De standerdisaasje fan prosessen omfettet har optimalisaasje en dêrnei fêstigjen en harmonisearjen, wêrtroch optimale prestaasjes op lange termyn mooglik binne - ûnôfhinklik fan 'e brûker. Standerdisaasje soarget foar resultaten fan hege kwaliteit, lykas har reprodusearberens en fergelykberens.
It doel fan (klassike) PCR is it generearjen fan in betrouber en reprodusearber resultaat. Foar bepaalde tapassingen is de opbringst fan 'ePCR-produktis ek relevant. Foar dizze reaksjes moat derfoar soarge wurde dat samples net kompromittearre wurde en dat de PCR-workflow stabyl bliuwt. Spesifyk betsjut dit it minimalisearjen fan 'e ynfiering fan fersmoarging dy't kin liede ta falsk-positive of falsk-negative resultaten of sels de PCR-reaksje remme. Fierder moatte de reaksjebetingsten sa identyk mooglik wêze foar elk yndividueel sample binnen in run en ek oerdraachber wêze nei folgjende reaksjes (fan deselde metoade). Dit ferwiist nei de gearstalling fan 'e reaksjes, lykas nei it type temperatuerkontrôle yn 'e cycler. Brûkersflaters moatte fansels safolle mooglik foarkommen wurde.
Hjirûnder sille wy de útdagings demonstrearje dy't tsjinkomme tidens de tarieding en yn 'e rin fan in PCR - en de oanpakken foar oplossingen dy't besteane mei respekt foar ynstruminten en konsumpsjeartikelen dy't brûkt wurde foar de standerdisaasje fan 'e PCR-workflows.
Reaksje tarieding
It dispensearjen fan reaksjekomponinten yn PCR-fetten, of platen, bringt meardere útdagings mei dy't oerwûn wurde moatte:
Reaksjebetingsten
De krekte en presys dosearring fan 'e yndividuele komponinten is ûnmisber as men stribbet nei de meast identike reaksjebetingsten mooglik. Neist in goede pipetteartechnyk is it kiezen fan it juste ark kritysk. PCR-mastermixen befetsje faak stoffen dy't de viskositeit ferheegje of skom generearje. Tidens it pipettearproses liede dizze ta substansjele bevochtiging fan 'epipettepunten, wêrtroch't de pipettearkrektens ferminderet. It brûken fan direkte dispenseringssystemen of alternative pipettepunten dy't minder gefoelich binne foar wietmeitsjen kin de krektens en presyzje fan it pipettearproses ferbetterje.
Fersmoargingen
Tidens it dispensearjen wurde aerosolen generearre dy't, as se de binnenkant fan 'e pipette berikke, mooglik in oar stekproef fersmoargje kinne tidens de folgjende pipettearstap. Dit kin foarkommen wurde troch filtertips of direkte ferpleatsingssystemen te brûken.
Ferbrûksartikelen lykastips, vaten en platen dy't brûkt wurde yn 'e PCR-workflow meie gjin stoffen befetsje dy't it stekproef kompromittearje of it resultaat ferfalskje. Dizze omfetsje DNA, DNases, RNases en PCR-ynhibitoren, lykas komponinten dy't potinsjeel út it materiaal kinne lekke tidens de reaksje - stoffen dy't bekend binne as lekbere stoffen.
Brûkersflater
Hoe mear samples ferwurke wurde, hoe heger it risiko op flaters. It kin maklik barre dat in sample yn it ferkearde fet of de ferkearde put pipetteare wurdt. Dit risiko kin flink fermindere wurde troch maklik ûnderskiedbere markearring fan 'e putten. Troch de automatisearring fan dispensestappen wurdt de "minsklike faktor", d.w.s. flaters en brûkersrelatearre fariaasjes, minimalisearre, wêrtroch't de reprodusearberens tanimt, foaral yn it gefal fan lytse reaksjevolumes. Dit fereasket platen mei foldwaande dimensjonele stabiliteit om te brûken yn in wurkstasjon. Oanhingjende barcodes soargje foar ekstra masine-lêsberens, wat it folgjen fan samples yn it heule proses ferienfâldiget.
Programmearring fan 'e thermocycler
It programmearjen fan in ynstrumint kin tiidslinend en gefoelich foar flaters blike te wêzen. Ferskillende PCR-termyske cyclerfunksjes wurkje gear om dizze prosesstap te ferienfâldigjen en, it wichtichste, om it feilich te meitsjen:
Maklike operaasje en goede brûkersbegelieding binne de basis fan effisjint programmearjen. Bouwend op dizze basis sil wachtwurdbeskerme brûkersbehear foarkomme dat eigen programma's troch oare brûkers feroare wurde. As meardere cyclers (fan itselde type) yn gebrûk binne, is it foardielich as in programma direkt fan it iene ynstrumint nei it oare oerdroegen wurde kin fia USB of ferbining. Kompjûtersoftware makket sintraal en feilich behear fan programma's, brûkersrjochten en dokuminten op in kompjûter mooglik.
PCR-run
Tidens de run wurdt DNA amplifisearre yn it reaksjefet, dêr't elk stekproef ûnderwurpen wurde moat oan identike, konsekwinte reaksjebetingsten. De folgjende aspekten binne relevant foar it proses:
Temperatuerkontrôle
Uitstekende krektens yn temperatuerkontrôle en homogeniteit fan it cyclerblok binne de basis foar in evenredige temperatuerkonditionering fan alle samples. De hege kwaliteit fan 'e ferwaarmings- en koeleleminten (peltier-eleminten), lykas de manier wêrop dizze oan it blok ferbûn binne, binne de beslissende faktoaren dy't it risiko op temperatuerferskillen bepale, bekend as it "râne-effekt".
Ferdamping
De konsintraasjes fan 'e yndividuele reaksjekomponinten moatte net feroarje yn 'e rin fan' e reaksje fanwegen ferdamping. Oars is it mooglik dat der mar in bytsjePCR-produktkin generearre wurde, of hielendal gjin. It is dêrom krúsjaal om ferdamping te minimalisearjen troch in feilige ôfsluting te garandearjen. Yn dit gefal wurkje it ferwaarme deksel fan 'e thermocycler en de ôfsluting fan it fet hân yn hân. Ferskillende ôfslutingsopsjes binne beskikber foarPCR-platen (link: Artikel oer ôfsluting), wêrby't de bêste ôfsluting berikt wurdt troch hjittesealing. Oare slutingen kinne ek geskikt wêze, salang't de kontaktdruk fan it cyclerdeksel oanpast wurde kin oan de selektearre ôfsluting.
Prosesstandardisaasje is fan krêft om krekte en reprodusearbere resultaten op lange termyn te garandearjen. Dit omfettet regelmjittich ûnderhâld fan 'e apparatuer om te soargjen dat it altyd yn goede wurkjende steat is. Alle konsumpsjeartikelen moatte fan konsekwint hege kwaliteit wêze yn alle produsearre partijen, en har betroubere beskikberens moat garandearre wurde.
Pleatsingstiid: 29 novimber 2022