પ્રક્રિયાઓના માનકીકરણમાં તેમના ઑપ્ટિમાઇઝેશન અને ત્યારબાદ સ્થાપના અને સુમેળનો સમાવેશ થાય છે, જે વપરાશકર્તાથી સ્વતંત્ર લાંબા ગાળાના શ્રેષ્ઠ પ્રદર્શનને મંજૂરી આપે છે. માનકીકરણ ઉચ્ચ-ગુણવત્તાવાળા પરિણામો તેમજ તેમની પ્રજનનક્ષમતા અને તુલનાત્મકતાની ખાતરી આપે છે.
(ક્લાસિક) પીસીઆરનો ધ્યેય વિશ્વસનીય અને પુનઃઉત્પાદનક્ષમ પરિણામ ઉત્પન્ન કરવાનો છે. ચોક્કસ એપ્લિકેશનો માટે, ની ઉપજપીસીઆર ઉત્પાદનઆ પ્રતિક્રિયાઓ માટે, નમૂનાઓ સાથે ચેડા ન થાય અને PCR કાર્યપ્રવાહ સ્થિર રહે તેની કાળજી લેવી જોઈએ. ખાસ કરીને, આનો અર્થ એ થાય કે ખોટા હકારાત્મક અથવા ખોટા નકારાત્મક પરિણામો તરફ દોરી શકે તેવા દૂષણોના પરિચયને ઓછો કરવો અથવા PCR પ્રતિક્રિયાને પણ અટકાવી શકાય. વધુમાં, એક જ દોડમાં દરેક વ્યક્તિગત નમૂના માટે પ્રતિક્રિયાની સ્થિતિ શક્ય તેટલી સમાન હોવી જોઈએ અને તે પછીની પ્રતિક્રિયાઓ (સમાન પદ્ધતિની) માં પણ સ્થાનાંતરિત થઈ શકે. આ પ્રતિક્રિયાઓની રચના તેમજ સાયકલરમાં તાપમાન નિયંત્રણના પ્રકારનો સંદર્ભ આપે છે. અલબત્ત, વપરાશકર્તા ભૂલો શક્ય તેટલી ટાળવી જોઈએ.
નીચે, અમે તૈયારી દરમિયાન અને પીસીઆરના સમગ્ર સંચાલન દરમિયાન આવતી પડકારો - અને પીસીઆર વર્કફ્લોના માનકીકરણ માટે ઉપયોગમાં લેવાતા સાધનો અને ઉપભોજ્ય વસ્તુઓના સંદર્ભમાં અસ્તિત્વમાં રહેલા ઉકેલો માટેના અભિગમોનું નિદર્શન કરીશું.
પ્રતિક્રિયા તૈયારી
પ્રતિક્રિયા ઘટકોને અનુક્રમે PCR-વાહિનીઓ અથવા પ્લેટોમાં વિતરણ કરવામાં અનેક પડકારોનો સમાવેશ થાય છે જેને દૂર કરવા આવશ્યક છે:
પ્રતિક્રિયા શરતો
શક્ય તેટલી સમાન પ્રતિક્રિયા પરિસ્થિતિઓ માટે લક્ષ્ય રાખતી વખતે વ્યક્તિગત ઘટકોની ચોક્કસ અને ચોક્કસ માત્રા અનિવાર્ય છે. સારી પાઇપેટિંગ તકનીક ઉપરાંત, યોગ્ય સાધન પસંદ કરવું મહત્વપૂર્ણ છે. પીસીઆર માસ્ટર-મિક્સમાં વારંવાર એવા પદાર્થો હોય છે જે સ્નિગ્ધતા વધારે છે અથવા ફીણ ઉત્પન્ન કરે છે. પાઇપેટિંગ પ્રક્રિયા દરમિયાન, આનાથી નોંધપાત્ર ભીનાશ થાય છે.પાઇપેટ ટીપ્સ, આમ પાઇપેટિંગ ચોકસાઈ ઘટાડે છે. ડાયરેક્ટ ડિસ્પેન્સિંગ સિસ્ટમ્સ અથવા વૈકલ્પિક પાઇપેટિંગ ટીપ્સનો ઉપયોગ જે ભીના થવાની સંભાવના ઓછી હોય છે, પાઇપેટિંગ પ્રક્રિયાની ચોકસાઈ અને ચોકસાઈમાં સુધારો કરી શકે છે.
