प्रक्रियांच्या मानकीकरणामध्ये त्यांचे ऑप्टिमायझेशन आणि त्यानंतरची स्थापना आणि सुसंवाद यांचा समावेश होतो, ज्यामुळे वापरकर्त्यापासून स्वतंत्रपणे दीर्घकालीन इष्टतम कामगिरी शक्य होते. मानकीकरण उच्च-गुणवत्तेचे परिणाम तसेच त्यांची पुनरुत्पादनक्षमता आणि तुलनात्मकता सुनिश्चित करते.
(क्लासिक) पीसीआरचे ध्येय म्हणजे विश्वासार्ह आणि पुनरुत्पादनक्षम निकाल निर्माण करणे. काही विशिष्ट अनुप्रयोगांसाठी,पीसीआर उत्पादनहे देखील संबंधित आहे. या प्रतिक्रियांसाठी, नमुने धोक्यात येणार नाहीत आणि पीसीआर कार्यप्रवाह स्थिर राहील याची काळजी घेतली पाहिजे. विशेषतः, याचा अर्थ असा की अशा दूषित पदार्थांचा परिचय कमी करणे ज्यामुळे खोटे सकारात्मक किंवा खोटे नकारात्मक परिणाम होऊ शकतात किंवा पीसीआर प्रतिक्रिया देखील रोखू शकतात. शिवाय, एका रनमधील प्रत्येक वैयक्तिक नमुन्यासाठी प्रतिक्रिया परिस्थिती शक्य तितक्या सारख्या असाव्यात आणि त्यानंतरच्या प्रतिक्रियांमध्ये (त्याच पद्धतीने) हस्तांतरित करण्यायोग्य असाव्यात. हे प्रतिक्रियांच्या रचनेचा तसेच सायकलरमधील तापमान नियंत्रणाच्या प्रकाराचा संदर्भ देते. अर्थात, वापरकर्त्याच्या चुका शक्य तितक्या टाळल्या पाहिजेत.
खाली, आम्ही तयारी दरम्यान आणि पीसीआरच्या संपूर्ण प्रक्रियेदरम्यान येणाऱ्या आव्हानांचे आणि पीसीआर वर्कफ्लोच्या मानकीकरणासाठी वापरल्या जाणाऱ्या उपकरणांच्या आणि उपभोग्य वस्तूंच्या संदर्भात अस्तित्वात असलेल्या उपायांचे दृष्टिकोन दाखवू.
प्रतिक्रिया तयारी
अनुक्रमे पीसीआर-वाहिन्यांमध्ये किंवा प्लेट्समध्ये प्रतिक्रिया घटकांचे वितरण करण्यामध्ये अनेक आव्हाने आहेत ज्यांवर मात करणे आवश्यक आहे:
प्रतिक्रिया परिस्थिती
शक्य तितक्या समान प्रतिक्रिया परिस्थितींसाठी लक्ष्य करताना वैयक्तिक घटकांचे अचूक आणि अचूक डोसिंग अपरिहार्य आहे. चांगल्या पाईपेटिंग तंत्राव्यतिरिक्त, योग्य साधन निवडणे देखील महत्त्वाचे आहे. पीसीआर मास्टर-मिक्समध्ये वारंवार असे पदार्थ असतात जे चिकटपणा वाढवतात किंवा फोम निर्माण करतात. पाईपेटिंग प्रक्रियेदरम्यान, यामुळे मोठ्या प्रमाणात ओले होतात.पिपेट टिप्स, त्यामुळे पाईपेटिंगची अचूकता कमी होते. डायरेक्ट डिस्पेंसिंग सिस्टम किंवा पर्यायी पाईपेटिंग टिप्सचा वापर ज्यामुळे ओले होण्याची शक्यता कमी असते, त्यामुळे पाईपेटिंग प्रक्रियेची अचूकता आणि अचूकता सुधारू शकते.
दूषितता
वितरण प्रक्रियेदरम्यान, एरोसोल तयार होतात जे जर पिपेटच्या आतील भागात पोहोचू दिले तर, पुढील पिपेटिंग चरणादरम्यान दुसऱ्या नमुनाला दूषित करू शकतात. फिल्टर टिप्स किंवा डायरेक्ट डिस्प्लेसमेंट सिस्टम वापरून हे टाळता येते.
उपभोग्य वस्तू जसे कीटिप्स, पीसीआर वर्कफ्लोमध्ये वापरल्या जाणाऱ्या वेसल्स आणि प्लेट्समध्ये असे पदार्थ असू नयेत जे नमुन्याला धोका निर्माण करतात किंवा निकाल खोटा ठरवतात. यामध्ये डीएनए, डीनेसेस, आरनेसेस आणि पीसीआर इनहिबिटर तसेच प्रतिक्रियेदरम्यान पदार्थातून बाहेर पडू शकणारे घटक - लीचेबल्स म्हणून ओळखले जाणारे पदार्थ यांचा समावेश आहे.
