La normigo de procezoj inkluzivas ilian optimumigon kaj postan establon kaj harmoniigon, permesante longdaŭran optimuman funkciadon - sendepende de la uzanto. Normigo certigas altkvalitajn rezultojn, same kiel ilian reprodukteblecon kaj kompareblecon.
La celo de (klasika) PCR estas la generado de fidinda kaj reproduktebla rezulto. Por certaj aplikoj, la rendimento de laPCR-produktoankaŭ gravas. Por ĉi tiuj reagoj, oni devas zorgi, ke specimenoj ne estu kompromititaj kaj ke la PCR-laborfluo restu stabila. Specife, tio tradukiĝas al minimumigo de la enkonduko de poluadoj, kiuj povus konduki al falspozitivaj aŭ falsnegativaj rezultoj aŭ eĉ inhibicii la PCR-reagon. Krome, la reakciaj kondiĉoj estu kiel eble plej identaj por ĉiu individua specimeno ene de kuro kaj ankaŭ transdoneblaj al postaj reagoj (de la sama metodo). Tio rilatas al la konsisto de la reakcioj same kiel al la tipo de temperaturkontrolo en la ciklilo. Uzanteraroj, kompreneble, estas evitindaj kiel eble plej multe.
Sube, ni montros la defiojn, kiuj renkontiĝas dum la preparado kaj dum la tuta daŭro de PCR - kaj la alirojn al solvoj, kiuj ekzistas rilate al instrumentoj kaj konsumeblaj materialoj uzataj por la normigo de la PCR-laborfluoj.
Reakcia preparo
La disdonado de reakciaj komponantoj en PCR-ujojn, aŭ platojn, respektive, konsistas el pluraj defioj, kiujn oni devas superi:
Reakciaj kondiĉoj
La preciza kaj preciza dozado de la individuaj komponantoj estas nemalhavebla kiam oni celas la plej identajn eblajn reakciajn kondiĉojn. Aldone al bona pipeta tekniko, la elekto de la ĝusta ilo estas kritika. PCR-majstromiksaĵoj ofte enhavas substancojn, kiuj pliigas viskozecon aŭ generas ŝaŭmon. Dum la pipeta procezo, ĉi tiuj kondukas al konsiderinda malsekiĝo de la...pipetaj pintoj, tiel reduktante la precizecon de la pipetado. La uzo de rektaj dozaj sistemoj aŭ alternativaj pipetaj pintoj, kiuj malpli emas malsekiĝi, povas plibonigi la precizecon kaj precizecon de la pipetado.
Poluoj
Dum la disdonado, aerosoloj generiĝas, kiuj, se permesite atingi la internon de la pipeto, povas eble polui alian specimenon dum la sekva pipetado. Ĉi tion oni povas malhelpi per uzado de filtrilpintoj aŭ rektaj delokiĝsistemoj.
Konsumeblaj varoj kiel ekzemplekonsiloj, ujoj kaj platoj uzataj en la PCR-laborfluo ne rajtas enhavi substancojn, kiuj kompromitas la specimenon aŭ falsigas la rezulton. Ĉi tiuj inkluzivas DNA-on, DNazojn, RNazojn kaj PCR-inhibiciilojn, same kiel komponantojn, kiuj povus eble lesivi el la materialo dum la reakcio - substancoj konataj kiel lesiveblaj substancoj.
Uzanto-eraro
Ju pli da specimenoj estas prilaboritaj, des pli alta estas la risko de eraro. Povas facile okazi, ke specimeno estas pipetata en la malĝustan ujon aŭ la malĝustan puton. Ĉi tiu risko povas esti konsiderinde reduktita per facile distingebla markado de la putoj. Per la aŭtomatigo de la disdonaj paŝoj, la "homa faktoro", t.e., eraroj kaj uzant-rilataj varioj, estas minimumigitaj, tiel pliigante reprodukteblecon, precipe en kazo de malgrandaj reakciaj volumoj. Ĉi tio postulas, ke platoj kun sufiĉa dimensia stabileco estu uzataj en laborstacio. Alkroĉitaj strekkodoj provizas plian maŝinlegeblecon, kiu simpligas specimenan spuradon dum la tuta procezo.
Programado de la termociklilo
Programado de instrumento povas esti tempopostula kaj ankaŭ erarema. Diversaj PCR-termikaj ciklilaj funkcioj kunlaboras por simpligi ĉi tiun procezpaŝon kaj, plej grave, por igi ĝin sekura:
Facila funkciigo kaj bona uzantgvidado estas la bazo de efika programado. Bazante sur ĉi tiu fundamento, pasvort-protektita uzantadministrado malhelpos, ke oni ŝanĝu proprajn programojn fare de aliaj uzantoj. Se pluraj cikliloj (de la sama tipo) estas uzataj, estas utile, se programo povas esti transdonita rekte de unu instrumento al alia per USB aŭ konektebleco. Komputila programaro ebligas centran kaj sekuran administradon de programoj, uzantrajtoj kaj dokumentoj en komputilo.
PCR-kuro
Dum la kuro, DNA estas amplifikita en la reakcia ujo, kie ĉiu specimeno devas esti submetita al identaj, koheraj reakciaj kondiĉoj. La jenaj aspektoj estas gravaj por la procezo:
Temperaturkontrolo
Bonega precizeco en temperaturkontrolo kaj homogeneco de la ciklilo-bloko estas la bazo por egala temperaturkondiĉado de ĉiuj specimenoj. La alta kvalito de la hejtigaj kaj malvarmigaj elementoj (Peltier-elementoj), same kiel la maniero kiel ĉi tiuj estas konektitaj al la bloko, estas la decidaj faktoroj, kiuj determinos la riskon de temperaturdiferencoj konataj kiel la "randa efiko".
Vaporiĝo
La koncentriĝoj de la individuaj reakciaj komponantoj ne ŝanĝiĝu dum la reakcio pro vaporiĝo. Alie, eblas, ke tre malmultePCR-produktopovas esti generita, aŭ tute ne. Tial estas grave minimumigi vaporiĝon certigante sekuran sigelon. En ĉi tiu kazo, la varmigita kovrilo de la termociklilo kaj la sigelo de la ujo funkcias kune. Diversaj sigelaj opcioj estas haveblaj porPCR-platoj (ligilo: Artikolo pri sigelado), per kiu la plej bona sigelo atingiĝas per varmosigelado. Aliaj fermiloj ankaŭ povas esti taŭgaj, kondiĉe ke la kontakta premo de la ciklilkovrilo povas esti adaptita al la elektita sigelo.
Proceza normigo estas efektivigita por protekti precizajn kaj reprodukteblajn rezultojn longtempe. Tio inkluzivas regulan prizorgadon de la ekipaĵo por certigi, ke ĝi ĉiam estas en bona funkcia stato. Ĉiuj konsumaĵoj devas esti konstante altkvalitaj tra ĉiuj produktitaj lotoj, kaj ilia fidinda havebleco devas esti garantiita.
Afiŝtempo: 29-a de novembro 2022