Стандартызацыя працэсаў уключае іх аптымізацыю і наступнае ўстанаўленне і гарманізацыю, што дазваляе дасягнуць аптымальнай прадукцыйнасці ў доўгатэрміновай перспектыве — незалежна ад карыстальніка. Стандартызацыя забяспечвае высокую якасць вынікаў, а таксама іх узнаўляльнасць і параўнальнасць.
Мэта (класічнай) ПЦР — атрыманне надзейнага і адэкватнага выніку. Для некаторых ужыванняў выхадПЦР-прадукттаксама актуальна. Для гэтых рэакцый неабходна сачыць за тым, каб узоры не былі пашкоджаны, а працоўны працэс ПЛР заставаўся стабільным. У прыватнасці, гэта азначае мінімізацыю ўнясення забруджванняў, якія могуць прывесці да ілжыва станоўчых або ілжыва адмоўных вынікаў або нават перашкодзіць рэакцыі ПЛР. Акрамя таго, умовы рэакцыі павінны быць максімальна аднолькавымі для кожнага асобнага ўзору ў межах цыклу, а таксама пераносіцца на наступныя рэакцыі (таго ж метаду). Гэта адносіцца як да складу рэакцый, так і да тыпу кантролю тэмпературы ў цыклеры. Памылак карыстальніка, вядома, неабходна пазбягаць па меры магчымасці.
Ніжэй мы прадэманструем праблемы, з якімі сутыкаюцца падчас падрыхтоўкі і на працягу ўсяго правядзення ПЛР, а таксама падыходы да рашэнняў, якія існуюць у дачыненні да інструментаў і расходных матэрыялаў, якія выкарыстоўваюцца для стандартызацыі працоўных працэсаў ПЛР.
Падрыхтоўка рэакцыі
Дазаванне кампанентаў рэакцыі ў ПЛР-пасудзіны або пласціны, адпаведна, мае шмат праблем, якія неабходна пераадолець:
Умовы рэакцыі
Дакладнае і дакладнае дазаванне асобных кампанентаў неабходна для дасягнення максімальна ідэнтычных умоў рэакцыі. Акрамя добрай тэхнікі піпетавання, вельмі важны выбар правільнага інструмента. Мастэр-сумесі для ПЦР часта ўтрымліваюць рэчывы, якія павялічваюць глейкасць або ўтвараюць пену. Падчас працэсу піпетавання гэта прыводзіць да значнага ўвільгатнення.наканечнікі піпетак, што зніжае дакладнасць піпетавання. Выкарыстанне сістэм прамога дазавання або альтэрнатыўных наканечнікаў піпетак, якія менш схільныя да змочвання, можа палепшыць дакладнасць і прэцызійнасць працэсу піпетавання.
Забруджванні
Падчас працэсу дазавання ўтвараюцца аэразолі, якія, калі ім дазволіць патрапіць унутр піпеткі, могуць патэнцыйна забрудзіць іншы ўзор падчас наступнага этапу піпетавання. Гэтага можна пазбегнуць, выкарыстоўваючы фільтруючыя наканечнікі або сістэмы прамога выцяснення.
Расходныя матэрыялы, такія якпарадыПасудзіны і пласціны, якія выкарыстоўваюцца ў працэсе ПЦР, не павінны ўтрымліваць рэчывы, якія могуць паставіць пад пагрозу якасць узору або скажаць вынік. Да іх адносяцца ДНК, ДНКазы, РНКазы і інгібітары ПЦР, а таксама кампаненты, якія патэнцыйна могуць вымывацца з матэрыялу падчас рэакцыі — рэчывы, вядомыя як вымывальныя рэчывы.
