प्रक्रियाहरूको मानकीकरणमा तिनीहरूको अनुकूलन र त्यसपछिको स्थापना र सामंजस्य समावेश छ, जसले प्रयोगकर्ताबाट स्वतन्त्र रूपमा दीर्घकालीन इष्टतम प्रदर्शनलाई अनुमति दिन्छ। मानकीकरणले उच्च-गुणस्तरको परिणामहरू, साथै तिनीहरूको पुनरुत्पादन र तुलनात्मकता सुनिश्चित गर्दछ।
(क्लासिक) PCR को लक्ष्य भनेको भरपर्दो र पुनरुत्पादन योग्य परिणामको उत्पादन हो। निश्चित अनुप्रयोगहरूको लागि, उपजPCR उत्पादनयो पनि सान्दर्भिक छ। यी प्रतिक्रियाहरूको लागि, नमूनाहरू सम्झौता नगरिएको र PCR कार्यप्रवाह स्थिर रहेको सुनिश्चित गर्न सावधानी अपनाउनु पर्छ। विशेष गरी, यसले गलत सकारात्मक वा गलत नकारात्मक परिणामहरू निम्त्याउन सक्ने वा PCR प्रतिक्रियालाई पनि रोक्न सक्ने दूषित पदार्थहरूको परिचयलाई कम गर्न अनुवाद गर्दछ। यसबाहेक, प्रतिक्रिया अवस्थाहरू एक रन भित्र प्रत्येक व्यक्तिगत नमूनाको लागि सकेसम्म समान हुनुपर्छ र पछिल्ला प्रतिक्रियाहरूमा (एउटै विधिको) स्थानान्तरण योग्य हुनुपर्छ। यसले प्रतिक्रियाहरूको संरचना साथै साइकलरमा तापक्रम नियन्त्रणको प्रकारलाई जनाउँछ। प्रयोगकर्ता त्रुटिहरू, अवश्य पनि, सकेसम्म धेरै बेवास्ता गर्नुपर्छ।
तल, हामी तयारीको क्रममा र PCR को दौड भरि सामना गर्ने चुनौतीहरू - र PCR कार्यप्रवाहको मानकीकरणको लागि प्रयोग गरिने उपकरणहरू र उपभोग्य वस्तुहरूको सन्दर्भमा अवस्थित समाधानहरूको दृष्टिकोणहरू प्रदर्शन गर्नेछौं।
प्रतिक्रियाको तयारी
प्रतिक्रिया घटकहरूको वितरण क्रमशः PCR-भाँडाहरू, वा प्लेटहरूमा, धेरै चुनौतीहरू समावेश गर्दछ जुन पार गर्नुपर्छ:
प्रतिक्रिया अवस्थाहरू
सम्भव भएसम्म समान प्रतिक्रिया अवस्थाहरूको लागि लक्ष्य गर्दा व्यक्तिगत कम्पोनेन्टहरूको सही र सटीक खुराक अपरिहार्य छ। राम्रो पाइपेटिङ प्रविधिको अतिरिक्त, सही उपकरण छनौट गर्नु महत्त्वपूर्ण छ। PCR मास्टर-मिक्सहरूमा प्रायः चिपचिपापन बढाउने वा फोम उत्पन्न गर्ने पदार्थहरू हुन्छन्। पाइपेटिङ प्रक्रियाको क्रममा, यसले पर्याप्त मात्रामा भिजेको बनाउँछ।पिपेट टिप्स, जसले गर्दा पाइपेटिङको शुद्धता घट्छ। भिजेको कम सम्भावना हुने प्रत्यक्ष वितरण प्रणाली वा वैकल्पिक पाइपेट टिप्सको प्रयोगले पाइपेटिङ प्रक्रियाको शुद्धता र शुद्धतामा सुधार गर्न सक्छ।
प्रदूषणहरू
वितरण प्रक्रियाको क्रममा, एरोसोलहरू उत्पन्न हुन्छन् जुन, यदि पिपेटको भित्री भागमा पुग्न अनुमति दिइयो भने, अर्को पाइपेटिङ चरणको समयमा सम्भावित रूपमा अर्को नमूनालाई दूषित गर्न सक्छ। फिल्टर टिप्स वा प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणालीहरू प्रयोग गरेर यसलाई रोक्न सकिन्छ।
उपभोग्य वस्तुहरू जस्तैसुझावहरू, PCR कार्यप्रवाहमा प्रयोग हुने भाँडा र प्लेटहरूमा नमूनालाई क्षति पुर्याउने वा नतिजालाई झूटो बनाउने पदार्थहरू हुनुहुँदैन। यसमा DNA, DNases, RNases र PCR अवरोधकहरू, साथै प्रतिक्रियाको क्रममा सामग्रीबाट सम्भावित रूपमा चुहिन सक्ने घटकहरू - लीचेबलहरू भनेर चिनिने पदार्थहरू समावेश छन्।
प्रयोगकर्ता त्रुटि
