პროცესების სტანდარტიზაცია მოიცავს მათ ოპტიმიზაციას და შემდგომ დამკვიდრებასა და ჰარმონიზაციას, რაც უზრუნველყოფს გრძელვადიანი ოპტიმალური შესრულების მიღწევას - მომხმარებლისგან დამოუკიდებლად. სტანდარტიზაცია უზრუნველყოფს მაღალი ხარისხის შედეგებს, ასევე მათ რეპროდუცირებადობასა და შედარებადობას.
(კლასიკური) პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქციის მიზანია საიმედო და რეპროდუცირებადი შედეგის გენერირება. გარკვეული გამოყენებისთვის, გამოსავლიანობაPCR პროდუქტიასევე აქტუალურია. ამ რეაქციების შემთხვევაში, ყურადღება უნდა მიექცეს იმის უზრუნველყოფას, რომ ნიმუშები არ დაზიანდეს და PCR სამუშაო პროცესი სტაბილური დარჩეს. კერძოდ, ეს ნიშნავს დაბინძურების მინიმუმამდე დაყვანას, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს ცრუ დადებითი ან ცრუ უარყოფითი შედეგები ან თუნდაც PCR რეაქციის შეფერხება. გარდა ამისა, რეაქციის პირობები უნდა იყოს მაქსიმალურად იდენტური თითოეული ნიმუშისთვის ერთი ცდის ფარგლებში და ასევე უნდა იყოს გადასაცემი შემდგომ რეაქციებზე (იგივე მეთოდით). ეს ეხება რეაქციების შემადგენლობას, ასევე ციკლერში ტემპერატურის კონტროლის ტიპს. რა თქმა უნდა, მომხმარებლის შეცდომები მაქსიმალურად უნდა იქნას აცილებული.
ქვემოთ ჩვენ ვაჩვენებთ PCR-ის მომზადებისა და მისი მიმდინარეობისას წარმოშობილ გამოწვევებს, ასევე PCR-ის სამუშაო პროცესების სტანდარტიზაციისთვის გამოყენებულ ინსტრუმენტებსა და სახარჯო მასალებთან დაკავშირებით არსებულ გადაწყვეტილებების მიდგომებს.
რეაქციის მომზადება
რეაქციის კომპონენტების PCR ჭურჭელში, ანუ შესაბამისად, ფირფიტებში განთავსებას მრავალი გამოწვევა ახლავს თან, რომელთა გადალახვაც აუცილებელია:
რეაქციის პირობები
ინდივიდუალური კომპონენტების ზუსტი და ზუსტი დოზირება აუცილებელია მაქსიმალურად იდენტური რეაქციის პირობების მისაღწევად. კარგი პიპეტირების ტექნიკის გარდა, კრიტიკულად მნიშვნელოვანია სწორი ხელსაწყოს შერჩევა. PCR მასტერმიქსები ხშირად შეიცავს ნივთიერებებს, რომლებიც ზრდიან სიბლანტეს ან წარმოქმნიან ქაფს. პიპეტირების პროცესის დროს ეს იწვევს ნივთიერების მნიშვნელოვან დასველებას.პიპეტის წვერები, რითაც მცირდება პიპეტირების სიზუსტე. პირდაპირი განაწილების სისტემების ან ალტერნატიული პიპეტის წვერების გამოყენება, რომლებიც ნაკლებად მიდრეკილია დასველებისკენ, შეუძლია გააუმჯობესოს პიპეტირების პროცესის სიზუსტე და სიზუსტე.
დაბინძურება
გაცემის პროცესის დროს წარმოიქმნება აეროზოლები, რომლებსაც პიპეტის შიგნით მოხვედრის შემთხვევაში, შეუძლიათ შემდეგი პიპეტირების ეტაპზე სხვა ნიმუშის დაბინძურება. ამის თავიდან აცილება შესაძლებელია ფილტრის წვერების ან პირდაპირი გადაადგილების სისტემების გამოყენებით.
სახარჯი მასალები, როგორიცაარჩევებიპოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქციის სამუშაო პროცესში გამოყენებული ჭურჭელი და ფირფიტები არ უნდა შეიცავდეს ნივთიერებებს, რომლებიც აზიანებს ნიმუშის ხარისხს ან ამახინჯებს შედეგს. ესენია დნმ, დნმ-ის ნაზები, რნმ-ის ნაზები და პოლიმერაზული ჯაჭვური რეაქციის ინჰიბიტორები, ასევე კომპონენტები, რომლებიც პოტენციურად შეიძლება გამოჟონოს მასალიდან რეაქციის დროს - ნივთიერებები, რომლებიც ცნობილია როგორც გაჟონვადი ნივთიერებები.
