Normalizasyon pwosesis yo gen ladan optimize yo epi etablisman ak amonizasyon ki vin apre a, sa ki pèmèt pèfòmans optimal alontèm – endepandan de itilizatè a. Normalizasyon an asire rezilta kalite siperyè, ansanm ak repwodiktibilite ak konparablite yo.
Objektif PCR (klasik) la se jenere yon rezilta serye ak reproduktib. Pou sèten aplikasyon, rannman anPwodwi PCRsa enpòtan tou. Pou reyaksyon sa yo, fòk yo pran prekosyon pou asire ke echantiyon yo pa konpwomèt epi ke workflow PCR a rete estab. Espesyalman, sa vle di minimize entwodiksyon kontaminasyon ki ta ka mennen nan rezilta fo pozitif oswa fo negatif oswa menm anpeche reyaksyon PCR a. Anplis de sa, kondisyon reyaksyon yo ta dwe idantik otank posib pou chak echantiyon endividyèl nan yon seri epi yo ta dwe transfere tou nan reyaksyon ki vin apre yo (nan menm metòd la). Sa refere a konpozisyon reyaksyon yo ansanm ak kalite kontwòl tanperati nan siklè a. Natirèlman, yo dwe evite erè itilizatè yo otank posib.
Anba a, nou pral demontre defi ki rankontre pandan preparasyon an ak pandan tout pwosesis yon PCR – ansanm ak apwòch solisyon ki egziste anrapò ak enstriman ak konsomab yo itilize pou normalizasyon pwosesis PCR yo.
Preparasyon reyaksyon
Distribisyon konpozan reyaksyon yo nan veso PCR yo, oubyen plak yo, respektivman, gen plizyè defi pou simonte:
Kondisyon reyaksyon yo
Dozaj egzak ak presi chak konpozan endispansab lè w ap chèche kondisyon reyaksyon ki pi idantik posib. Anplis yon bon teknik pipètaj, chwazi bon zouti a enpòtan anpil. Melanj prensipal PCR yo souvan gen sibstans ki ogmante viskozite oswa ki pwodui kim. Pandan pwosesis pipètaj la, sa yo lakòz yon gwo mouyaj nan...pwent pipèt, kidonk diminye presizyon pipètaj la. Itilizasyon sistèm distribisyon dirèk oswa pwent pipèt altènatif ki mwens gen tandans mouye ka amelyore presizyon ak presizyon pwosesis pipètaj la.
Kontaminasyon
Pandan pwosesis distribisyon an, ayewosòl yo pwodui, ki si yo kite yo rive andedan pipèt la, ka potansyèlman kontamine yon lòt echantiyon pandan pwochen etap pipetaj la. Ou ka anpeche sa lè w sèvi ak pwent filtè oswa sistèm deplasman dirèk.
Konsomab tankoukonsèy, veso ak plak yo itilize nan pwosesis PCR a pa dwe gen sibstans ki ka konpwomèt echantiyon an oswa falsifye rezilta a. Sa yo enkli ADN, DNaz, RNaz ak inibitè PCR, ansanm ak konpozan ki ka potansyèlman koule nan materyèl la pandan reyaksyon an - sibstans yo rele sibstans ki ka koule.
Erè itilizatè
Plis echantiyon yo trete, se plis risk erè a wo. Li ka fasil pou yo pipete yon echantiyon nan move veso a oswa nan move pi a. Risk sa a ka redwi anpil lè yo make pi yo yon fason ki fasil pou wè. Atravè automatisation etap distribisyon yo, "faktè imen an", sa vle di erè ak varyasyon ki gen rapò ak itilizatè a, minimize, kidonk ogmante repwodiktibilite, sitou nan ka ti volim reyaksyon. Sa mande pou plak ki gen ase estabilite dimansyonèl pou yo ka itilize nan yon estasyon travay. Kòd bar ki tache yo bay plis lizibilite machin, ki senplifye swivi echantiyon an pandan tout pwosesis la.
Pwogramasyon tèmosiklè a
Pwogramasyon yon enstriman ka pran anpil tan epi li ka gen anpil erè. Diferan karakteristik siklè tèmik PCR yo travay ansanm pou senplifye etap pwosesis sa a epi, sa ki pi enpòtan, pou fè li an sekirite:
Fasil pou itilize ak bon gidans pou itilizatè yo se baz yon pwogramasyon efikas. Baze sou fondasyon sa a, administrasyon itilizatè pwoteje ak modpas ap anpeche lòt itilizatè modifye pwòp pwogram yon moun. Si plizyè siklè (menm kalite) ap itilize, li benefik si yon pwogram ka transfere dirèkteman soti nan yon enstriman nan yon lòt atravè USB oswa koneksyon. Lojisyèl òdinatè pèmèt administrasyon santral ak an sekirite pwogram yo, dwa itilizatè yo ak dokiman yo sou yon òdinatè.
Kous PCR
Pandan pwosesis la, ADN anplifye nan veso reyaksyon an, kote chak echantiyon ta dwe sibi kondisyon reyaksyon idantik ak konsistan. Aspè sa yo enpòtan pou pwosesis la:
Kontwòl tanperati
Ekselan presizyon nan kontwòl tanperati ak omojènite blòk siklè a se baz pou yon kondisyone tanperati inifòm nan tout echantiyon yo. Bon jan kalite eleman chofaj ak refwadisman yo (eleman Peltier), ansanm ak fason yo konekte ak blòk la, se faktè desizif ki pral detèmine risk pou diferans tanperati yo ke yo rekonèt kòm "efè kwen" an.
Evaporasyon
Konsantrasyon chak konpozan reyaksyon pa ta dwe chanje pandan reyaksyon an akòz evaporasyon. Sinon, li posib ke trè ti krasPwodwi PCRka pwodui, oswa pa pwodui ditou. Se poutèt sa li enpòtan pou minimize evaporasyon an lè w asire yon sele ki an sekirite. Nan ka sa a, kouvèti chofe tèmosiklè a ak sele veso a travay men nan men. Gen diferan opsyon sele ki disponib pouPlak PCR (lyen: Atik sou sele), kote pi bon sele a reyalize atravè sele chalè. Lòt fèmen yo kapab apwopriye tou, depi presyon kontak kouvèti siklaj la ka ajiste selon sele ki chwazi a.
Gen yon normalizasyon pwosesis an plas pou pwoteje rezilta ki egzat e ki ka repwodui sou yon long tèm. Sa gen ladan l antretyen regilye ekipman an pou asire ke li toujou an bon kondisyon. Tout konsomab yo ta dwe gen yon kalite ki konsistan nan tout lo ki pwodui yo, epi yo dwe garanti disponiblite serye yo.
Dat piblikasyon: 29 novanm 2022