செயல்முறைகளின் தரப்படுத்தலில் அவற்றின் உகப்பாக்கம், அதைத் தொடர்ந்து நிறுவுதல் மற்றும் ஒத்திசைவு ஆகியவை அடங்கும், இது பயனரைச் சாராமல் நீண்டகால உகந்த செயல்திறனை அனுமதிக்கிறது. தரப்படுத்தல் உயர்தர முடிவுகளை உறுதி செய்கிறது, அதே போல் அவற்றின் மறுஉருவாக்கம் மற்றும் ஒப்பீட்டுத்தன்மையையும் உறுதி செய்கிறது.
(கிளாசிக்) PCR இன் குறிக்கோள் நம்பகமான மற்றும் மீண்டும் உருவாக்கக்கூடிய முடிவை உருவாக்குவதாகும். சில பயன்பாடுகளுக்கு, இதன் மகசூல்PCR தயாரிப்புமேலும் பொருத்தமானது. இந்த எதிர்வினைகளுக்கு, மாதிரிகள் பாதிக்கப்படாமல் இருப்பதையும், PCR பணிப்பாய்வு நிலையானதாக இருப்பதையும் உறுதி செய்ய கவனமாக இருக்க வேண்டும். குறிப்பாக, இது தவறான நேர்மறை அல்லது தவறான எதிர்மறை முடிவுகளுக்கு வழிவகுக்கும் அல்லது PCR எதிர்வினையைத் தடுக்கக்கூடிய மாசுபாடுகளின் அறிமுகத்தைக் குறைக்கிறது. மேலும், எதிர்வினை நிலைமைகள் ஒரு ஓட்டத்திற்குள் ஒவ்வொரு தனிப்பட்ட மாதிரிக்கும் முடிந்தவரை ஒரே மாதிரியாக இருக்க வேண்டும் மற்றும் அடுத்தடுத்த எதிர்வினைகளுக்கு (அதே முறையின்) மாற்றத்தக்கதாக இருக்க வேண்டும். இது எதிர்வினைகளின் கலவை மற்றும் சுழற்சியில் வெப்பநிலை கட்டுப்பாட்டு வகையைக் குறிக்கிறது. பயனர் பிழைகள், நிச்சயமாக, முடிந்தவரை தவிர்க்கப்பட வேண்டும்.
கீழே, தயாரிப்பின் போதும், PCR சோதனையின் போதும் எதிர்கொள்ளும் சவால்களையும், PCR பணிப்பாய்வுகளை தரப்படுத்துவதற்குப் பயன்படுத்தப்படும் கருவிகள் மற்றும் நுகர்பொருட்கள் தொடர்பான தீர்வுகளுக்கான அணுகுமுறைகளையும் நாங்கள் காண்பிப்போம்.
எதிர்வினை தயாரிப்பு
எதிர்வினை கூறுகளை முறையே PCR-குழாய்கள் அல்லது தட்டுகளில் விநியோகிப்பது பல சவால்களை உள்ளடக்கியது, அவை கடக்கப்பட வேண்டும்:
எதிர்வினை நிலைமைகள்
ஒரே மாதிரியான எதிர்வினை நிலைமைகளை இலக்காகக் கொள்ளும்போது, தனிப்பட்ட கூறுகளின் துல்லியமான மற்றும் துல்லியமான அளவை அவசியமானது. ஒரு நல்ல குழாய் பதிக்கும் நுட்பத்துடன் கூடுதலாக, சரியான கருவியைத் தேர்ந்தெடுப்பது மிக முக்கியம். PCR மாஸ்டர்-கலவைகளில் அடிக்கடி பாகுத்தன்மையை அதிகரிக்கும் அல்லது நுரை உருவாக்கும் பொருட்கள் உள்ளன. குழாய் பதிக்கும் செயல்பாட்டின் போது, இவை குறிப்பிடத்தக்க அளவு ஈரப்பதத்திற்கு வழிவகுக்கும்.பைப்பெட் முனைகள்இதனால் குழாய் பதிக்கும் துல்லியம் குறைகிறது. நேரடி விநியோக அமைப்புகள் அல்லது ஈரப்பதம் குறைவாக இருக்கும் மாற்று பைப்பெட் முனைகளைப் பயன்படுத்துவது குழாய் பதிக்கும் செயல்முறையின் துல்லியத்தையும் துல்லியத்தையும் மேம்படுத்தலாம்.