მომხმარებლის შეცდომა
რაც უფრო მეტი ნიმუში მუშავდება, მით უფრო მაღალია შეცდომის რისკი. ადვილად შეიძლება მოხდეს ისე, რომ ნიმუში პიპეტით არასწორ ჭურჭელში ან არასწორ ჭაში მოხვდეს. ეს რისკი მნიშვნელოვნად შეიძლება შემცირდეს ჭების ადვილად შესამჩნევი მარკირებით. გაცემის ეტაპების ავტომატიზაციის გზით, მინიმუმამდეა დაყვანილი „ადამიანური ფაქტორი“, ანუ შეცდომები და მომხმარებელთან დაკავშირებული ვარიაციები, რაც ზრდის რეპროდუცირებადობას, განსაკუთრებით მცირე რეაქციის მოცულობების შემთხვევაში. ამისათვის საჭიროა სამუშაო ადგილზე საკმარისი განზომილებიანი სტაბილურობის მქონე ფირფიტების გამოყენება. მიმაგრებული შტრიხკოდები უზრუნველყოფს დამატებით მანქანური წაკითხვის შესაძლებლობას, რაც ამარტივებს ნიმუშის თვალყურის დევნებას მთელი პროცესის განმავლობაში.
თერმოციკლერის პროგრამირება
ინსტრუმენტის პროგრამირება შეიძლება დიდ დროს მოითხოვდეს და შეცდომების დაშვებისკენ იყოს მიდრეკილი. PCR თერმული ციკლის სხვადასხვა ფუნქცია ერთად მუშაობს ამ პროცესის ეტაპის გასამარტივებლად და, რაც მთავარია, მისი უსაფრთხოების უზრუნველსაყოფად:
მარტივი გამოყენება და მომხმარებლის კარგი ხელმძღვანელობა ეფექტური პროგრამირების საფუძველია. ამ საფუძველზე დაყრდნობით, პაროლით დაცული მომხმარებლის ადმინისტრირება ხელს შეუშლის სხვა მომხმარებლების მიერ საკუთარი პროგრამების შეცვლას. თუ გამოიყენება მრავალი ციკლერი (ერთი და იგივე ტიპის), სასარგებლოა, თუ პროგრამის გადატანა პირდაპირ ერთი ინსტრუმენტიდან მეორეზე USB-ის ან კავშირის საშუალებით იქნება შესაძლებელი. კომპიუტერული პროგრამული უზრუნველყოფა საშუალებას იძლევა პროგრამების, მომხმარებლის უფლებებისა და დოკუმენტების ცენტრალიზებულ და უსაფრთხო ადმინისტრირებას კომპიუტერზე.
PCR-ის გაშვება
გაშვების დროს დნმ ამპლიფიცირდება რეაქციის ჭურჭელში, სადაც თითოეული ნიმუში უნდა დაექვემდებაროს იდენტურ, თანმიმდევრულ რეაქციის პირობებს. პროცესისთვის მნიშვნელოვანია შემდეგი ასპექტები:
ტემპერატურის კონტროლი
ტემპერატურის კონტროლის შესანიშნავი სიზუსტე და ციკლერის ბლოკის ერთგვაროვნება ყველა ნიმუშის თანაბარი ტემპერატურული კონდიცირების საფუძველია. გამათბობელი და გამაგრილებელი ელემენტების (პელტიეს ელემენტები) მაღალი ხარისხი, ასევე მათი ბლოკთან დაკავშირების წესი, გადამწყვეტი ფაქტორებია, რომლებიც განსაზღვრავენ ტემპერატურის შეუსაბამობის რისკს, რომელიც ცნობილია როგორც „კიდის ეფექტი“.
აორთქლება
რეაქციის ცალკეული კომპონენტების კონცენტრაციები რეაქციის მსვლელობისას აორთქლების გამო არ უნდა შეიცვალოს. წინააღმდეგ შემთხვევაში, შესაძლებელია, რომ ძალიან მცირეPCR პროდუქტიშეიძლება წარმოიქმნას ან საერთოდ არ წარმოიქმნას. ამიტომ, მნიშვნელოვანია აორთქლების მინიმუმამდე დაყვანა საიმედო დალუქვის უზრუნველყოფით. ამ შემთხვევაში, თერმოციკლერის გაცხელებული თავსახური და ჭურჭლის დალუქვა ერთმანეთთან მჭიდრო კავშირშია. ხელმისაწვდომია დალუქვის სხვადასხვა ვარიანტი.PCR ფირფიტები (ბმული: დალუქვის სტატია), რომლის მეშვეობითაც საუკეთესო დალუქვა მიიღწევა თერმული დალუქვის გზით. სხვა დახურვებიც შეიძლება იყოს შესაფერისი, იმ პირობით, რომ ციკლერის თავსახურის კონტაქტური წნევა შეიძლება მორგებული იყოს არჩეულ დალუქვაზე.
პროცესის სტანდარტიზაცია ხორციელდება ზუსტი და რეპროდუცირებადი შედეგების გრძელვადიან პერსპექტივაში უზრუნველყოფის მიზნით. ეს მოიცავს აღჭურვილობის რეგულარულ მოვლა-პატრონობას, რათა უზრუნველყოფილი იყოს მისი ყოველთვის კარგ სამუშაო მდგომარეობაში ყოფნა. ყველა სახარჯი მასალა უნდა იყოს მუდმივად მაღალი ხარისხის ყველა წარმოებულ პარტიაში და მათი საიმედო ხელმისაწვდომობა უნდა იყოს გარანტირებული.
გამოქვეყნების დრო: 2022 წლის 29 ნოემბერი