די סטאַנדאַרדיזאַציע פון פּראָצעסן נעמט אַרײַן זייער אָפּטימיזאַציע און דערנאָך אויפֿשטעלן און האַרמאָניזירן, וואָס ערמעגליכט לאַנג-טערמין אָפּטימאַלע פאָרשטעלונג – אומאָפּהענגיק פֿון באַניצער. סטאַנדאַרדיזאַציע גאַראַנטירט הויך-קוואַליטעט רעזולטאַטן, ווי אויך זייער רעפּראָדוצירבאַרקייט און פֿאַרגלייַכבאַרקייט.
די ציל פון (קלאסישע) PCR איז צו שאַפֿן אַ פאַרלעסלעכן און רעפּראָדוצירבארן רעזולטאַט. פֿאַר געוויסע אַפּליקאַציעס, די פּראָדוקציע פֿון דיפּי-סי-אַר פּראָדוקטאיז אויך באַטייַטיק. פֿאַר די רעאַקציעס, מוז מען זאָרגן אַז די מוסטערן ווערן נישט קאָמפּראָמיטירט און אַז דער PCR וואָרקפלאָו בלייבט סטאַביל. ספּעציפֿיש, דאָס מיינט מינימיזירן די הקדמה פון קאָנטאַמינאַציעס וואָס קענען פירן צו פאַלש positive אָדער פאַלש negative רעזולטאַטן אָדער אפילו פאַרהיטן די PCR רעאַקציע. ווייטער, די רעאַקציע באדינגונגען זאָלן זיין אַזוי אידענטיש ווי מעגלעך פֿאַר יעדן יחיד מוסטער אין אַ לויף און אויך זיין טראַנספעראַבאַל צו ווייטערדיקע רעאַקציעס (פון דער זעלביקער מעטאָדע). דאָס באַציט זיך צו דער זאַץ פון די רעאַקציעס ווי אויך צו דער טיפּ פון טעמפּעראַטור קאָנטראָל אין דעם ציקלער. באַניצער ערראָרס, פון קורס, זאָלן זיין אַוווידאַד ווי פיל ווי מעגלעך.
אונטן וועלן מיר ווייזן די שוועריקייטן וואָס מען באַגעגנט בעת דער צוגרייטונג און איבערן גאַנצן PCR דורכפיר – און די צוגאַנגען צו לייזונגען וואָס עקזיסטירן אין באַצוג צו אינסטרומענטן און קאָנסומאַבלען געניצט פֿאַר דער סטאַנדאַרדיזאַציע פון די PCR וואָרקפלאָוז.
רעאַקציע צוגרייטונג
די אויסטיילונג פון רעאקציע קאמפאנענטן אין PCR-געפעס, אדער פלאטעס, בהתאמה, פארמאגט פארשידענע שוועריקייטן וואס מוזן איבערקומען ווערן:
רעאַקציע באדינגונגען
די גענויע און פּינקטלעכע דאָזירונג פון די יחיד קאָמפּאָנענטן איז נייטיק ווען מען צילט צו דערגרייכן די מערסט אידענטישע רעאַקציע באדינגונגען מעגלעך. אין דערצו צו אַ גוטער פּיפּעטינג טעכניק, איז די אויסוואל פון דעם ריכטיקן געצייַג קריטיש. PCR מאַסטער-מיקסעס אַנטהאַלטן אָפט סאַבסטאַנצן וואָס פאַרגרעסערן וויסקאָסיטי אָדער דזשענערירן שאַום. בעת דעם פּיפּעטינג פּראָצעס, פירן די צו אַ באַטייטיק נאַס מאַכן פון דיפּיפּעט עצות, אזוי פארמינדערנדיג די פּיפּעטירונג גענויקייט. די נוצן פון דירעקטע דיספּענסינג סיסטעמען אדער אַלטערנאַטיווע פּיפּעט שפּיץ וואָס זענען ווייניקער פּראָנע צו נאַס ווערן קען פֿאַרבעסערן די גענויקייט און פּרעציזיע פון דעם פּיפּעטירונג פּראָצעס.
