Стандардизацијата на процесите вклучува нивна оптимизација и последователно воспоставување и хармонизација, овозможувајќи долгорочни оптимални перформанси – независно од корисникот. Стандардизацијата обезбедува висококвалитетни резултати, како и нивна репродуктивност и споредливост.
Целта на (класичната) PCR е генерирање на сигурен и репродуктивен резултат. За одредени апликации, приносот наPCR производе исто така релевантно. За овие реакции, мора да се внимава да не се компромитираат примероците и дека работниот тек на PCR останува стабилен. Поточно, ова се преведува како минимизирање на внесувањето контаминација што би можело да доведе до лажно позитивни или лажно негативни резултати или дури и да ја инхибира PCR реакцијата. Понатаму, условите на реакцијата треба да бидат што е можно поидентични за секој поединечен примерок во рамките на едно испитување, а исто така да бидат преносливи на последователни реакции (од истиот метод). Ова се однесува на составот на реакциите, како и на видот на контрола на температурата во циклерот. Корисничките грешки, се разбира, треба да се избегнуваат колку што е можно повеќе.
Подолу, ќе ги покажеме предизвиците со кои се соочуваме за време на подготовката и во текот на PCR - и пристапите кон решенијата што постојат во однос на инструментите и потрошните материјали што се користат за стандардизација на работните процеси на PCR.
Подготовка на реакција
Доставувањето на компонентите на реакцијата во PCR-садови, или плочи, соодветно, опфаќа повеќе предизвици што мора да се надминат:
Услови на реакција
Точното и прецизно дозирање на поединечните компоненти е неопходно кога се стремиме кон што е можно поидентични услови на реакција. Покрај добрата техника на пипетирање, изборот на вистинската алатка е од клучно значење. PCR мастер-смесите често содржат супстанции кои го зголемуваат вискозитетот или создаваат пена. За време на процесот на пипетирање, ова доведува до значително навлажнување наврвови на пипета, со што се намалува точноста на пипетирањето. Употребата на системи за директно дозирање или алтернативни врвови на пипети кои се помалку склони кон влажнење може да ја подобри точноста и прецизноста на процесот на пипетирање.
Контаминации
За време на процесот на дозирање, се генерираат аеросоли кои, доколку им се дозволи да стигнат до внатрешноста на пипетата, потенцијално можат да контаминираат друг примерок за време на следниот чекор на пипетирање. Ова може да се спречи со користење на врвови за филтрирање или системи за директно поместување.
Потрошни материјали како што сесовети, садовите и плочите што се користат во работниот процес на PCR не смеат да содржат супстанции што го компромитираат примерокот или го фалсификуваат резултатот. Тие вклучуваат ДНК, ДНкази, РНази и PCR инхибитори, како и компоненти што потенцијално можат да се исцедат од материјалот за време на реакцијата - супстанции познати како исцедливи материи.
Корисничка грешка
Колку повеќе примероци се обработуваат, толку е поголем ризикот од грешка. Лесно може да се случи примерокот да се пипетира во погрешен сад или во погрешна бунарница. Овој ризик може значително да се намали со лесно забележливо обележување на бунарите. Преку автоматизација на чекорите на дозирање, „човечкиот фактор“, т.е. грешките и варијациите поврзани со корисникот, се минимизираат, со што се зголемува репродуктивноста, особено во случај на мали волумени на реакција. Ова бара употреба на плочи со доволна димензионална стабилност во работната станица. Прикачените баркодови обезбедуваат дополнителна машински читливост, што го поедноставува следењето на примероците во текот на целиот процес.
Програмирање на термоциклерот
Програмирањето на инструмент може да се покаже како одземање многу време, како и склоно кон грешки. Различни карактеристики на PCR термичкиот циклусер работат заедно за да го поедностават овој чекор од процесот и, најважно, да го направат безбеден:
Лесното ракување и доброто водство за користење се основа за ефикасно програмирање. Врз основа на ова, администрирањето на корисниците заштитено со лозинка ќе спречи другите корисници да ги менуваат сопствените програми. Доколку се користат повеќе циклатори (од ист тип), корисно е ако програмата може да се пренесе директно од еден инструмент на друг преку USB или конекција. Компјутерскиот софтвер овозможува централно и безбедно администрирање на програмите, корисничките права и документите на компјутер.
PCR тест
За време на процесот, ДНК се амплификува во реакцискиот сад, каде што секој примерок треба да биде подложен на идентични, конзистентни услови на реакција. Следните аспекти се релевантни за процесот:
Контрола на температурата
Одличната точност во контролата на температурата и хомогеноста на блокот за циклирање се основа за рамномерно температурно кондиционирање на сите примероци. Високиот квалитет на елементите за греење и ладење (Пелтие елементи), како и начинот на кој тие се поврзани со блокот, се одлучувачки фактори кои ќе го одредат ризикот од температурни разлики познати како „ефект на раб“.
Испарување
Концентрациите на поединечните компоненти на реакцијата не треба да се менуваат во текот на реакцијата поради испарување. Во спротивно, можно е многу малкуPCR производможе да се генерира или воопшто да не се генерира. Затоа е клучно да се минимизира испарувањето со обезбедување безбедно запечатување. Во овој случај, загреаниот капак на термоциклаторот и заптивката на садот работат рака под рака. Достапни се различни опции за запечатување заPCR плочи (линк: Артикал за запечатување), при што најдоброто запечатување се постигнува преку термичко запечатување. Други затворачи исто така може да бидат соодветни, сè додека контактниот притисок на капакот на цикличниот уред може да се прилагоди на избраното запечатување.
Стандардизацијата на процесите е воведена со цел да се обезбедат точни и репродуктивни резултати на долг рок. Ова вклучува редовно одржување на опремата за да се осигури дека таа е секогаш во добра работна состојба. Сите потрошни материјали треба да бидат со постојано висок квалитет во сите произведени серии, а нивната сигурна достапност мора да биде загарантирана.
Време на објавување: 29 ноември 2022 година