Staðlun ferla felur í sér hagræðingu þeirra og síðari stofnun og samræmingu, sem gerir kleift að ná sem bestum árangri til langs tíma – óháð notanda. Staðlun tryggir hágæða niðurstöður, sem og endurtekningar- og samanburðarhæfni þeirra.
Markmið (hefðbundinnar) PCR er að fá áreiðanlegar og endurtakanlegar niðurstöður. Fyrir ákveðnar notkunarsvið er afköstin afPCR varaer einnig viðeigandi. Fyrir þessar viðbrögð verður að gæta þess að sýnin séu ekki í hættu og að PCR vinnuflæðið haldist stöðugt. Þetta þýðir sérstaklega að lágmarka mengun sem gæti leitt til falskra jákvæðra eða falskra neikvæðra niðurstaðna eða jafnvel hamlað PCR viðbrögðunum. Ennfremur ættu viðbragðsskilyrðin að vera eins eins og mögulegt er fyrir hvert einstakt sýni innan keyrslu og einnig að vera yfirfæranleg á síðari viðbrögð (með sömu aðferð). Þetta vísar til samsetningar viðbragðanna sem og gerð hitastýringar í hringrásartækinu. Að sjálfsögðu skal forðast notendavillur eins og mögulegt er.
Hér að neðan munum við sýna fram á þær áskoranir sem koma upp við undirbúning og meðan á PCR stendur – og þær lausnir sem eru til staðar varðandi tæki og rekstrarvörur sem notuð eru til að staðla PCR vinnuflæði.
Undirbúningur viðbragða
Dreifing hvarfefna í PCR-ílát, eða plötur, felur í sér margar áskoranir sem þarf að yfirstíga:
Viðbragðsskilyrði
Nákvæm og nákvæm skömmtun einstakra íhluta er ómissandi þegar stefnt er að því að ná sem eins eins viðbragðsskilyrðum og mögulegt er. Auk góðrar pípettunartækni er val á réttu verkfæri afar mikilvægt. PCR-aðalblöndur innihalda oft efni sem auka seigju eða mynda froðu. Við pípettunarferlið leiða þetta til mikillar vætingar ápípettuoddarog þar með minnka nákvæmni pípettunar. Notkun beinna skömmtunarkerfa eða annarra pípettuodda sem eru síður viðkvæmir fyrir blautleika getur bætt nákvæmni og nákvæmni pípettunarferlisins.
Mengun
Við útdrátt myndast úðabrúsar sem, ef þeir komast inn í pípettuna, geta hugsanlega mengað annað sýni í næsta pípettunarskrefi. Þetta er hægt að koma í veg fyrir með því að nota síuodda eða bein tilfærslukerfi.
Neysluvörur eins ográðleggingarÍlát og plötur sem notuð eru í PCR-vinnsluferlinu mega ekki innihalda efni sem skaða sýnið eða afvegaleiða niðurstöðurnar. Þar á meðal eru DNA, DNasa, RNasa og PCR-hemlar, sem og efni sem hugsanlega geta lekið úr efninu við efnahvarfið – efni sem kallast útskolun.
Notendavilla
Því fleiri sýni sem unnin eru, því meiri er hættan á villum. Það getur auðveldlega gerst að sýni sé pípettað í rangt ílát eða rangan brunn. Þessa áhættu má draga verulega úr með auðgreinanlegri merkingu brunnanna. Með sjálfvirkni úthlutunarskrefa er „mannlegi þátturinn“, þ.e. villur og notendatengdar breytingar, lágmarkað, sem eykur endurtekningarhæfni, sérstaklega þegar um lítið magn af svörun er að ræða. Þetta krefst þess að plötur með nægilegum víddarstöðugleika séu notaðar í vinnustöð. Meðfylgjandi strikamerki auka lesanleika vélarinnar, sem einfaldar rakningu sýna í gegnum allt ferlið.
Forritun hitahringrásartækisins
Forritun tækis getur reynst tímafrek og einnig villuhæg. Mismunandi eiginleikar PCR hitahringrásartækisins vinna saman að því að einfalda þetta ferli og, síðast en ekki síst, gera það öruggt:
Einföld notkun og góð leiðsögn fyrir notendur eru undirstaða skilvirkrar forritunar. Með því að byggja á þessum grunni mun lykilorðsvarin notendastjórnun koma í veg fyrir að aðrir notendur breyti eigin forritum. Ef margir hjólreiðatæki (af sömu gerð) eru í notkun er hagkvæmt ef hægt er að flytja forrit beint úr einu tæki í annað með USB eða tengingu. Tölvuhugbúnaður gerir kleift að stjórna forritum, notendaréttindum og skjölum á miðlægri og öruggri hátt á tölvu.
PCR keyrsla
Í keyrslunni er DNA magnað upp í hvarftankinum þar sem hvert sýni ætti að vera undir eins og samræmdum hvarfskilyrðum. Eftirfarandi þættir skipta máli fyrir ferlið:
Hitastýring
Framúrskarandi nákvæmni í hitastýringu og einsleitni hringrásarblokkarinnar eru grundvöllur fyrir jafnri hitastigsmeðhöndlun allra sýna. Hágæði hitunar- og kæliþáttanna (peltier-þáttanna), sem og hvernig þeir eru tengdir við blokkina, eru úrslitaþættirnir sem munu ákvarða hættuna á hitastigsfrávikum sem kallast „kantáhrif“.
Uppgufun
Styrkur einstakra þátta í viðbrögðunum ætti ekki að breytast vegna uppgufunar. Annars er mögulegt að mjög lítið magn af ...PCR varagæti myndast, eða alls engin. Því er mikilvægt að lágmarka uppgufun með því að tryggja örugga þéttingu. Í þessu tilfelli vinna heitt lok hitahringrásarinnar og þétting ílátsins hönd í hönd. Mismunandi þéttimöguleikar eru í boði fyrirPCR plötur (hlekkur: Grein um þéttingu), þar sem besta þéttingin næst með hitaþéttingu. Aðrar lokanir geta einnig hentað, svo framarlega sem hægt er að aðlaga snertiþrýsting loksins á hringrásartækinu að völdum þétti.
Staðlun ferla er til staðar til að tryggja nákvæmar og endurtakanlegar niðurstöður til langs tíma litið. Þetta felur í sér reglulegt viðhald búnaðarins til að tryggja að hann sé alltaf í góðu ástandi. Allar rekstrarvörur ættu að vera af stöðugum hágæða í öllum framleiddum lotum og áreiðanlegt framboð þeirra verður að vera tryggt.
Birtingartími: 29. nóvember 2022