Standardîzekirina pêvajoyan çêtirkirina wan û piştre sazkirin û hevahengkirina wan dihewîne, ku dihêle performansa çêtirîn a demdirêj - serbixwe ji bikarhêner. Standardîzekirin encamên bi kalîte bilind, û her weha dubarekirin û berawirdkirina wan misoger dike.
Armanca PCR (ya klasîk) ew e ku encamek pêbawer û dubarekirî bi dest bixe. Ji bo hin serlêdanan, berhemaBerhema PCRjî girîng e. Ji bo van reaksiyonan, divê baldar be ku nimûne nekevin xetereyê û herikîna karê PCR-ê sabît bimîne. Bi taybetî, ev tê wateya kêmkirina danasîna gemarîyan ku dikarin bibin sedema encamên erênî an neyînî yên derewîn an jî tewra reaksiyona PCR-ê asteng bikin. Wekî din, divê şert û mercên reaksiyonê ji bo her nimûneyek di nav ceribandinekê de bi qasî ku pêkan be yek bin û her weha ji bo reaksiyonên paşîn (bi heman rêbazê) jî werin veguheztin. Ev yek hem ji bo pêkhateya reaksiyonan û hem jî ji bo celebê kontrola germahiyê di çerxerê de vedibêje. Bê guman, divê xeletiyên bikarhêner bi qasî ku pêkan be werin dûrxistin.
Li jêr, em ê dijwarîyên ku di dema amadekirin û di tevahiya pêvajoya PCR-ê de têne dîtin - û nêzîkatîyên çareserîyê yên ku di derbarê amûr û madeyên xerckirinê yên ku ji bo standardîzekirina herikînên karên PCR-ê têne bikar anîn de hene, nîşan bidin.
Amadekariya reaksiyonê
Belavkirina pêkhateyên reaksiyonê nav damarên PCR, an jî bi rêzdarî nav lewheyên PCR, gelek dijwarîyan dihewîne ku divê werin çareserkirin:
Mercên reaksiyonê
Dozkirina rast û durist a pêkhateyên ferdî dema ku şert û mercên reaksiyonê yên herî wekhev têne armanc kirin pir girîng e. Ji bilî teknîkek baş a pîpetkirinê, hilbijartina amûra rast jî pir girîng e. Têkelên master ên PCR-ê pir caran madeyên ku vîskozîteyê zêde dikin an kef çêdikin dihewînin. Di dema pêvajoya pîpetkirinê de, ev dibin sedema şilbûna girîng aserên pîpetê, bi vî awayî rastbûna pîpetkirinê kêm dike. Bikaranîna pergalên belavkirina rasterast an serê pîpetên alternatîf ên ku kêmtir meyla şilbûnê hene, dikare rastbûn û duristbûna pêvajoya pîpetkirinê baştir bike.
Gemarîbûn
Di dema pêvajoya belavkirinê de, aerosol çêdibin ku, ger destûr bê dayîn ku bigihîjin hundirê pîpetê, dibe ku di gava pîpetkirinê ya din de nimûneyek din qirêj bikin. Ev dikare bi karanîna serê fîlteran an pergalên cihguherandina rasterast were asteng kirin.
Kelûpelên xerckirinê yên wekîşîret, konteyner û plakayên ku di xebata PCR-ê de têne bikar anîn divê madeyên ku nimûneyê xera dikin an encamê sexte dikin, tê de nebin. Ev DNA, DNaz, RNaz û astengkerên PCR-ê, û her weha pêkhateyên ku dibe ku di dema reaksiyonê de ji materyalê derkevin - madeyên ku wekî madeyên ku dikarin werin derxistin têne zanîn.
Çewtiya bikarhêner
Her ku nimûne zêdetir werin pêvajokirin, xetera çewtiyê ewqas zêde dibe. Bi hêsanî dikare bibe ku nimûneyek bi pîpetê bikeve nav konteynirek xelet an jî bîreke xelet. Ev xetere dikare bi nîşankirina bi hêsanî ya bîran bi girîngî were kêmkirin. Bi rêya otomatîkkirina gavên belavkirinê, "faktora mirovî", ango çewtî û guherînên têkildarî bikarhêner, têne kêmkirin, bi vî rengî dubarebûn zêde dibe, nemaze di rewşa qebareyên reaksiyonê yên piçûk de. Ev hewce dike ku plakayên bi îstîqrara pîvanî ya têr di stasyona xebatê de werin bikar anîn. Barkodên pêvekirî xwendina makîneyê ya zêde peyda dikin, ku şopandina nimûneyê di tevahiya pêvajoyê de hêsan dike.
Bernamekirina termocycler
Bernamekirina amûrekê dikare pir wext bigire û her weha meyla xeletiyan jî hebe. Taybetmendiyên cûda yên PCR-ê yên çerxerêya germî bi hev re dixebitin da ku vê gava pêvajoyê hêsan bikin û, ya herî girîng, ew ewle bikin:
Bikaranîna hêsan û rêberiya baş a bikarhêner bingeha bernamekirina bi bandor in. Li ser vê bingehê, rêveberiya bikarhêner a bi şîfreya parastî dê rê li ber guhertina bernameyên kesane ji hêla bikarhênerên din ve bigire. Ger gelek çerxer (ji heman celebê) di karanînê de bin, sûdmend e ku bernameyek rasterast ji amûrekê bo amûrek din bi rêya USB an girêdanê were veguheztin. Nermalava komputerê rêveberiya navendî û ewledar a bernameyan, mafên bikarhêner û belgeyên li ser komputerê gengaz dike.
Xebata PCR
Di dema xebitandinê de, DNA di konteynirê reaksiyonê de tê zêdekirin, li wir divê her nimûne di şert û mercên reaksiyonê yên wekhev û domdar de were derbaskirin. Aliyên jêrîn ji bo pêvajoyê girîng in:
Kontrola germahiyê
Rastbûna pir baş di kontrola germahiyê de û homojeniya bloka cycler bingeha şertkirina germahiyê ya wekhev a hemî nimûneyan in. Kalîteya bilind a hêmanên germkirin û sarkirinê (hêmanên peltier), û her weha awayê ku ev bi blokê ve girêdayî ne, faktorên biryardar in ku dê xetera nakokiyên germahiyê yên ku wekî "bandora qiraxê" têne zanîn diyar bikin.
Buharbûn
Divê ji ber buharbûnê, di dema reaksiyonê de rêjeyên pêkhateyên reaksiyonê yên ferdî neguherin. Wekî din, mimkun e ku pir hindikBerhema PCRdibe ku çêbibe, an jî qet çênebe. Ji ber vê yekê girîng e ku bi misogerkirina mohreke ewle buharbûn kêm bibe. Di vê rewşê de, qapaxa germ a termocycler û mohra konteynerê bi hev re dixebitin. Vebijarkên mohrkirinê yên cûda ji boPlaqeyên PCR (lînk: Gotara mohrkirinê), ku bi vî awayî mohra herî baş bi rêya mohra germê tê bidestxistin. Girtinên din jî dikarin guncaw bin, heya ku zexta têkiliyê ya qapaxa sîklêrê li gorî mohra bijartî were verast kirin.
Ji bo parastina encamên rast û dubarekirî di demek dirêj de, standardîzekirina pêvajoyê tê kirin. Ev yek lênêrîna birêkûpêk a alavan vedihewîne da ku ew her gav di rewşek baş a xebatê de bin. Divê hemî madeyên xerckirinê di hemî beşên hilberandî de bi qalîteyek domdar bilind bin, û divê hebûna wan a pêbawer were garantîkirin.
Dema weşandinê: 29ê Mijdarê-2022