קאָנטאַמינאַציעס
בעת דעם אויסטיילן פּראָצעס ווערן געשאַפֿן אַעראָזאָלן, וואָס, אויב מען לאָזט זיי דערגרייכן דעם אינעווייניק פֿון דער פּיפּעטע, קענען זיי פּאָטענציעל קאָנטאַמינירן אַן אַנדער מוסטער בעת דעם קומענדיקן פּיפּעטירן שריט. דאָס קען מען פֿאַרהיטן דורך ניצן פֿילטער שפּיץ אָדער דירעקטע פֿאַרשייבונג סיסטעמען.
קאָנסומאַבלעס ווי למשלעצות, כלים און פּלאַטעס וואָס ווערן גענוצט אין דעם PCR וואָרקפלאָו טאָרן נישט אַנטהאַלטן סאַבסטאַנצן וואָס קאָמפּראָמיטירן דעם מוסטער אָדער פאַלשן דעם רעזולטאַט. דאָס נעמט אַרײַן DNA, DNases, RNases און PCR אינהיביטאָרן, ווי אויך קאָמפּאָנענטן וואָס קענען פּאָטענציעל אַרויסלויכן פֿון דעם מאַטעריאַל בעת דער רעאַקציע – סאַבסטאַנצן באַקאַנט ווי אויסלויכבאַרע מאַטעריאַלן.
באַניצער טעות
וואָס מער מוסטערן ווערן פּראָצעסירט, אַלץ העכער דער ריזיקאָ פֿון טעותים. עס קען גרינג פּאַסירן אַז אַ מוסטער ווערט פּיפּעטירט אין דעם אומרעכטן געפֿעס אָדער אין דעם אומרעכטן ברונעם. דער ריזיקאָ קען באַדייטנד פֿאַרקלענערט ווערן דורך גרינג באַמערקבאַרע מאַרקירונג פֿון די ברונעם. דורך דער אויטאָמאַטיזאַציע פֿון די דיספּענסינג טריט, ווערט דער "מענטשלעכער פֿאַקטאָר", ד"ה, טעותים און באַניצער-פֿאַרבונדענע וועריאַציעס, מינימיזירט, און אַזוי פֿאַרגרעסערט די רעפּראָדוצירבאַרקייט, ספּעציעל אין פֿאַל פֿון קליינע רעאַקציע וואַליומז. דאָס פֿאָדערט פּלאַטעס מיט גענוג דימענסיאָנעלער סטאַביליטעט צו ווערן גענוצט אין אַ וואָרקסטיישאַן. אַטאַטשט באַרקאָודז צושטעלן נאָך מאַשין-לייענבאַרקייט, וואָס פֿאַרפּשוטערט מוסטער טראַקינג איבערן גאַנצן פּראָצעס.
פּראָגראַמירן דעם טערמאָציקלער
פּראָגראַמירן אַן אינסטרומענט קען זיך אַרויסווײַזן צו זײַן צײַט-פֿאַרברענגלעך און אויך פּראָנע צו פֿעלער. פֿאַרשידענע PCR טערמאַל ציקלער פֿעיִטשערז אַרבעטן צוזאַמען צו פֿאַרפּשוטערן דעם פּראָצעס שריט און, וויכטיקער, צו מאַכן עס זיכער:
גרינגע אפעראציע און גוטע באַניצער אנווייזונגען זענען די באַזע פון עפעקטיוו פּראָגראַמירן. בויענדיק אויף דעם יסוד, וועט פּאַראָל-געשיצטע באַניצער אַדמיניסטראַציע פאַרהיטן אייגענע פּראָגראַמען פון ווערן געביטן דורך אַנדערע באַניצער. אויב קייפל ציקלערס (פון דעם זעלבן טיפּ) זענען אין נוצן, איז עס נוצלעך אויב אַ פּראָגראַם קען ווערן גלייך טראַנספערד פון איין אינסטרומענט צו אַן אַנדערן דורך USB אָדער קאַנעקטיוויטי. קאָמפּיוטער ווייכווארג ערמעגליכט צענטראַלע און זיכערע אַדמיניסטראַציע פון פּראָגראַמען, באַניצער רעכטן און דאָקומענטן אויף אַ קאָמפּיוטער.
