհարկե, պետք է հնարավորինս խուսափել:
Ստորև մենք կցուցադրենք այն մարտահրավերները, որոնք բախվում են PCR-ի պատրաստման և ողջ ընթացքում, և լուծումների մոտեցումները, որոնք առկա են PCR-ի աշխատանքային հոսքերի ստանդարտացման համար օգտագործվող գործիքների և ծախսվող նյութերի վերաբերյալ:
Ռեակցիայի պատրաստում
Ռեակցիայի բաղադրիչների բաշխումը համապատասխանաբար PCR անոթների կամ թիթեղների մեջ ներառում է բազմաթիվ մարտահրավերներ, որոնք պետք է հաղթահարվեն.
Ռեակցիայի պայմանները
Առանձին բաղադրիչների ճշգրիտ և ճշգրիտ չափաբաժինն անփոխարինելի է, երբ նպատակաուղղված է հնարավոր ամենանույն ռեակցիայի պայմաններին:Ի լրումն լավ խողովակաշարի տեխնիկայի, կարևոր է ճիշտ գործիք ընտրելը:PCR վարպետ-խառնուրդները հաճախ պարունակում են նյութեր, որոնք մեծացնում են մածուցիկությունը կամ առաջացնում են փրփուր:Պիպերթինգի գործընթացում դրանք հանգեցնում են նյութի զգալի թրջմանpipette խորհուրդներ, այդպիսով նվազեցնելով pipetting ճշգրտությունը:Ուղղակի բաշխման համակարգերի կամ այլընտրանքային խողովակների ծայրերի օգտագործումը, որոնք ավելի քիչ հակված են թրջվելու, կարող են բարելավել խողովակների տեղադրման գործընթացի ճշգրտությունն ու ճշգրտությունը:
Աղտոտումներ
Բաշխման գործընթացում առաջանում են աերոզոլներ, որոնք, եթե թույլատրվում են հասնել պիպետտի ներս, կարող են պոտենցիալ աղտոտել մեկ այլ նմուշ՝ հաջորդ պիպետտավորման քայլի ընթացքում:Դա կարելի է կանխել՝ օգտագործելով ֆիլտրերի ծայրերը կամ ուղղակի տեղաշարժման համակարգերը:
Սպառվող նյութեր, ինչպիսիք ենխորհուրդներՊՇՌ-ի աշխատանքի ընթացքում օգտագործվող անոթները և թիթեղները չպետք է պարունակեն նյութեր, որոնք վնասում են նմուշը կամ կեղծում են արդյունքը:Դրանք ներառում են ԴՆԹ, DNase, RNases և PCR ինհիբիտորներ, ինչպես նաև բաղադրիչներ, որոնք կարող են պոտենցիալ արտահոսել նյութից ռեակցիայի ընթացքում.
Օգտագործողի սխալ
Որքան շատ նմուշներ են մշակվում, այնքան մեծ է սխալի ռիսկը:Հեշտությամբ կարող է պատահել, որ նմուշը խողովակով մտցվի սխալ նավի կամ սխալ ջրհորի մեջ:Այս ռիսկը կարող է զգալիորեն կրճատվել հորերի հեշտությամբ նկատելի նշագրման միջոցով:Բաշխման քայլերի ավտոմատացման միջոցով «մարդկային գործոնը», այսինքն՝ սխալները և օգտագործողի հետ կապված տատանումները նվազագույնի են հասցվում՝ այդպիսով մեծացնելով վերարտադրելիությունը, հատկապես փոքր ռեակցիաների ծավալների դեպքում:Սա պահանջում է բավարար չափերի կայունություն ունեցող թիթեղներ՝ աշխատատեղերում օգտագործելու համար:Կցված շտրիխ կոդերն ապահովում են լրացուցիչ մեքենայական ընթեռնելիություն, ինչը հեշտացնում է նմուշների հետագծումը ողջ գործընթացի ընթացքում:
Ջերմոցիկլետի ծրագրավորում
Գործիքի ծրագրավորումը կարող է լինել ժամանակատար, ինչպես նաև սխալների հակում:PCR ջերմային ցիկլերի տարբեր առանձնահատկությունները միասին աշխատում են այս գործընթացի քայլը պարզեցնելու և, ամենակարևորը, այն անվտանգ դարձնելու համար.