जति धेरै नमूनाहरू प्रशोधन गरिन्छ, त्रुटिको जोखिम त्यति नै बढी हुन्छ। यो सजिलै हुन सक्छ कि नमूना गलत भाँडो वा गलत इनारमा पाइप गरिएको छ। इनारहरूको सजिलैसँग देख्न सकिने चिन्ह लगाएर यो जोखिमलाई धेरै हदसम्म कम गर्न सकिन्छ। वितरण चरणहरूको स्वचालन मार्फत, "मानव कारक", अर्थात्, त्रुटिहरू र प्रयोगकर्ता-सम्बन्धित भिन्नताहरू, कम गरिन्छन्, जसले गर्दा पुनरुत्पादन क्षमता बढ्छ, विशेष गरी सानो प्रतिक्रिया भोल्युमको अवस्थामा। यसको लागि कार्यस्थानमा पर्याप्त आयामी स्थिरताका प्लेटहरू प्रयोग गर्न आवश्यक पर्दछ। संलग्न बारकोडहरूले थप मेसिन-पठनीयता प्रदान गर्दछ, जसले सम्पूर्ण प्रक्रियाभरि नमूना ट्र्याकिङलाई सरल बनाउँछ।
थर्मोसाइक्लरको प्रोग्रामिङ
उपकरण प्रोग्रामिङ गर्न समय लाग्ने र त्रुटि हुने सम्भावना पनि हुन सक्छ। विभिन्न PCR थर्मल साइकलर सुविधाहरूले यो प्रक्रिया चरणलाई सरल बनाउन र सबैभन्दा महत्त्वपूर्ण कुरा, यसलाई सुरक्षित बनाउन सँगै काम गर्छन्:
सजिलो सञ्चालन र राम्रो प्रयोगकर्ता मार्गदर्शन कुशल प्रोग्रामिङको आधार हो। यस जगमा निर्माण गर्दा, पासवर्ड-सुरक्षित प्रयोगकर्ता प्रशासनले आफ्नै कार्यक्रमहरूलाई अन्य प्रयोगकर्ताहरूद्वारा परिवर्तन हुनबाट रोक्नेछ। यदि धेरै साइकलरहरू (एउटै प्रकारका) प्रयोगमा छन् भने, USB वा कनेक्टिभिटी मार्फत एक उपकरणबाट अर्को उपकरणमा सिधै स्थानान्तरण गर्न सकिन्छ भने यो लाभदायक हुन्छ। कम्प्युटर सफ्टवेयरले कम्प्युटरमा कार्यक्रमहरू, प्रयोगकर्ता अधिकारहरू र कागजातहरूको केन्द्रीय र सुरक्षित प्रशासन सक्षम बनाउँछ।
PCR रन
दौडको क्रममा, प्रतिक्रिया पोतमा डीएनए प्रवर्द्धन गरिन्छ, जहाँ प्रत्येक नमूना समान, सुसंगत प्रतिक्रिया अवस्थाहरूको अधीनमा हुनुपर्छ। प्रक्रियाको लागि निम्न पक्षहरू सान्दर्भिक छन्:
तापक्रम नियन्त्रण
तापक्रम नियन्त्रणमा उत्कृष्ट शुद्धता र साइकलर ब्लकको एकरूपता सबै नमूनाहरूको समान तापक्रम कन्डिसनिङको आधार हो। ताप र शीतलन तत्वहरूको उच्च गुणस्तर (पेल्टियर तत्वहरू), साथै यी ब्लकमा जडान हुने तरिका, "किनारा प्रभाव" भनेर चिनिने तापक्रम विसंगतिहरूको जोखिम निर्धारण गर्ने निर्णायक कारकहरू हुन्।
वाष्पीकरण
वाष्पीकरणको कारणले प्रतिक्रियाको क्रममा व्यक्तिगत प्रतिक्रिया घटकहरूको सांद्रता परिवर्तन हुनु हुँदैन। अन्यथा, यो सम्भव छ कि धेरै कमPCR उत्पादनउत्पन्न हुन सक्छ, वा कुनै पनि होइन। त्यसैले सुरक्षित सिल सुनिश्चित गरेर वाष्पीकरण कम गर्नु महत्त्वपूर्ण छ। यस अवस्थामा, थर्मोसाइक्लरको तताइएको ढक्कन र भाँडाको सिल हातमा हात मिलाएर काम गर्छन्। विभिन्न सिलिङ विकल्पहरू उपलब्ध छन्।पीसीआर प्लेटहरू (लिङ्क: सिलिङ लेख), जसद्वारा ताप सिलिङ मार्फत उत्तम सिल प्राप्त गरिन्छ। अन्य क्लोजरहरू पनि उपयुक्त हुन सक्छन्, जबसम्म साइकलर ढक्कनको सम्पर्क दबाब चयन गरिएको सिलमा समायोजन गर्न सकिन्छ।
दीर्घकालीन रूपमा सही र पुनरुत्पादनयोग्य परिणामहरू सुरक्षित गर्न प्रक्रिया मानकीकरण गरिएको छ। यसमा उपकरणहरू सधैं राम्रो काम गर्ने अवस्थामा छन् भनी सुनिश्चित गर्न नियमित मर्मतसम्भार समावेश छ। उत्पादन गरिएका सबै लटहरूमा सबै उपभोग्य वस्तुहरू निरन्तर उच्च गुणस्तरका हुनुपर्छ, र तिनीहरूको भरपर्दो उपलब्धताको ग्यारेन्टी हुनुपर्छ।
पोस्ट समय: नोभेम्बर-२९-२०२२