Памылка карыстальніка
Чым больш узораў апрацоўваецца, тым вышэй рызыка памылкі. Лёгка можа здарыцца, што ўзор будзе піпетаваны ў няправільную ёмістасць або ў няправільную лунку. Гэтую рызыку можна значна знізіць з дапамогай лёгка заўважнай маркіроўкі лунак. Дзякуючы аўтаматызацыі этапаў дазавання мінімізуецца «чалавечы фактар», г.зн. памылкі і звязаныя з карыстальнікам адрозненні, што павялічвае ўзнаўляльнасць, асабліва ў выпадку малых аб'ёмаў рэакцыі. Для гэтага на рабочай станцыі патрабуюцца пласціны з дастатковай стабільнасцю памераў. Прымацаваныя штрых-коды забяспечваюць дадатковую машынную чытальнасць, што спрашчае адсочванне ўзораў на працягу ўсяго працэсу.
Праграмаванне тэрмацыклера
Праграмаванне прыбора можа аказацца працаёмкім і схільным да памылак. Розныя функцыі тэрмацыклера ПЦР працуюць разам, каб спрасціць гэты этап працэсу і, самае галоўнае, зрабіць яго бяспечным:
Прастата ў эксплуатацыі і добрае кіраўніцтва карыстальнікам з'яўляюцца асновай эфектыўнага праграмавання. Зыходзячы з гэтага, адміністраванне карыстальнікаў з абаронай паролем не дазволіць іншым карыстальнікам змяняць уласныя праграмы. Калі выкарыстоўваецца некалькі цыклераў (аднаго тыпу), карысна, каб праграму можна было перадаваць непасрэдна з аднаго прыбора на іншы праз USB або падключэнне. Камп'ютэрнае праграмнае забеспячэнне дазваляе цэнтралізавана і бяспечна кіраваць праграмамі, правамі карыстальнікаў і дакументамі на камп'ютары.
ПЦР-працэс
Падчас аналізу ДНК ампліфікуецца ў рэакцыйным пасудзіне, дзе кожны ўзор павінен падвяргацца аднолькавым, паслядоўным умовам рэакцыі. Для працэсу важныя наступныя аспекты:
Кантроль тэмпературы
Выдатная дакладнасць кантролю тэмпературы і аднастайнасць блока цыклера з'яўляюцца асновай для раўнамернага тэмпературнага кандыцыянавання ўсіх узораў. Высокая якасць награвальных і ахаладжальных элементаў (элементаў Пельцье), а таксама спосаб іх падключэння да блока з'яўляюцца вырашальнымі фактарамі, якія вызначаць рызыку разыходжанняў тэмператур, вядомых як «краёвы эфект».
Выпарэнне
Канцэнтрацыі асобных кампанентаў рэакцыі не павінны змяняцца на працягу рэакцыі з-за выпарэння. У адваротным выпадку магчыма, што вельмі малаПЦР-прадуктможа ўтварацца, альбо зусім не ўтварацца. Таму вельмі важна мінімізаваць выпарэнне, забяспечыўшы надзейную герметызацыю. У гэтым выпадку падагрэў вечка тэрмацыклера і герметызацыя ёмістасці працуюць разам. Даступныя розныя варыянты герметызацыі дляПЦР-пласціны (спасылка: артыкул пра герметызацыю), прычым найлепшае ўшчыльненне дасягаецца шляхам тэрмічнай зваркі. Іншыя закаркоўвальнікі таксама могуць падысці, пры ўмове, што ціск кантакту вечка цыклера можна адрэгуляваць у адпаведнасці з абраным ушчыльненнем.
Стандартызацыя працэсаў укаранёна для забеспячэння дакладных і прайгравальных вынікаў у доўгатэрміновай перспектыве. Гэта ўключае рэгулярнае тэхнічнае абслугоўванне абсталявання, каб гарантаваць яго заўсёды спраўны працоўны стан. Усе расходныя матэрыялы павінны быць пастаянна высокай якасці ва ўсіх вырабленых партыях, і іх надзейная даступнасць павінна быць гарантавана.
Час публікацыі: 29 лістапада 2022 г.