Հեշտ շահագործումը և օգտագործողի լավ առաջնորդությունը արդյունավետ ծրագրավորման հիմքն են:Այս հիմքի վրա հիմնվելով՝ գաղտնաբառով պաշտպանված օգտատերերի վարչակազմը կկանխի սեփական ծրագրերի փոփոխումը այլ օգտվողների կողմից:Եթե օգտագործվում են մի քանի ցիկլեր (նույն տիպի), ապա օգտակար է, եթե ծրագիրը կարող է ուղղակիորեն փոխանցվել մի գործիքից մյուսը USB-ի կամ կապի միջոցով:Համակարգչային ծրագրակազմը թույլ է տալիս կենտրոնական և անվտանգ կառավարել ծրագրերը, օգտատերերի իրավունքները և փաստաթղթերը համակարգչում:
PCR գործարկում
Գործարկման ընթացքում ԴՆԹ-ն ուժեղացվում է ռեակցիայի անոթում, որտեղ յուրաքանչյուր նմուշ պետք է ենթարկվի նույնական, հետևողական ռեակցիայի պայմաններին:Գործընթացի համար կարևոր են հետևյալ ասպեկտները.
Ջերմաստիճանի վերահսկում
Ջերմաստիճանի վերահսկման գերազանց ճշգրտությունը և ցիկլերի բլոկի միատարրությունը հիմք են հանդիսանում բոլոր նմուշների ջերմաստիճանի հավասարաչափ կարգավորելու համար:Ջեռուցման և հովացման տարրերի (peltier տարրեր) բարձր որակը, ինչպես նաև դրանց միացման ձևը բլոկին, որոշիչ գործոններ են, որոնք կորոշեն ջերմաստիճանի անհամապատասխանությունների ռիսկը, որը հայտնի է որպես «եզրային էֆեկտ»:
Գոլորշիացում
Ռեակցիայի առանձին բաղադրիչների կոնցենտրացիաները չպետք է փոխվեն ռեակցիայի ընթացքում գոլորշիացման պատճառով:Հակառակ դեպքում հնարավոր է, որ շատ քիչPCR արտադրանքկարող է ստեղծվել, կամ ընդհանրապես ոչ:Հետևաբար, կարևոր է նվազագույնի հասցնել գոլորշիացումը՝ ապահովելով անվտանգ կնիքը:Այս դեպքում ջերմացիկլիչի տաքացվող կափարիչը և նավի կնիքը աշխատում են ձեռք ձեռքի տված:Հասանելի են տարբեր կնքման տարբերակներPCR թիթեղներ (հղում. կնքման հոդված), որի շնորհիվ լավագույն կնիքը ձեռք է բերվում ջերմային կնքման միջոցով:Այլ փակիչներ նույնպես կարող են հարմար լինել, քանի դեռ ցիկլերի կափարիչի շփման ճնշումը կարող է ճշգրտվել ընտրված կնիքին:
Գործընթացների ստանդարտացումն իրականացվում է երկարաժամկետ հեռանկարում ճշգրիտ և վերարտադրելի արդյունքներ ապահովելու համար:Սա ներառում է սարքավորումների կանոնավոր սպասարկում՝ ապահովելու համար, որ այն միշտ լավ աշխատանքային վիճակում է:Բոլոր սպառվող նյութերը պետք է լինեն հետևողականորեն բարձր որակի բոլոր արտադրված լոտերում, և դրանց հուսալի հասանելիությունը պետք է երաշխավորված լինի:
Հրապարակման ժամանակը՝ նոյ-29-2022