દૂષણો
વિતરણ પ્રક્રિયા દરમિયાન, એરોસોલ્સ ઉત્પન્ન થાય છે, જે જો પીપેટની અંદર સુધી પહોંચવા દેવામાં આવે તો, આગામી પીપેટિંગ પગલા દરમિયાન બીજા નમૂનાને સંભવિત રીતે દૂષિત કરી શકે છે. ફિલ્ટર ટીપ્સ અથવા ડાયરેક્ટ ડિસ્પ્લેસમેન્ટ સિસ્ટમ્સનો ઉપયોગ કરીને આને અટકાવી શકાય છે.
ઉપભોક્તા વસ્તુઓ જેમ કેટિપ્સ, પીસીઆર વર્કફ્લોમાં ઉપયોગમાં લેવાતા વાસણો અને પ્લેટોમાં એવા પદાર્થો ન હોવા જોઈએ જે નમૂનાને નુકસાન પહોંચાડે અથવા પરિણામને ખોટા સાબિત કરે. આમાં ડીએનએ, ડીનેસેસ, આરનેસેસ અને પીસીઆર અવરોધકો, તેમજ ઘટકોનો સમાવેશ થાય છે જે પ્રતિક્રિયા દરમિયાન સામગ્રીમાંથી સંભવિત રીતે લીક થઈ શકે છે - લીચેબલ તરીકે ઓળખાતા પદાર્થો.
વપરાશકર્તા ભૂલ
જેટલા વધુ નમૂનાઓ પર પ્રક્રિયા કરવામાં આવે છે, ભૂલનું જોખમ એટલું જ વધારે છે. એવું સરળતાથી બની શકે છે કે નમૂના ખોટા વાસણમાં અથવા ખોટા કૂવામાં નાખવામાં આવે છે. કુવાઓના સરળતાથી ઓળખી શકાય તેવા માર્કિંગ દ્વારા આ જોખમ નોંધપાત્ર રીતે ઘટાડી શકાય છે. વિતરણ પગલાંના ઓટોમેશન દ્વારા, "માનવ પરિબળ", એટલે કે, ભૂલો અને વપરાશકર્તા-સંબંધિત ભિન્નતા, ઓછી થાય છે, આમ પ્રજનનક્ષમતા વધે છે, ખાસ કરીને નાના પ્રતિક્રિયા વોલ્યુમના કિસ્સામાં. આ માટે વર્કસ્ટેશનમાં પૂરતી પરિમાણીય સ્થિરતા ધરાવતી પ્લેટોનો ઉપયોગ કરવાની જરૂર છે. જોડાયેલ બારકોડ વધારાની મશીન-વાંચનક્ષમતા પ્રદાન કરે છે, જે સમગ્ર પ્રક્રિયા દરમિયાન નમૂના ટ્રેકિંગને સરળ બનાવે છે.
થર્મોસાયકલરનું પ્રોગ્રામિંગ
કોઈ સાધનનું પ્રોગ્રામિંગ સમય માંગી લે તેવું અને ભૂલ-પ્રભાવી સાબિત થઈ શકે છે. વિવિધ પીસીઆર થર્મલ સાયકલર સુવિધાઓ આ પ્રક્રિયાના પગલાને સરળ બનાવવા અને સૌથી અગત્યનું, તેને સુરક્ષિત બનાવવા માટે સાથે મળીને કામ કરે છે:
સરળ કામગીરી અને સારું વપરાશકર્તા માર્ગદર્શન કાર્યક્ષમ પ્રોગ્રામિંગનો પાયો છે. આ પાયા પર નિર્માણ કરીને, પાસવર્ડ-સંરક્ષિત વપરાશકર્તા વહીવટ વ્યક્તિના પોતાના પ્રોગ્રામ્સને અન્ય વપરાશકર્તાઓ દ્વારા બદલવાથી અટકાવશે. જો બહુવિધ સાયકલર્સ (સમાન પ્રકારના) ઉપયોગમાં હોય, તો જો કોઈ પ્રોગ્રામને USB અથવા કનેક્ટિવિટી દ્વારા સીધા એક સાધનથી બીજા સાધનમાં ટ્રાન્સફર કરી શકાય તો તે ફાયદાકારક છે. કમ્પ્યુટર સોફ્ટવેર કમ્પ્યુટર પર પ્રોગ્રામ્સ, વપરાશકર્તા અધિકારો અને દસ્તાવેજોનું કેન્દ્રિય અને સુરક્ષિત વહીવટ સક્ષમ બનાવે છે.
