प्रक्रियांच्या मानकीकरणामध्ये त्यांचे ऑप्टिमायझेशन आणि त्यानंतरची स्थापना आणि सामंजस्य यांचा समावेश होतो, ज्यामुळे दीर्घकालीन इष्टतम कार्यप्रदर्शन शक्य होते - वापरकर्त्यापासून स्वतंत्र.मानकीकरण उच्च-गुणवत्तेचे परिणाम, तसेच त्यांची पुनरुत्पादकता आणि तुलनात्मकता सुनिश्चित करते.
(क्लासिक) पीसीआरचे ध्येय विश्वसनीय आणि पुनरुत्पादक परिणामांची निर्मिती आहे.काही विशिष्ट अनुप्रयोगांसाठी, चे उत्पन्नपीसीआर उत्पादनदेखील संबंधित आहे.या प्रतिक्रियांसाठी, नमुन्यांशी तडजोड होणार नाही आणि PCR वर्कफ्लो स्थिर राहील याची काळजी घेणे आवश्यक आहे.विशेषतः, हे दूषिततेचा परिचय कमी करण्यासाठी अनुवादित करते ज्यामुळे चुकीचे सकारात्मक किंवा चुकीचे नकारात्मक परिणाम होऊ शकतात किंवा PCR प्रतिक्रिया देखील रोखू शकतात.शिवाय, धावण्याच्या आत प्रत्येक वैयक्तिक नमुन्यासाठी प्रतिक्रिया परिस्थिती शक्य तितक्या समान असावी आणि त्यानंतरच्या प्रतिक्रियांमध्ये (समान पद्धतीच्या) हस्तांतरणीय देखील असावे.हे अभिक्रियांच्या संरचनेचा तसेच सायकलरमधील तापमान नियंत्रणाच्या प्रकाराचा संदर्भ देते.वापरकर्त्याच्या चुका, अर्थातच, शक्य तितक्या टाळल्या पाहिजेत.
खाली, आम्ही पीसीआरच्या तयारीदरम्यान आणि संपूर्ण धावण्याच्या दरम्यान ज्या आव्हानांना सामोरे जावे लागते - आणि पीसीआर वर्कफ्लोच्या मानकीकरणासाठी वापरल्या जाणार्‍या उपकरणे आणि उपभोग्य वस्तूंच्या संदर्भात अस्तित्वात असलेल्या उपायांसाठीचे दृष्टिकोन दाखवू.
प्रतिक्रिया तयारी
अनुक्रमे पीसीआर-वाहिनी किंवा प्लेट्समध्ये प्रतिक्रिया घटकांच्या वितरणामध्ये अनेक आव्हाने आहेत ज्यांवर मात करणे आवश्यक आहे:
प्रतिक्रिया परिस्थिती
शक्य तितक्या समान प्रतिक्रिया परिस्थितीसाठी लक्ष्य ठेवताना वैयक्तिक घटकांचे अचूक आणि अचूक डोस अपरिहार्य आहे.चांगल्या पाइपिंग तंत्राव्यतिरिक्त, योग्य साधन निवडणे महत्वाचे आहे.पीसीआर मास्टर-मिक्समध्ये वारंवार असे पदार्थ असतात जे स्निग्धता वाढवतात किंवा फोम तयार करतात.पाईप टाकण्याच्या प्रक्रियेदरम्यान, यामुळे मोठ्या प्रमाणात ओले होतेपिपेट टिपा, अशा प्रकारे पाइपिंग अचूकता कमी करते.डायरेक्ट डिस्पेंसिंग सिस्टीम किंवा पर्यायी विंदुक टिपांचा वापर ज्यामध्ये ओले होण्याची शक्यता कमी असते, यामुळे पाइपिंग प्रक्रियेची अचूकता आणि अचूकता सुधारू शकते.
दूषित होणे
डिस्पेंसिंग प्रक्रियेदरम्यान, एरोसोल तयार केले जातात जे, जर विंदुकाच्या आतील भागात पोहोचू दिले तर, पुढील पाइपटिंग चरणादरम्यान संभाव्यतः दुसरा नमुना दूषित करू शकतात.हे फिल्टर टिप्स किंवा थेट विस्थापन प्रणाली वापरून प्रतिबंधित केले जाऊ शकते.
उपभोग्य वस्तू जसेटिपा, PCR वर्कफ्लोमध्ये वापरल्या जाणार्‍या वेसल्स आणि प्लेट्समध्ये नमुन्याशी तडजोड करणारे किंवा निकाल खोटे ठरवणारे पदार्थ नसावेत.यामध्ये DNA, DNases, RNases आणि PCR इनहिबिटर, तसेच प्रतिक्रियेदरम्यान सामग्रीमधून संभाव्य लीच होऊ शकणारे घटक समाविष्ट आहेत - लीचेबल म्हणून ओळखले जाणारे पदार्थ.
