Prozesuen estandarizazioak haien optimizazioa eta ondorengo ezarpena eta harmonizazioa barne hartzen ditu, epe luzerako errendimendu optimoa ahalbidetuz – erabiltzailearengandik independenteki. Estandarizazioak kalitate handiko emaitzak bermatzen ditu, baita haien erreproduzigarritasuna eta alderagarritasuna ere.
(PCR klasikoaren) helburua emaitza fidagarri eta erreproduzigarri bat sortzea da. Aplikazio batzuetarako, emaitzaren errendimendua...PCR produktuaere garrantzitsua da. Erreakzio hauetarako, kontuz ibili behar da laginak ez kaltetzeko eta PCR lan-fluxua egonkor mantentzeko. Zehazki, horrek esan nahi du emaitza faltsu positibo edo faltsu negatiboak eragin ditzaketen edo PCR erreakzioa inhibitzen duten kutsadurak gutxitzea. Gainera, erreakzio-baldintzak ahalik eta berdin-berdinak izan behar dira exekuzio bateko lagin bakoitzerako eta ondorengo erreakzioetara (metodo berarekin) transferigarriak izan behar dira. Horrek erreakzioen konposizioari eta ziklatzailearen tenperatura-kontrol motari egiten dio erreferentzia. Erabiltzaileen akatsak, noski, ahalik eta gehien saihestu behar dira.
Jarraian, PCR baten prestaketan eta exekuzioan zehar aurkitzen diren erronkak erakutsiko ditugu, baita PCR lan-fluxuen estandarizaziorako erabiltzen diren tresnei eta kontsumigarriei dagokienez dauden irtenbideetarako ikuspegiak ere.
Erreakzioaren prestaketa
Erreakzio-osagaiak PCR ontzietan edo plaketan banatzea, hurrenez hurren, hainbat erronka gainditu behar ditu:
Erreakzio-baldintzak
Erreakzio-baldintza ahalik eta berdinenak lortzeko, ezinbestekoa da osagai indibidualen dosifikazio zehatza eta zehatza egitea. Pipetatzeko teknika onaz gain, tresna egokia aukeratzea ere funtsezkoa da. PCR master-nahasketek biskositatea handitzen edo aparra sortzen duten substantziak izaten dituzte maiz. Pipetatzeko prozesuan, hauek asko bustitzen dute...pipeta puntak, eta horrela pipetatzearen zehaztasuna murrizten da. Banaketa zuzeneko sistemen edo bustitzeko joera gutxiago duten pipeta punten erabilerak pipetatze prozesuaren zehaztasuna eta doitasuna hobetu ditzake.
Kutsadurak
Banaketa prozesuan zehar, aerosolak sortzen dira, eta pipetaren barrura iristen badira, beste lagin bat kutsa dezakete hurrengo pipetatze urratsean. Hori saihestu daiteke iragazki puntak edo desplazamendu zuzeneko sistemak erabiliz.
Kontsumigarriak, hala nolaaholkuakPCR lan-fluxuan erabiltzen diren ontzi eta plakek ez dute lagina kaltetzen edo emaitza faltsutzen duten substantziarik izan behar. Horien artean daude DNA, DNasak, RNasak eta PCR inhibitzaileak, baita erreakzioan zehar materialetik iragaz daitezkeen osagaiak ere – iragazgaitz izeneko substantziak.
Erabiltzailearen errorea
Zenbat eta lagin gehiago prozesatu, orduan eta handiagoa da errore arriskua. Erraz gerta daiteke lagin bat ontzi okerrean edo putzu okerrean pipetatzea. Arrisku hori nabarmen murriztu daiteke putzuak erraz hautematen diren markatuz. Banaketa-urratsen automatizazioaren bidez, "giza faktorea", hau da, erroreak eta erabiltzailearekin lotutako aldaketak, minimizatzen dira, eta horrela erreproduzigarritasuna handitzen da, batez ere erreakzio-bolumen txikien kasuan. Horrek dimentsio-egonkortasun nahikoa duten plakak behar ditu lan-estazio batean erabiltzeko. Erantsitako barra-kodeek makina-irakurgarritasun gehigarria eskaintzen dute, eta horrek laginen jarraipena errazten du prozesu osoan zehar.
Termoziklagailuaren programazioa.
Tresna bat programatzea denbora asko eskatzen duen lana eta akatsak egiteko joera izan daiteke. PCR ziklatzaile termikoen hainbat ezaugarri elkarrekin lan egiten dute prozesu-urrats hau sinplifikatzeko eta, batez ere, segurua izan dadin:
Erabilera erraza eta erabiltzaileentzako gida ona dira programazio eraginkorraren oinarria. Oinarri honetan oinarrituta, pasahitz bidez babestutako erabiltzaileen administrazioak norberaren programak beste erabiltzaileek aldatzea eragotziko du. Ziklatzaile anitz (mota berekoak) erabiltzen badira, onuragarria da programa bat tresna batetik bestera zuzenean transferitu ahal izatea USB edo konexioaren bidez. Ordenagailu-softwareak programen, erabiltzaileen eskubideen eta dokumentuen administrazio zentralizatua eta segurua ahalbidetzen du ordenagailu batean.
PCR exekuzioa
Exekuzioan zehar, DNA erreakzio-ontzian anplifikatzen da, eta bertan lagin bakoitza erreakzio-baldintza berdin eta koherenteetan jarri behar da. Alderdi hauek garrantzitsuak dira prozesuan:
Tenperatura kontrola
Tenperatura-kontrolaren zehaztasun bikaina eta ziklatzaile-blokearen homogeneotasuna dira lagin guztien tenperatura-egokitzapen uniformearen oinarria. Berokuntza- eta hozte-elementuen (Peltier elementuak) kalitate handia, baita hauek blokeari konektatzeko modua ere, "ertz-efektua" bezala ezagutzen den tenperatura-desberdintasunen arriskua zehaztuko duten faktore erabakigarriak dira.
Lurrunketa
Erreakzio-osagai indibidualen kontzentrazioak ez lirateke erreakzioan zehar aldatu behar lurrunketaren ondorioz. Bestela, posible da oso gutxi egoteaPCR produktuasor daiteke, edo batere ez. Beraz, ezinbestekoa da lurrunketa minimizatzea zigilu segurua bermatuz. Kasu honetan, termoziklatzailearen estalki berotua eta ontziaren zigilua eskutik esku lan egiten dute. Zigilatzeko aukera desberdinak daude eskuragarriPCR plakak (esteka: Zigilatzeari buruzko artikulua), eta horrela zigilurik onena bero-zigilatzearen bidez lortzen da. Beste itxiera batzuk ere egokiak izan daitezke, baldin eta ziklagailuaren estalkiaren kontaktu-presioa hautatutako zigilura egokitu badaiteke.
Prozesuen estandarizazioa ezarri da epe luzera emaitza zehatzak eta erreproduzigarriak bermatzeko. Horrek ekipamenduaren mantentze-lan erregularrak barne hartzen ditu, beti funtzionamendu-egoera onean dagoela ziurtatzeko. Kontsumigarri guztiak kalitate handikoak izan behar dira ekoitzitako lote guztietan, eta haien eskuragarritasun fidagarria bermatu behar da.
Argitaratze data: 2022ko azaroaren 29a