D'Standardiséierung vu Prozesser ëmfaasst hir Optimiséierung an déi spéider Etabléierung an Harmoniséierung, wat eng laangfristeg optimal Leeschtung erméiglecht – onofhängeg vum Benotzer. D'Standardiséierung garantéiert héichqualitativ Resultater, souwéi hir Reproduzéierbarkeet a Vergläichbarkeet.
D'Zil vun der (klassescher) PCR ass d'Generéierung vun engem zouverléissege a reproduzéierbare Resultat. Fir verschidden Uwendungen ass d'Ausbezuelung vun derPCR-Produktass och relevant. Fir dës Reaktiounen muss drop opgepasst ginn, datt d'Prouwe net kompromittéiert ginn an datt de PCR-Workflow stabil bleift. Dëst bedeit speziell, datt d'Aféierung vu Kontaminatiounen miniméiert gëtt, déi zu falsch positiven oder falsch negativen Resultater féiere kënnen oder d'PCR-Reaktioun souguer hemme kënnen. Ausserdeem sollten d'Reaktiounsbedingunge fir all eenzel Prouf an engem Laf sou identesch wéi méiglech sinn a sollten och op spéider Reaktiounen (mat der selwechter Method) iwwerdroe kënne ginn. Dëst bezitt sech op d'Zesummesetzung vun de Reaktiounen souwéi op d'Aart vun der Temperaturkontroll am Cycler. Benotzerfeeler solle selbstverständlech sou vill wéi méiglech vermeit ginn.
Hei ënnendrënner wäerte mir d'Erausfuerderungen demonstréieren, déi während der Virbereedung an am Laf vun enger PCR optrieden – an d'Approche zu Léisungen, déi et a Bezuch op d'Instrumenter a Verbrauchsmaterialien gëtt, déi fir d'Standardiséierung vun de PCR-Workflows benotzt ginn.
Reaktiounsvirbereedung
D'Doséierung vu Reaktiounskomponenten an PCR-Gefässer, respektiv Placken, bréngt verschidde Erausfuerderungen mat sech, déi musse geléist ginn:
Reaktiounsbedingungen
Déi genee an präzis Doséierung vun den eenzelne Komponenten ass onentbehrlech, wann et drëm geet, déi identeschst méiglech Reaktiounsbedingungen ze erzielen. Nieft enger gudder Pipettéierungstechnik ass d'Wiel vum richtegen Tool entscheedend. PCR-Mastermixe enthalen dacks Substanzen, déi d'Viskositéit erhéijen oder Schaum generéieren. Wärend dem Pipettéierungsprozess féieren dës zu enger wesentlecher Befeuchtung vun der ...Pipettspëtzen, wouduerch d'Genauegkeet vun der Pipettéierung reduzéiert gëtt. D'Benotzung vun direkten Dispenséiersystemer oder alternativen Pipettspëtzen, déi manner ufälleg fir Naassheet sinn, kann d'Genauegkeet a Präzisioun vum Pipettéierungsprozess verbesseren.
Kontaminatiounen
Wärend dem Dispenséierungsprozess ginn Aerosoler generéiert, déi, wa se an d'Innere vun der Pipett kommen, potenziell eng aner Prouf beim nächste Pipettéierungsschratt kontaminéiere kënnen. Dëst kann duerch d'Benotzung vu Filterspëtzen oder Direktverdrängungssystemer verhënnert ginn.
Verbrauchsgidder wéi z.B.Tipps, Gefässer a Placken, déi am PCR-Workflow benotzt ginn, däerfen keng Substanzen enthalen, déi d'Prouf kompromittéieren oder d'Resultat verfälschen. Dozou gehéieren DNA, DNasen, RNasen an PCR-Inhibitoren, souwéi Komponenten, déi während der Reaktioun potenziell aus dem Material erauslaachen kënnen - Substanzen, déi als auslaachend Substanzen bekannt sinn.