மாசுபாடுகள்
விநியோகிக்கும் செயல்பாட்டின் போது, ஏரோசோல்கள் உருவாக்கப்படுகின்றன, அவை பைப்பட்டின் உட்புறத்தை அடைய அனுமதிக்கப்பட்டால், அடுத்த குழாய் பதிக்கும் படியின் போது மற்றொரு மாதிரியை மாசுபடுத்தக்கூடும். வடிகட்டி குறிப்புகள் அல்லது நேரடி இடப்பெயர்ச்சி அமைப்புகளைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் இதைத் தடுக்கலாம்.
போன்ற நுகர்பொருட்கள்குறிப்புகள், PCR பணிப்பாய்வில் பயன்படுத்தப்படும் பாத்திரங்கள் மற்றும் தட்டுகளில் மாதிரியை சமரசம் செய்யும் அல்லது முடிவைப் பொய்யாக்கும் பொருட்கள் இருக்கக்கூடாது. இவற்றில் DNA, DNases, RNases மற்றும் PCR தடுப்பான்கள், அத்துடன் எதிர்வினையின் போது பொருளிலிருந்து கசிந்து போகக்கூடிய கூறுகள் - கசிவு பொருட்கள் எனப்படும் பொருட்கள் ஆகியவை அடங்கும்.
பயனர் பிழை
அதிக மாதிரிகள் செயலாக்கப்படுவதால், பிழை ஆபத்து அதிகமாகும். ஒரு மாதிரி தவறான பாத்திரத்திலோ அல்லது தவறான கிணற்றிலோ குழாய் பதிக்கப்படுவது எளிதாக நிகழலாம். கிணறுகளை எளிதில் அடையாளம் காணக்கூடிய வகையில் குறிப்பதன் மூலம் இந்த ஆபத்தை கணிசமாகக் குறைக்கலாம். விநியோக படிகளின் தானியங்கி மூலம், "மனித காரணி", அதாவது பிழைகள் மற்றும் பயனர் தொடர்பான மாறுபாடுகள் குறைக்கப்படுகின்றன, இதனால் இனப்பெருக்கம் அதிகரிக்கிறது, குறிப்பாக சிறிய எதிர்வினை அளவுகளின் விஷயத்தில். இதற்கு ஒரு பணிநிலையத்தில் பயன்படுத்த போதுமான பரிமாண நிலைத்தன்மை கொண்ட தட்டுகள் தேவைப்படுகின்றன. இணைக்கப்பட்ட பார்கோடுகள் கூடுதல் இயந்திர-படிக்கக்கூடிய தன்மையை வழங்குகின்றன, இது முழு செயல்முறையிலும் மாதிரி கண்காணிப்பை எளிதாக்குகிறது.
வெப்ப சுழற்சி இயந்திரத்தின் நிரலாக்கம்
ஒரு கருவியை நிரலாக்கம் செய்வது நேரத்தை எடுத்துக்கொள்ளும் மற்றும் பிழை ஏற்படக்கூடியதாக நிரூபிக்கப்படலாம். இந்த செயல்முறை படிநிலையை எளிதாக்குவதற்கும், மிக முக்கியமாக, அதைப் பாதுகாப்பாக மாற்றுவதற்கும் வெவ்வேறு PCR வெப்ப சுழற்சி அம்சங்கள் ஒன்றிணைந்து செயல்படுகின்றன:
எளிதான செயல்பாடு மற்றும் நல்ல பயனர் வழிகாட்டுதல் ஆகியவை திறமையான நிரலாக்கத்தின் அடிப்படையாகும். இந்த அடித்தளத்தை அடிப்படையாகக் கொண்டு, கடவுச்சொல் பாதுகாக்கப்பட்ட பயனர் நிர்வாகம் ஒருவரின் சொந்த நிரல்களை மற்ற பயனர்கள் மாற்றுவதைத் தடுக்கும். பல சைக்கிளர்கள் (ஒரே வகை) பயன்பாட்டில் இருந்தால், ஒரு நிரலை USB அல்லது இணைப்பு வழியாக ஒரு கருவியிலிருந்து மற்றொரு கருவிக்கு நேரடியாக மாற்ற முடிந்தால் அது நன்மை பயக்கும். கணினி மென்பொருள் ஒரு கணினியில் நிரல்கள், பயனர் உரிமைகள் மற்றும் ஆவணங்களின் மைய மற்றும் பாதுகாப்பான நிர்வாகத்தை செயல்படுத்துகிறது.
