Die standaardisering van prosesse sluit hul optimalisering en daaropvolgende vestiging en harmonisering in, wat langtermyn-optimale prestasie moontlik maak – onafhanklik van die gebruiker.Standaardisering verseker hoë kwaliteit resultate, sowel as hul reproduceerbaarheid en vergelykbaarheid.
Die doel van (klassieke) PCR is die generering van 'n betroubare en reproduceerbare resultaat.Vir sekere toepassings is die opbrengs van diePCR produkis ook relevant.Vir hierdie reaksies moet sorg gedra word om te verseker dat monsters nie gekompromitteer word nie en dat die PCR-werkvloei stabiel bly.Spesifiek, dit kom neer op die vermindering van die bekendstelling van kontaminasies wat tot vals positiewe of vals negatiewe resultate kan lei of selfs die PKR-reaksie kan inhibeer.Verder moet die reaksietoestande so identies as moontlik vir elke individuele monster binne 'n lopie wees en ook oordraagbaar wees na daaropvolgende reaksies (van dieselfde metode).Dit verwys na die samestelling van die reaksies sowel as na die tipe temperatuurbeheer in die cycler.Gebruikersfoute moet natuurlik soveel as moontlik vermy word.
Hieronder sal ons die uitdagings demonstreer wat ondervind word tydens voorbereiding en deur die loop van 'n PKR – en die benaderings tot oplossings wat bestaan met betrekking tot instrumente en verbruiksgoedere wat gebruik word vir die standaardisering van die PKR-werkvloei.
Reaksie voorbereiding
Die reseptering van reaksiekomponente in onderskeidelik PCR-vate, of plate, behels veelvuldige uitdagings wat oorkom moet word:
Reaksietoestande
Die presiese en presiese dosering van die individuele komponente is onontbeerlik wanneer gemik word na die mees identiese reaksietoestande moontlik.Benewens 'n goeie pipettegniek, is die keuse van die regte gereedskap van kritieke belang.PCR-meestermengsels bevat dikwels stowwe wat die viskositeit verhoog of skuim genereer.Tydens die pipetproses lei dit tot aansienlike benatting van diepipetpunte, en verminder dus die akkuraatheid van pipet.Die gebruik van direkte resepteringstelsels of alternatiewe pipetpunte wat minder geneig is tot benatting kan die akkuraatheid en akkuraatheid van die pipetproses verbeter.
Besoedelings
Tydens die resepteringsproses word aërosols gegenereer wat, indien toegelaat om die binnekant van die pipet te bereik, moontlik 'n ander monster tydens die volgende pipeteringsstap kan besoedel.Dit kan voorkom word deur filterpunte of direkte verplasingstelsels te gebruik.
Verbruiksgoedere sooswenke, moet vate en plate wat in die PCR-werkvloei gebruik word, nie stowwe bevat wat die monster benadeel of die resultaat vervals nie.Dit sluit in DNA, DNases, RNases en PCR-inhibeerders, sowel as komponente wat moontlik uit die materiaal kan loog tydens die reaksie – stowwe wat bekend staan as uitloogbare stowwe.
Gebruikersfout
Hoe meer monsters verwerk word, hoe hoër is die foutrisiko.Dit kan maklik gebeur dat 'n monster in die verkeerde houer of die verkeerde put gepipetteer word.Hierdie risiko kan aansienlik verminder word deur maklik waarneembare merk van die putte.Deur die outomatisering van resepteringsstappe word die “menslike faktor”, dit wil sê foute en gebruikerverwante variasies, geminimaliseer, wat dus die reproduceerbaarheid verhoog, veral in die geval van klein reaksievolumes.Dit vereis plate met voldoende dimensionele stabiliteit om in 'n werkstasie gebruik te word.Aangehegte strepieskodes bied bykomende masjienleesbaarheid, wat monsternasporing deur die hele proses vergemaklik.
Programmering van die thermocycler
Programmering van 'n instrument kan tydrowend sowel as foutgevoelig wees.Verskillende PCR-termiese siklusfunksies werk saam om hierdie prosesstap te vereenvoudig en, bowenal, om dit veilig te maak:
Maklike werking en goeie gebruikersleiding is die basis van doeltreffende programmering.Gebou op hierdie fondament, sal wagwoordbeskermde gebruikersadministrasie verhoed dat 'n mens se eie programme deur ander gebruikers verander word.As verskeie fietsryers (van dieselfde tipe) in gebruik is, is dit voordelig as 'n program direk van een instrument na 'n ander oorgedra kan word via USB of konneksie.Rekenaarsagteware maak sentrale en veilige administrasie van programme, gebruikersregte en dokumente op 'n rekenaar moontlik.
PCR loop
Tydens die lopie word DNA in die reaksievat geamplifiseer, waar elke monster aan identiese, konsekwente reaksietoestande onderwerp moet word.Die volgende aspekte is relevant vir die proses:
Temperatuurbeheer
Uitstekende akkuraatheid in temperatuurbeheer en homogeniteit van die siklusblok is die basis vir egalige temperatuurkondisionering van alle monsters.Die hoë gehalte van die verhittings- en verkoelingselemente (peltierelemente), sowel as die manier waarop dit aan die blok gekoppel is, is die deurslaggewende faktore wat die risiko van temperatuurafwykings wat bekend staan as die "randeffek" sal bepaal
Verdamping
Die konsentrasies van die individuele reaksiekomponente behoort nie deur die verloop van die reaksie te verander as gevolg van verdamping nie.Andersins is dit moontlik dat baie minPCR produkkan gegenereer word, of glad nie.Dit is dus van kardinale belang om verdamping tot die minimum te beperk deur 'n veilige seël te verseker.In hierdie geval werk die verhitte deksel van die thermocycler en die seël van die houer hand aan hand.Verskillende seëlopsies is beskikbaar virPCR plate (skakel: Seël artikel), waardeur die beste verseëling verkry word deur hitte verseëling.Ander sluitings kan ook geskik wees, solank die kontakdruk van die fietsryer se deksel aangepas kan word by die geselekteerde seël.
Prosesstandaardisering is in plek om akkurate en reproduceerbare resultate op lang termyn te verseker.Dit sluit gereelde instandhouding van die toerusting in om te verseker dat dit altyd in 'n goeie werkende toestand is.Alle verbruiksgoedere moet van konsekwent hoë gehalte wees oor alle lotte wat geproduseer word, en hul betroubare beskikbaarheid moet gewaarborg word.
Pos tyd: Nov-29-2022