פּי-סי-אַר לויף
בעת דעם פּראָצעס ווערט די דנאַ אַמפּליפֿיצירט אין רעאַקציע־געפֿעס, וואו יעדע מוסטער זאָל אונטערגעוואָרפֿן ווערן צו אידענטישע, קאָנסיסטענטע רעאַקציע־באַדינגונגען. די פֿאָלגנדיקע אַספּעקטן זענען באַטייַטיק פֿאַר דעם פּראָצעס:
טעמפּעראַטור קאָנטראָל
אויסגעצייכנטע גענויקייט אין טעמפּעראַטור קאָנטראָל און האָמאָגעניטעט פון די ציקלער בלאָק זענען די באַזע פֿאַר גלייכע טעמפּעראַטור קאַנדישאַנינג פון אַלע סאַמפּאַלז. די הויך קוואַליטעט פון די הייצונג און קיל עלעמענטן (פּעלטיער עלעמענטן), ווי אויך די וועג אין וואָס זיי זענען פארבונדן צו די בלאָק, זענען די באַשטימענדיק סיבות וואָס וועלן באַשטימען די ריזיקירן פון טעמפּעראַטור דיסקרעפּאַנסיז באַקאַנט ווי די "עדזש ווירקונג".
פארדאַמפּונג
די קאנצענטראציעס פון די יחידישע רעאקציע קאמפאנענטן זאלן זיך נישט ענדערן איבערן פארלויף פון דער רעאקציע צוליב פארדאמפונג. אנדערש איז מעגליך אז זייער ווייניגפּי-סי-אַר פּראָדוקטקען ווערן גענערירט, אדער בכלל נישט. עס איז דעריבער קריטיש צו מינימיזירן פארדאַמפּונג דורך זיכער מאַכן אַ זיכערן פאַרזיגלונג. אין דעם פאַל, אַרבעטן דער באַהייצטער דעקל פון דעם טערמאָציקלער און דער פאַרזיגלונג פון דעם געפֿעס האַנט אין האַנט. פֿאַרשידענע פאַרזיגלונג אָפּציעס זענען פֿאַראַן פֿאַרPCR פּלאַטעס (לינק: אַרטיקל וועגן פֿאַרזיגלען), וואו די בעסטע פארזיגלונג ווערט דערגרייכט דורך היץ-פארזיגלונג. אנדערע פארמאכונגען קענען אויך זיין פאסיג, אזוי לאנג ווי דער קאנטאקט דרוק פון דעם ציקלער דעקל קען ווערן צוגעפאסט צו דער אויסגעקליבענער פארזיגלונג.
פּראָצעס סטאַנדאַרדיזאַציע איז אין פּלאַץ צו באַשיצן פּינקטלעכע און רעפּראָדוצירבארע רעזולטאַטן אויף לאַנג טערמין. דאָס כולל רעגולער וישאַלט פון די ויסריכט צו ענשור אַז עס איז שטענדיק אין גוט אַרבעט צושטאַנד. אַלע קאָנסומאַבלעס זאָל זיין פון קאָנסיסטענטלי הויך קוואַליטעט אַריבער אַלע לאָטס פּראָדוצירט, און זייער פאַרלאָזלעך אַוויילאַביליטי מוז זיין געראַנטיד.
פּאָסט צייט: 29סטן נאוועמבער 2022