प्रक्रियाओं के मानकीकरण में उनका अनुकूलन और उसके बाद की स्थापना और सामंजस्य शामिल है, जो उपयोगकर्ता से स्वतंत्र - दीर्घकालिक इष्टतम प्रदर्शन की अनुमति देता है।मानकीकरण उच्च-गुणवत्ता वाले परिणाम, साथ ही उनकी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता और तुलनीयता सुनिश्चित करता है।
(क्लासिक) पीसीआर का लक्ष्य एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम उत्पन्न करना है।कुछ अनुप्रयोगों के लिए, की उपजपीसीआर उत्पादभी प्रासंगिक है.इन प्रतिक्रियाओं के लिए, यह सुनिश्चित करने के लिए ध्यान रखा जाना चाहिए कि नमूनों से समझौता न किया जाए और पीसीआर वर्कफ़्लो स्थिर रहे।विशेष रूप से, इसका मतलब उन संदूषणों की शुरूआत को कम करना है जो गलत सकारात्मक या गलत नकारात्मक परिणाम दे सकते हैं या यहां तक कि पीसीआर प्रतिक्रिया को भी बाधित कर सकते हैं।इसके अलावा, प्रतिक्रिया की स्थिति एक रन के भीतर प्रत्येक व्यक्तिगत नमूने के लिए यथासंभव समान होनी चाहिए और बाद की प्रतिक्रियाओं (उसी विधि) में स्थानांतरित की जानी चाहिए।यह प्रतिक्रियाओं की संरचना के साथ-साथ साइक्लर में तापमान नियंत्रण के प्रकार को संदर्भित करता है।निःसंदेह, उपयोगकर्ता त्रुटियों से जितना संभव हो सके बचा जाना चाहिए।
नीचे, हम तैयारी के दौरान और पीसीआर चलाने के दौरान आने वाली चुनौतियों का प्रदर्शन करेंगे - और समाधान के दृष्टिकोण जो पीसीआर वर्कफ़्लो के मानकीकरण के लिए उपयोग किए जाने वाले उपकरणों और उपभोग्य सामग्रियों के संबंध में मौजूद हैं।
प्रतिक्रिया की तैयारी
प्रतिक्रिया घटकों को क्रमशः पीसीआर-जहाजों या प्लेटों में वितरित करने में कई चुनौतियाँ शामिल हैं जिन्हें दूर किया जाना चाहिए:
प्रतिक्रिया की स्थितियाँ
यथासंभव समान प्रतिक्रिया स्थितियों का लक्ष्य रखते समय व्यक्तिगत घटकों की सटीक और सटीक खुराक अपरिहार्य है।एक अच्छी पिपेटिंग तकनीक के अलावा, सही उपकरण का चयन करना भी महत्वपूर्ण है।पीसीआर मास्टर-मिक्स में अक्सर ऐसे पदार्थ होते हैं जो चिपचिपाहट बढ़ाते हैं या फोम उत्पन्न करते हैं।पिपेटिंग प्रक्रिया के दौरान, ये काफी हद तक गीला हो जाते हैंपिपेट युक्तियाँ, इस प्रकार पिपेटिंग सटीकता कम हो जाती है।प्रत्यक्ष वितरण प्रणालियों या वैकल्पिक पिपेट युक्तियों का उपयोग, जिनमें गीला होने की संभावना कम होती है, पिपेटिंग प्रक्रिया की सटीकता और परिशुद्धता में सुधार कर सकते हैं।
संदूषण
वितरण प्रक्रिया के दौरान, एरोसोल उत्पन्न होते हैं, जिन्हें यदि पिपेट के अंदर तक पहुंचने की अनुमति दी जाती है, तो संभावित रूप से अगले पिपेटिंग चरण के दौरान दूसरे नमूने को दूषित कर सकते हैं।फ़िल्टर युक्तियों या प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणालियों का उपयोग करके इसे रोका जा सकता है।
उपभोग्य वस्तुएं जैसेसुझावोंपीसीआर वर्कफ़्लो में उपयोग किए जाने वाले जहाजों और प्लेटों में ऐसे पदार्थ नहीं होने चाहिए जो नमूने से समझौता करते हैं या परिणाम को गलत साबित करते हैं।इनमें डीएनए, डीएनएसेस, आरनेसेस और पीसीआर अवरोधक, साथ ही ऐसे घटक शामिल हैं जो संभावित रूप से प्रतिक्रिया के दौरान सामग्री से निकल सकते हैं - लीचेबल्स के रूप में जाने जाने वाले पदार्थ।
उपयोगकर्ता त्रुटि