वापरकर्ता त्रुटी
जितके अधिक नमुने प्रक्रिया केली जातात तितकी त्रुटीचा धोका जास्त असतो.नमुना चुकीच्या पात्रात किंवा चुकीच्या विहिरीत टाकला गेल्याचे सहज घडू शकते.विहिरींचे सहज लक्षात येण्याजोगे चिन्हांकन करून हा धोका लक्षणीयरीत्या कमी केला जाऊ शकतो.डिस्पेंसिंग स्टेप्सच्या ऑटोमेशनद्वारे, "मानवी घटक", म्हणजे, त्रुटी आणि वापरकर्ता-संबंधित भिन्नता कमी केल्या जातात, अशा प्रकारे पुनरुत्पादकता वाढते, विशेषत: लहान प्रतिक्रिया खंडांच्या बाबतीत.यासाठी वर्कस्टेशनमध्ये पुरेशा मितीय स्थिरतेच्या प्लेट्सचा वापर करणे आवश्यक आहे.संलग्न बारकोड अतिरिक्त मशीन-वाचनीयता प्रदान करतात, जे संपूर्ण प्रक्रियेदरम्यान नमुना ट्रॅकिंग सुलभ करते.
थर्मोसायकलचे प्रोग्रामिंग
एखाद्या इन्स्ट्रुमेंटचे प्रोग्रामिंग करणे वेळखाऊ तसेच त्रुटी प्रवण असल्याचे सिद्ध होऊ शकते.विविध पीसीआर थर्मल सायकलर वैशिष्ट्ये या प्रक्रियेची पायरी सुलभ करण्यासाठी आणि सर्वात महत्त्वाचे म्हणजे ते सुरक्षित करण्यासाठी एकत्रितपणे कार्य करतात:
सुलभ ऑपरेशन आणि चांगले वापरकर्ता मार्गदर्शन हे कार्यक्षम प्रोग्रामिंगचा आधार आहे.या पायावर, पासवर्ड-संरक्षित वापरकर्ता प्रशासन इतर वापरकर्त्यांद्वारे स्वतःचे प्रोग्राम बदलण्यापासून प्रतिबंधित करेल.जर एकाधिक सायकलर्स (समान प्रकारचे) वापरात असतील, तर एक प्रोग्राम थेट USB किंवा कनेक्टिव्हिटी द्वारे एका साधनातून दुसर्‍या उपकरणावर हस्तांतरित केला जाऊ शकतो तर ते फायदेशीर आहे.संगणक सॉफ्टवेअर संगणकावरील कार्यक्रम, वापरकर्ता अधिकार आणि दस्तऐवजांचे केंद्रीय आणि सुरक्षित प्रशासन सक्षम करते.
पीसीआर चालवा
धावण्याच्या दरम्यान, प्रतिक्रिया पात्रात डीएनए वाढविला जातो, जेथे प्रत्येक नमुना समान, सुसंगत प्रतिक्रिया परिस्थितीच्या अधीन असावा.प्रक्रियेसाठी खालील बाबी संबंधित आहेत:
तापमान नियंत्रण
तापमान नियंत्रणातील उत्कृष्ट अचूकता आणि सायकलर ब्लॉकची एकसंधता हे सर्व नमुन्यांचे सम तापमान कंडिशनिंगसाठी आधार आहेत.हीटिंग आणि कूलिंग एलिमेंट्सची उच्च गुणवत्ता (पेल्टियर एलिमेंट्स), तसेच ते ज्या पद्धतीने ब्लॉकला जोडलेले आहेत, हे निर्णायक घटक आहेत जे "एज इफेक्ट" म्हणून ओळखल्या जाणार्‍या तापमानातील विसंगतीचा धोका निर्धारित करतील.
बाष्पीभवन
बाष्पीभवनामुळे प्रतिक्रियेच्या वेळी वैयक्तिक प्रतिक्रिया घटकांची सांद्रता बदलू नये.अन्यथा, हे अगदी कमी शक्य आहेपीसीआर उत्पादनव्युत्पन्न केले जाऊ शकते, किंवा काहीही नाही.त्यामुळे सुरक्षित सील सुनिश्चित करून बाष्पीभवन कमी करणे महत्त्वाचे आहे.या प्रकरणात, थर्मोसायलरचे तापलेले झाकण आणि जहाजाचे सील हातात हात घालून काम करतात.साठी वेगवेगळे सीलिंग पर्याय उपलब्ध आहेतपीसीआर प्लेट्स (लिंक: सीलिंग लेख), ज्याद्वारे उष्णता सीलिंगद्वारे सर्वोत्तम सील प्राप्त केले जाते.जोपर्यंत सायकलर झाकणाचा संपर्क दाब निवडलेल्या सीलमध्ये समायोजित केला जाऊ शकतो तोपर्यंत इतर बंद देखील योग्य असू शकतात.
दीर्घकालीन अचूक आणि पुनरुत्पादक परिणामांचे रक्षण करण्यासाठी प्रक्रियेचे मानकीकरण चालू आहे.यामध्ये उपकरणे नेहमी चांगल्या कार्यरत स्थितीत असल्याची खात्री करण्यासाठी त्यांची नियमित देखभाल समाविष्ट आहे.सर्व उपभोग्य वस्तू उत्पादित केलेल्या सर्व लॉटमध्ये सातत्याने उच्च दर्जाच्या असाव्यात आणि त्यांच्या विश्वसनीय उपलब्धतेची हमी दिली पाहिजे.
पोस्ट वेळ: नोव्हेंबर-29-2022