PCR ஓட்டம்
ஓட்டத்தின் போது, எதிர்வினைக் கலனில் டி.என்.ஏ பெருக்கப்படுகிறது, அங்கு ஒவ்வொரு மாதிரியும் ஒரே மாதிரியான, நிலையான எதிர்வினை நிலைமைகளுக்கு உட்படுத்தப்பட வேண்டும். பின்வரும் அம்சங்கள் செயல்முறைக்கு பொருத்தமானவை:
வெப்பநிலை கட்டுப்பாடு
வெப்பநிலை கட்டுப்பாட்டில் சிறந்த துல்லியம் மற்றும் சைக்லர் தொகுதியின் ஒருமைப்பாடு ஆகியவை அனைத்து மாதிரிகளின் சீரான வெப்பநிலை சீரமைப்புக்கு அடிப்படையாகும். வெப்பமூட்டும் மற்றும் குளிரூட்டும் கூறுகளின் (பெல்டியர் கூறுகள்) உயர் தரம், அத்துடன் அவை தொகுதியுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ள விதம் ஆகியவை "எட்ஜ் விளைவு" எனப்படும் வெப்பநிலை முரண்பாடுகளின் அபாயத்தை தீர்மானிக்கும் தீர்மானிக்கும் காரணிகளாகும்.
ஆவியாதல்
ஆவியாதல் காரணமாக வினையின் போது தனிப்பட்ட வினை கூறுகளின் செறிவுகள் மாறக்கூடாது. இல்லையெனில், மிகக் குறைவாகவே இருக்க வாய்ப்புள்ளது.PCR தயாரிப்புஉருவாக்கப்படலாம், அல்லது எதுவும் உருவாக்கப்படாமலும் இருக்கலாம். எனவே பாதுகாப்பான முத்திரையை உறுதி செய்வதன் மூலம் ஆவியாதலைக் குறைப்பது மிக முக்கியம். இந்த விஷயத்தில், தெர்மோசைக்ளரின் சூடான மூடியும் பாத்திரத்தின் முத்திரையும் கைகோர்த்து செயல்படுகின்றன. வெவ்வேறு சீலிங் விருப்பங்கள் உள்ளன.PCR தகடுகள் (இணைப்பு: சீலிங் கட்டுரை), இதன் மூலம் வெப்ப சீலிங் மூலம் சிறந்த சீலிங் அடையப்படுகிறது. சைக்லர் மூடியின் தொடர்பு அழுத்தத்தை தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட சீலுடன் சரிசெய்ய முடியும் வரை, மற்ற மூடல்களும் பொருத்தமானதாக இருக்கலாம்.
நீண்ட காலத்திற்கு துல்லியமான மற்றும் மீண்டும் உருவாக்கக்கூடிய முடிவுகளைப் பாதுகாப்பதற்காக செயல்முறை தரப்படுத்தல் நடைமுறையில் உள்ளது. உபகரணங்கள் எப்போதும் நல்ல வேலை நிலையில் இருப்பதை உறுதி செய்வதற்காக, அதன் வழக்கமான பராமரிப்பு இதில் அடங்கும். உற்பத்தி செய்யப்படும் அனைத்து லாட்களிலும் அனைத்து நுகர்பொருட்களும் தொடர்ந்து உயர் தரத்தில் இருக்க வேண்டும், மேலும் அவற்றின் நம்பகமான கிடைக்கும் தன்மை உறுதி செய்யப்பட வேண்டும்.
இடுகை நேரம்: நவம்பர்-29-2022