પીસીઆર રન
દોડ દરમિયાન, પ્રતિક્રિયા વાહિનીમાં ડીએનએને વિસ્તૃત કરવામાં આવે છે, જ્યાં દરેક નમૂના સમાન, સુસંગત પ્રતિક્રિયા પરિસ્થિતિઓને આધિન હોવો જોઈએ. પ્રક્રિયા માટે નીચેના પાસાઓ સંબંધિત છે:
તાપમાન નિયંત્રણ
તાપમાન નિયંત્રણમાં ઉત્તમ ચોકસાઈ અને સાયકલર બ્લોકની એકરૂપતા એ બધા નમૂનાઓના સમાન તાપમાન કન્ડીશનીંગ માટેનો આધાર છે. ગરમી અને ઠંડક તત્વો (પેલ્ટિયર તત્વો) ની ઉચ્ચ ગુણવત્તા, તેમજ આ બ્લોક સાથે કેવી રીતે જોડાયેલા છે, તે નિર્ણાયક પરિબળો છે જે "એજ ઇફેક્ટ" તરીકે ઓળખાતા તાપમાન વિસંગતતાઓનું જોખમ નક્કી કરશે.
બાષ્પીભવન
બાષ્પીભવનને કારણે પ્રતિક્રિયા દરમિયાન વ્યક્તિગત પ્રતિક્રિયા ઘટકોની સાંદ્રતા બદલવી જોઈએ નહીં. નહિંતર, શક્ય છે કે ખૂબ જ ઓછીપીસીઆર ઉત્પાદનઉત્પન્ન થઈ શકે છે, અથવા બિલકુલ નહીં. તેથી સુરક્ષિત સીલ સુનિશ્ચિત કરીને બાષ્પીભવન ઓછું કરવું ખૂબ જ મહત્વપૂર્ણ છે. આ કિસ્સામાં, થર્મોસાયક્લરનું ગરમ ઢાંકણ અને વાસણનું સીલ એકસાથે કામ કરે છે. માટે વિવિધ સીલિંગ વિકલ્પો ઉપલબ્ધ છેપીસીઆર પ્લેટ્સ (લિંક: સીલિંગ લેખ), જેના દ્વારા હીટ સીલિંગ દ્વારા શ્રેષ્ઠ સીલ પ્રાપ્ત થાય છે. અન્ય ક્લોઝર પણ યોગ્ય હોઈ શકે છે, જ્યાં સુધી સાયકલર ઢાંકણના સંપર્ક દબાણને પસંદ કરેલ સીલ સાથે ગોઠવી શકાય.
લાંબા ગાળે સચોટ અને પુનઃઉત્પાદનક્ષમ પરિણામોને સુરક્ષિત રાખવા માટે પ્રક્રિયા માનકીકરણ અમલમાં છે. આમાં સાધનોની નિયમિત જાળવણીનો સમાવેશ થાય છે જેથી ખાતરી કરી શકાય કે તે હંમેશા સારી કાર્યકારી સ્થિતિમાં રહે છે. ઉત્પાદિત તમામ લોટમાં તમામ ઉપભોક્તા વસ્તુઓ સતત ઉચ્ચ ગુણવત્તાની હોવી જોઈએ, અને તેમની વિશ્વસનીય ઉપલબ્ધતાની ખાતરી હોવી જોઈએ.
પોસ્ટ સમય: નવેમ્બર-29-2022