Benotzerfehler
Wat méi Prouwe veraarbecht ginn, wat méi héich ass de Feelerrisiko. Et kann einfach geschéien, datt eng Prouf an dat falscht Behälter oder an de falsche Brunn pipettéiert gëtt. Dëse Risiko kann duerch eng einfach erkennbar Markéierung vun de Brunne wesentlech reduzéiert ginn. Duerch d'Automatiséierung vun den Dispenseschritte gëtt de "mënschleche Faktor", also Feeler a benotzerbezunnen Variatiounen, miniméiert, wouduerch d'Reproduzéierbarkeet erhéicht gëtt, besonnesch bei klenge Reaktiounsvolumen. Dëst erfuerdert Placke mat ausreechender Dimensiounsstabilitéit, déi an enger Aarbechtsstatioun agesat kënne ginn. Ugehaangen Barcoden suergen fir zousätzlech maschinell Liesbarkeet, wat d'Proufverfolgung während dem ganze Prozess vereinfacht.
Programméierung vum Thermocycler
D'Programméierung vun engem Instrument kann sech als zäitopwänneg a fehlergeféierlech erweisen. Verschidde PCR-Thermozyklusfunktioune schaffen zesummen, fir dëse Prozessschritt ze vereinfachen an, am wichtegsten, fir en sécher ze maachen:
Einfach Operatioun a gutt Benotzerberodung sinn d'Basis vun enger effizienter Programméierung. Op dëser Basis verhënnert eng passwuertgeschützt Benotzerverwaltung, datt déi eege Programmer vun anere Benotzer geännert kënne ginn. Wann verschidde Cycleren (vum selwechten Typ) am Gebrauch sinn, ass et virdeelhaft, wann e Programm direkt iwwer USB oder eng Verbindung vun engem Instrument op en anert transferéiert ka ginn. Computersoftware erméiglecht eng zentral a sécher Verwaltung vu Programmer, Benotzerrechter an Dokumenter op engem Computer.
PCR-Laf
Wärend dem Laf gëtt d'DNA am Reaktiounsbehälter amplifizéiert, wou all Prouf identesch, konsequent Reaktiounsbedingunge soll ausgesat sinn. Déi folgend Aspekter si fir de Prozess relevant:
Temperaturkontroll
Eng exzellent Genauegkeet bei der Temperaturkontroll an Homogenitéit vum Cyclerblock sinn d'Basis fir eng gläichméisseg Temperaturkonditionéierung vun alle Proben. Déi héich Qualitéit vun den Heiz- a Killelementer (Peltier-Elementer), souwéi d'Aart a Weis wéi dës mam Block verbonne sinn, sinn déi entscheedend Faktoren, déi de Risiko vun Temperaturdifferenzen, bekannt als "Kanteeffekt", bestëmmen.
Verdampfung
D'Konzentratioune vun den eenzelne Reaktiounskomponenten sollten am Laf vun der Reaktioun net duerch Verdampfung änneren. Soss ass et méiglech, datt ganz wéineg ...PCR-Produktkann generéiert ginn, oder guer keng. Et ass dofir entscheedend d'Verdampfung ze minimiséieren andeems eng sécher Dichtung garantéiert gëtt. An dësem Fall funktionéieren den erhëtzten Deckel vum Thermocycler an d'Dichtung vum Behälter Hand an Hand. Verschidde Dichtungsoptioune si verfügbar firPCR-Placken (Link: Artikel iwwer Versiegelung), wouduerch déi bescht Dichtung duerch Hëtzeversiegelung erreecht gëtt. Aner Verschlëss kënnen och gëeegent sinn, soulaang de Kontaktdrock vum Deckel vum Cycler un déi gewielten Dichtung ugepasst ka ginn.
Eng Prozessstandardiséierung ass a Kraaft, fir laangfristeg präzis a reproduzéierbar Resultater ze garantéieren. Dëst beinhalt reegelméisseg Ënnerhalt vun der Ausrüstung, fir sécherzestellen, datt se ëmmer a guddem Zoustand ass. All Verbrauchsgidder solle bei alle produzéierte Chargen vun enger konsequent héijer Qualitéit sinn, an hir zouverlässeg Disponibilitéit muss garantéiert sinn.
Zäitpunkt vun der Verëffentlechung: 29. November 2022