जितने अधिक नमूने संसाधित किए जाएंगे, त्रुटि का जोखिम उतना अधिक होगा।यह आसानी से हो सकता है कि एक नमूना गलत बर्तन या गलत कुएं में पाइप से डाल दिया जाए।कुओं के आसानी से पहचाने जा सकने वाले चिन्हांकन से इस जोखिम को काफी कम किया जा सकता है।वितरण चरणों के स्वचालन के माध्यम से, "मानव कारक", यानी, त्रुटियां और उपयोगकर्ता-संबंधित विविधताएं कम हो जाती हैं, इस प्रकार प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता बढ़ जाती है, खासकर छोटी प्रतिक्रिया मात्रा के मामले में।इसके लिए वर्कस्टेशन में नियोजित करने के लिए पर्याप्त आयामी स्थिरता वाली प्लेटों की आवश्यकता होती है।संलग्न बारकोड अतिरिक्त मशीन-पठनीयता प्रदान करते हैं, जो पूरी प्रक्रिया के दौरान नमूना ट्रैकिंग को सरल बनाता है।
थर्मोसाइक्लर की प्रोग्रामिंग
किसी उपकरण की प्रोग्रामिंग समय लेने वाली और साथ ही त्रुटि-प्रवण साबित हो सकती है।विभिन्न पीसीआर थर्मल साइक्लर सुविधाएँ इस प्रक्रिया चरण को सरल बनाने और, सबसे महत्वपूर्ण बात, इसे सुरक्षित बनाने के लिए एक साथ काम करती हैं:
आसान संचालन और अच्छा उपयोगकर्ता मार्गदर्शन कुशल प्रोग्रामिंग का आधार है।इस आधार पर, पासवर्ड-संरक्षित उपयोगकर्ता प्रशासन किसी के स्वयं के प्रोग्राम को अन्य उपयोगकर्ताओं द्वारा बदले जाने से रोकेगा।यदि कई साइक्लर (एक ही प्रकार के) उपयोग में हैं, तो यह फायदेमंद है अगर प्रोग्राम को यूएसबी या कनेक्टिविटी के माध्यम से सीधे एक उपकरण से दूसरे में स्थानांतरित किया जा सके।कंप्यूटर सॉफ़्टवेयर कंप्यूटर पर प्रोग्राम, उपयोगकर्ता अधिकारों और दस्तावेज़ों के केंद्रीय और सुरक्षित प्रशासन को सक्षम बनाता है।
पीसीआर चलायी
रन के दौरान, डीएनए को प्रतिक्रिया पोत में प्रवर्धित किया जाता है, जहां प्रत्येक नमूने को समान, सुसंगत प्रतिक्रिया स्थितियों के अधीन किया जाना चाहिए।इस प्रक्रिया के लिए निम्नलिखित पहलू प्रासंगिक हैं:
तापमान नियंत्रण
तापमान नियंत्रण में उत्कृष्ट सटीकता और साइक्लर ब्लॉक की एकरूपता सभी नमूनों की समान तापमान कंडीशनिंग का आधार है।हीटिंग और कूलिंग तत्वों (पेल्टियर तत्वों) की उच्च गुणवत्ता, साथ ही जिस तरह से ये ब्लॉक से जुड़े हुए हैं, वे निर्णायक कारक हैं जो तापमान विसंगतियों के जोखिम को निर्धारित करेंगे जिन्हें "किनारे प्रभाव" के रूप में जाना जाता है।
वाष्पीकरण
वाष्पीकरण के कारण प्रतिक्रिया के दौरान व्यक्तिगत प्रतिक्रिया घटकों की सांद्रता में बदलाव नहीं होना चाहिए।अन्यथा ऐसा बहुत कम संभव हैपीसीआर उत्पादउत्पन्न हो सकता है, या बिल्कुल भी नहीं।इसलिए सुरक्षित सील सुनिश्चित करके वाष्पीकरण को कम करना महत्वपूर्ण है।इस मामले में, थर्मोसाइक्लर का गर्म ढक्कन और बर्तन की सील साथ-साथ काम करते हैं।विभिन्न सीलिंग विकल्प उपलब्ध हैंपीसीआर प्लेटें (लिंक: सीलिंग लेख), जिससे हीट सीलिंग के माध्यम से सर्वोत्तम सील प्राप्त की जाती है।अन्य क्लोजर भी उपयुक्त हो सकते हैं, जब तक कि साइक्लर ढक्कन के संपर्क दबाव को चयनित सील में समायोजित किया जा सकता है।
लंबी अवधि में सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों को सुरक्षित रखने के लिए प्रक्रिया मानकीकरण लागू है।इसमें यह सुनिश्चित करने के लिए उपकरण का नियमित रखरखाव शामिल है कि यह हमेशा अच्छी कार्यशील स्थिति में रहे।उत्पादित सभी लॉट में सभी उपभोग्य वस्तुएं लगातार उच्च गुणवत्ता की होनी चाहिए, और उनकी विश्वसनीय उपलब्धता की गारंटी होनी चाहिए।
पोस्ट करने का समय: नवंबर-29-2022