L-istandardizzazzjoni tal-proċessi tinkludi l-ottimizzazzjoni tagħhom u l-istabbiliment u l-armonizzazzjoni sussegwenti, li jippermettu prestazzjoni ottimali fit-tul – indipendentement mill-utent. L-istandardizzazzjoni tiżgura riżultati ta’ kwalità għolja, kif ukoll ir-riproduċibbiltà u l-komparabbiltà tagħhom.
L-għan tal-PCR (klassiku) huwa l-ġenerazzjoni ta' riżultat affidabbli u riproduċibbli. Għal ċerti applikazzjonijiet, ir-rendiment tal-Prodott tal-PCRhuwa wkoll rilevanti. Għal dawn ir-reazzjonijiet, trid tingħata attenzjoni biex jiġi żgurat li l-kampjuni ma jiġux kompromessi u li l-fluss tax-xogħol tal-PCR jibqa' stabbli. Speċifikament, dan jissarraf fil-minimizzazzjoni tal-introduzzjoni ta' kontaminazzjonijiet li jistgħu jwasslu għal riżultati foloz pożittivi jew foloz negattivi jew saħansitra jinibixxu r-reazzjoni tal-PCR. Barra minn hekk, il-kundizzjonijiet tar-reazzjoni għandhom ikunu identiċi kemm jista' jkun għal kull kampjun individwali fi ħdan ġirja u jkunu wkoll trasferibbli għal reazzjonijiet sussegwenti (tal-istess metodu). Dan jirreferi għall-kompożizzjoni tar-reazzjonijiet kif ukoll għat-tip ta' kontroll tat-temperatura fiċ-ċiklatur. L-iżbalji tal-utent, naturalment, għandhom jiġu evitati kemm jista' jkun.
Hawn taħt, se nuru l-isfidi li jinqalgħu waqt it-tħejjija u matul it-twettiq ta' PCR – u l-approċċi għal soluzzjonijiet li jeżistu fir-rigward tal-istrumenti u l-konsumabbli użati għall-istandardizzazzjoni tal-flussi tax-xogħol tal-PCR.
Preparazzjoni tar-reazzjoni
It-tqassim tal-komponenti tar-reazzjoni f'reċipjenti tal-PCR, jew pjanċi, rispettivament, jinkludi diversi sfidi li jridu jingħelbu:
Kundizzjonijiet ta' reazzjoni
Id-dożaġġ eżatt u preċiż tal-komponenti individwali huwa indispensabbli meta wieħed jimmira għall-aktar kundizzjonijiet ta' reazzjoni identiċi possibbli. Minbarra teknika tajba ta' pipettar, l-għażla tal-għodda t-tajba hija kritika. It-taħlitiet ewlenin tal-PCR spiss ikun fihom sustanzi li jżidu l-viskożità jew jiġġeneraw ragħwa. Matul il-proċess ta' pipettar, dawn iwasslu għal tixrib sostanzjali tal-ponot tal-pipetta, u b'hekk tnaqqas l-eżattezza tal-pipettar. L-użu ta' sistemi ta' distribuzzjoni diretta jew ponot alternattivi tal-pipetti li huma inqas suxxettibbli għat-tixrib jista' jtejjeb l-eżattezza u l-preċiżjoni tal-proċess tal-pipettar.
Kontaminazzjonijiet
Matul il-proċess tad-dispensazzjoni, jiġu ġġenerati aerosols li, jekk jitħallew jilħqu l-intern tal-pipetta, jistgħu potenzjalment jikkontaminaw kampjun ieħor matul il-pass li jmiss tal-pipettar. Dan jista' jiġi evitat bl-użu ta' ponot tal-filtru jew sistemi ta' spostament dirett.
Konsumabbli bħalpariri, ir-reċipjenti u l-pjanċi li jintużaw fil-fluss tax-xogħol tal-PCR m'għandhomx ikun fihom sustanzi li jikkompromettu l-kampjun jew jiffalsifikaw ir-riżultat. Dawn jinkludu DNA, DNases, RNases u inibituri tal-PCR, kif ukoll komponenti li potenzjalment jistgħu joħorġu mill-materjal matul ir-reazzjoni – sustanzi magħrufa bħala leachables.
