Procesų standartizavimas apima jų optimizavimą ir vėlesnį nustatymą bei suderinimą, leidžiantį ilgalaikį optimalų našumą – nepriklausomai nuo naudotojo. Standartizavimas užtikrina aukštos kokybės rezultatus, jų atkuriamumą ir palyginamumą.
(Klasikinės) PGR tikslas – gauti patikimą ir atkartojamą rezultatą. Tam tikrais atvejais išeigaPGR produktastaip pat svarbu. Šių reakcijų metu reikia užtikrinti, kad mėginiai nebūtų pažeisti ir kad PGR darbo eiga išliktų stabili. Tai reiškia, kad reikia kuo labiau sumažinti užterštumą, kuris gali lemti klaidingai teigiamus arba klaidingai neigiamus rezultatus arba net slopinti PGR reakciją. Be to, reakcijos sąlygos turėtų būti kuo vienodesnės kiekvienam atskiram mėginiui to paties tyrimo metu ir jas turėtų būti galima perkelti į vėlesnes reakcijas (tuo pačiu metodu). Tai reiškia reakcijų sudėtį, taip pat temperatūros kontrolės tipą cikleryje. Žinoma, reikia kiek įmanoma vengti naudotojo klaidų.
Toliau parodysime iššūkius, su kuriais susiduriama ruošiantis PGR tyrimui ir jo metu, bei sprendimus, susijusius su instrumentais ir reikmenimis, naudojamais PGR darbo eigų standartizavimui.
Reakcijos paruošimas
Reakcijos komponentų paskirstymas atitinkamai į PGR indus arba plokšteles yra susijęs su keliais iššūkiais, kuriuos reikia įveikti:
Reakcijos sąlygos
Tikslus ir preciziškas atskirų komponentų dozavimas yra būtinas siekiant kuo identiškesnių reakcijos sąlygų. Be geros pipetės technikos, labai svarbu pasirinkti tinkamą įrankį. PGR pagrindiniuose mišiniuose dažnai yra medžiagų, kurios padidina klampumą arba sukelia putojimą. Pipetės metu dėl jų tirpalas gerokai sudrėksta.pipetės antgaliai, todėl sumažėja pipetės tikslumas. Naudojant tiesioginio dozavimo sistemas arba alternatyvius pipetės antgalius, kurie yra mažiau linkę drėkti, galima pagerinti pipetės proceso tikslumą ir preciziškumą.
Užterštumas
Dozavimo proceso metu susidaro aerozoliai, kurie, patekę į pipetės vidų, gali užteršti kitą mėginį kito pipetės lašinimo etapo metu. To galima išvengti naudojant filtro antgalius arba tiesioginio išstūmimo sistemas.
Eksploatacinės medžiagos, tokios kaippatarimaiPGR darbo eigoje naudojamuose induose ir plokštelėse neturi būti medžiagų, kurios kenkia mėginiui arba klastoja rezultatą. Tai DNR, DNazės, RNazės ir PGR inhibitoriai, taip pat komponentai, kurie reakcijos metu gali išsiskirti iš medžiagos – medžiagos, vadinamos išsiplaunančiomis medžiagomis.
Vartotojo klaida
Kuo daugiau mėginių apdorojama, tuo didesnė klaidų rizika. Gali lengvai atsitikti taip, kad mėginys pipete įpilamas į netinkamą indą arba ne tą šulinėlį. Šią riziką galima gerokai sumažinti lengvai pastebimu šulinėlių žymėjimu. Automatizuojant dozavimo veiksmus, sumažinamas „žmogiškasis faktorius“, t. y. klaidos ir su naudotoju susiję variantai, taip padidinant pakartojamumą, ypač esant mažiems reakcijos tūriams. Tam darbo stotyje reikalingos pakankamai matmenų stabilumo plokštelės. Pritvirtinti brūkšniniai kodai suteikia papildomą mašininį nuskaitymą, o tai supaprastina mėginių sekimą viso proceso metu.
Termociklerio programavimas
Prietaiso programavimas gali užimti daug laiko ir būti klaidų tikimybės. Skirtingos PGR terminio ciklo funkcijos veikia kartu, kad supaprastintų šį proceso etapą ir, svarbiausia, užtikrintų jo saugumą:
Paprastas valdymas ir geras naudotojo vadovas yra efektyvaus programavimo pagrindas. Remiantis šiuo pagrindu, slaptažodžiu apsaugotas naudotojų administravimas neleis kitiems naudotojams keisti savo programų. Jei naudojami keli to paties tipo ciklonai, naudinga, jei programą galima tiesiogiai perkelti iš vieno prietaiso į kitą per USB arba jungiamąjį ryšį. Kompiuterių programinė įranga leidžia centralizuotai ir saugiai administruoti programas, naudotojų teises ir dokumentus kompiuteryje.
PGR tyrimas
Proceso metu DNR amplifikuojama reakcijos inde, kuriame kiekvienas mėginys turi būti veikiamas identiškomis, nuosekliomis reakcijos sąlygomis. Procesui svarbūs šie aspektai:
Temperatūros kontrolė
Puikus temperatūros reguliavimo tikslumas ir ciklerio bloko homogeniškumas yra tolygaus visų mėginių temperatūros kondicionavimo pagrindas. Aukšta šildymo ir aušinimo elementų (Peltjė elementų) kokybė, taip pat jų prijungimo prie bloko būdas yra lemiami veiksniai, lemiantys temperatūros neatitikimų, vadinamų „krašto efektu“, riziką.
Garavimas
Atskirų reakcijos komponentų koncentracijos reakcijos metu neturėtų kisti dėl garavimo. Priešingu atveju gali būti, kad labai mažaiPGR produktasgali susidaryti arba visai nesusidarys. Todėl labai svarbu kuo labiau sumažinti garavimą užtikrinant saugų sandarumą. Šiuo atveju termociklerio šildomas dangtis ir indo sandariklis veikia kartu. Yra įvairių sandarinimo variantųPGR plokštelės (nuoroda: Straipsnis apie sandarinimą), kai geriausias sandarumas pasiekiamas sandarinant karščiu. Gali tikti ir kiti uždarymo būdai, jei tik ciklo dangtelio kontaktinį slėgį galima reguliuoti pagal pasirinktą sandarinimo būdą.
Siekiant ilgalaikėje perspektyvoje užtikrinti tikslius ir atkartojamus rezultatus, įdiegtas procesų standartizavimas. Tai apima reguliarią įrangos priežiūrą, siekiant užtikrinti, kad ji visada būtų geros darbinės būklės. Visos eksploatacinės medžiagos visose pagamintose partijose turi būti nuolat aukštos kokybės, o jų patikimas tiekimas turi būti garantuotas.
Įrašo laikas: 2022 m. lapkričio 29 d.