वापरकर्ता त्रुटी
जितके जास्त नमुने प्रक्रिया केले जातील तितका त्रुटींचा धोका जास्त. असे सहजपणे घडू शकते की नमुना चुकीच्या पात्रात किंवा चुकीच्या विहिरीत टाकला जातो. विहिरींचे सहज लक्षात येण्याजोगे चिन्हांकन करून हा धोका लक्षणीयरीत्या कमी केला जाऊ शकतो. वितरण चरणांच्या ऑटोमेशनद्वारे, "मानवी घटक", म्हणजेच त्रुटी आणि वापरकर्त्याशी संबंधित फरक कमी केले जातात, त्यामुळे पुनरुत्पादनक्षमता वाढते, विशेषतः लहान प्रतिक्रिया खंडांच्या बाबतीत. यासाठी वर्कस्टेशनमध्ये पुरेशा मितीय स्थिरतेच्या प्लेट्स वापरणे आवश्यक आहे. जोडलेले बारकोड अतिरिक्त मशीन-वाचनीयता प्रदान करतात, जे संपूर्ण प्रक्रियेत नमुना ट्रॅकिंग सुलभ करते.
थर्मोसायक्लरचे प्रोग्रामिंग
एखाद्या उपकरणाचे प्रोग्रामिंग करणे वेळखाऊ आणि त्रुटी-प्रवण देखील असू शकते. वेगवेगळ्या पीसीआर थर्मल सायकलर वैशिष्ट्ये या प्रक्रियेचा टप्पा सुलभ करण्यासाठी आणि सर्वात महत्त्वाचे म्हणजे ते सुरक्षित करण्यासाठी एकत्रितपणे काम करतात:
सोपे ऑपरेशन आणि चांगले वापरकर्ता मार्गदर्शन हे कार्यक्षम प्रोग्रामिंगचा पाया आहे. या पायावर उभारलेले, पासवर्ड-संरक्षित वापरकर्ता प्रशासन इतर वापरकर्त्यांद्वारे स्वतःचे प्रोग्राम बदलण्यापासून रोखेल. जर अनेक सायकलर (समान प्रकारचे) वापरात असतील, तर USB किंवा कनेक्टिव्हिटीद्वारे प्रोग्राम एका इन्स्ट्रुमेंटमधून दुसऱ्या इन्स्ट्रुमेंटमध्ये थेट हस्तांतरित करता आला तर ते फायदेशीर ठरते. संगणक सॉफ्टवेअर संगणकावर प्रोग्राम्स, वापरकर्ता हक्क आणि कागदपत्रांचे केंद्रीय आणि सुरक्षित प्रशासन सक्षम करते.
पीसीआर रन
धावण्याच्या दरम्यान, डीएनए अभिक्रिया वाहिनीमध्ये प्रबलित केला जातो, जिथे प्रत्येक नमुना समान, सुसंगत प्रतिक्रिया परिस्थितीच्या अधीन असावा. प्रक्रियेसाठी खालील पैलू संबंधित आहेत:
तापमान नियंत्रण
तापमान नियंत्रणातील उत्कृष्ट अचूकता आणि सायकलर ब्लॉकची एकरूपता हे सर्व नमुन्यांच्या समान तापमान कंडिशनिंगसाठी आधार आहेत. हीटिंग आणि कूलिंग एलिमेंट्सची उच्च गुणवत्ता (पेल्टियर एलिमेंट्स), तसेच हे ब्लॉकशी कसे जोडले जातात हे निर्णायक घटक आहेत जे "एज इफेक्ट" म्हणून ओळखल्या जाणाऱ्या तापमानातील विसंगतींचा धोका निश्चित करतील.
बाष्पीभवन
बाष्पीभवनामुळे अभिक्रियेच्या काळात वैयक्तिक अभिक्रिया घटकांची सांद्रता बदलू नये. अन्यथा, हे शक्य आहे की खूप कमीपीसीआर उत्पादननिर्माण होऊ शकते, किंवा अजिबात नाही. म्हणून सुरक्षित सील सुनिश्चित करून बाष्पीभवन कमी करणे अत्यंत महत्वाचे आहे. या प्रकरणात, थर्मोसायक्लरचे गरम झाकण आणि जहाजाचे सील हातात हात घालून काम करतात. यासाठी वेगवेगळे सीलिंग पर्याय उपलब्ध आहेत.पीसीआर प्लेट्स (लिंक: सीलिंग लेख), ज्याद्वारे उष्णता सीलिंगद्वारे सर्वोत्तम सील प्राप्त केले जाते. इतर क्लोजर देखील योग्य असू शकतात, जोपर्यंत सायकलर लिडचा संपर्क दाब निवडलेल्या सीलमध्ये समायोजित केला जाऊ शकतो.
दीर्घकालीन अचूक आणि पुनरुत्पादनक्षम परिणामांचे रक्षण करण्यासाठी प्रक्रिया मानकीकरण केले जात आहे. यामध्ये उपकरणांची नियमित देखभाल समाविष्ट आहे जेणेकरून ते नेहमीच चांगल्या स्थितीत राहतील. उत्पादित केलेल्या सर्व लॉटमध्ये सर्व उपभोग्य वस्तू सातत्याने उच्च दर्जाच्या असाव्यात आणि त्यांची विश्वसनीय उपलब्धता सुनिश्चित केली पाहिजे.
पोस्ट वेळ: नोव्हेंबर-२९-२०२२