Żball tal-utent
Iktar ma jiġu pproċessati kampjuni, iktar ikun għoli r-riskju ta' żball. Jista' faċilment jiġri li kampjun jiġi pipettat fil-kontenitur ħażin jew fil-bir ħażin. Dan ir-riskju jista' jitnaqqas konsiderevolment billi l-bjar jiġu mmarkati faċilment b'mod ċar. Permezz tal-awtomazzjoni tal-passi tad-dispensazzjoni, il-"fattur uman", jiġifieri, l-iżbalji u l-varjazzjonijiet relatati mal-utent, jiġu minimizzati, u b'hekk tiżdied ir-riproduċibbiltà, speċjalment fil-każ ta' volumi żgħar ta' reazzjoni. Dan jirrikjedi li pjanċi ta' stabbiltà dimensjonali suffiċjenti jintużaw f'workstation. Il-barcodes imwaħħla jipprovdu aktar qari mill-magni, li jissimplifika t-traċċar tal-kampjuni matul il-proċess kollu.
Programmazzjoni tat-termoċiklatur
L-ipprogrammar ta' strument jista' jkun li jieħu ħafna ħin kif ukoll suxxettibbli għall-iżbalji. Karatteristiċi differenti taċ-ċiklatur termali tal-PCR jaħdmu flimkien biex jissimplifikaw dan il-pass tal-proċess u, l-aktar importanti, biex jagħmluh sikur:
Tħaddim faċli u gwida tajba għall-utent huma l-bażi ta' programmazzjoni effiċjenti. Filwaqt li tibni fuq din il-pedament, l-amministrazzjoni tal-utenti protetta bil-password tipprevjeni li l-programmi ta' wieħed jiġu mibdula minn utenti oħra. Jekk qed jintużaw diversi ċiklaturi (tal-istess tip), ikun ta' benefiċċju jekk programm ikun jista' jiġi trasferit direttament minn strument għal ieħor permezz ta' USB jew konnettività. Is-softwer tal-kompjuter jippermetti amministrazzjoni ċentrali u sigura tal-programmi, id-drittijiet tal-utenti u d-dokumenti fuq kompjuter.
Ġirja tal-PCR
Matul il-proċess, id-DNA jiġi amplifikat fil-kontenitur tar-reazzjoni, fejn kull kampjun għandu jkun soġġett għal kundizzjonijiet ta' reazzjoni identiċi u konsistenti. L-aspetti li ġejjin huma rilevanti għall-proċess:
Kontroll tat-temperatura
Preċiżjoni eċċellenti fil-kontroll tat-temperatura u omoġenjità tal-blokk taċ-ċiklatur huma l-bażi għal kondizzjonament uniformi tat-temperatura tal-kampjuni kollha. Il-kwalità għolja tal-elementi tat-tisħin u tat-tkessiħ (elementi peltier), kif ukoll il-mod kif dawn huma konnessi mal-blokk, huma l-fatturi deċiżivi li jiddeterminaw ir-riskju ta' diskrepanzi fit-temperatura magħrufa bħala l-"effett tat-tarf".
Evaporazzjoni
Il-konċentrazzjonijiet tal-komponenti individwali tar-reazzjoni m'għandhomx jinbidlu matul ir-reazzjoni minħabba l-evaporazzjoni. Inkella, huwa possibbli li ftit li xejnProdott tal-PCRjista' jiġi ġġenerat, jew xejn. Għalhekk huwa kruċjali li tiġi minimizzata l-evaporazzjoni billi jiġi żgurat siġill sigur. F'dan il-każ, l-għatu msaħħan tat-termoċiklatur u s-siġill tal-kontenitur jaħdmu id f'id. Għażliet differenti ta' siġillar huma disponibbli għalPjanċi tal-PCR (link: Artiklu dwar is-siġillar), fejn l-aħjar siġill jinkiseb permezz tas-siġillar bis-sħana. Għeluq oħra jistgħu jkunu wkoll adattati, sakemm il-pressjoni tal-kuntatt tal-għatu taċ-ċiklatur tista' tiġi aġġustata għas-siġill magħżul.
L-istandardizzazzjoni tal-proċess hija fis-seħħ sabiex jiġu ssalvagwardjati riżultati preċiżi u riproduċibbli fit-tul. Dan jinkludi manutenzjoni regolari tat-tagħmir biex jiġi żgurat li dejjem ikun f'kundizzjoni tajba ta' ħidma. Il-konsumabbli kollha għandhom ikunu ta' kwalità għolja b'mod konsistenti fil-lottijiet kollha prodotti, u d-disponibbiltà affidabbli tagħhom trid tkun garantita.
Ħin tal-posta: 29 ta' Novembru 2022