Mae safoni prosesau yn cynnwys eu optimeiddio a'u sefydlu a'u cysoni wedyn, gan ganiatáu perfformiad gorau posibl yn y tymor hir – yn annibynnol ar y defnyddiwr. Mae safoni yn sicrhau canlyniadau o ansawdd uchel, yn ogystal â'u hatgynhyrchadwyedd a'u cymhariaeth.
Nod PCR (clasurol) yw cynhyrchu canlyniad dibynadwy ac atgynhyrchadwy. Ar gyfer rhai cymwysiadau, cynnyrch yCynnyrch PCRhefyd yn berthnasol. Ar gyfer yr adweithiau hyn, rhaid cymryd gofal i sicrhau nad yw samplau'n cael eu peryglu a bod llif gwaith PCR yn aros yn sefydlog. Yn benodol, mae hyn yn golygu lleihau cyflwyno halogiadau a allai arwain at ganlyniadau positif ffug neu negatif ffug neu hyd yn oed atal yr adwaith PCR. Ar ben hynny, dylai'r amodau adwaith fod mor union yr un fath â phosibl ar gyfer pob sampl unigol o fewn rhediad a hefyd fod yn drosglwyddadwy i adweithiau dilynol (o'r un dull). Mae hyn yn cyfeirio at gyfansoddiad yr adweithiau yn ogystal â'r math o reolaeth tymheredd yn y cylchwr. Wrth gwrs, dylid osgoi gwallau defnyddwyr cymaint â phosibl.
Isod, byddwn yn dangos yr heriau a wynebir yn ystod y paratoi a thrwy gydol rhedeg PCR – a'r dulliau o ddatrys problemau sy'n bodoli mewn perthynas ag offerynnau a nwyddau traul a ddefnyddir ar gyfer safoni llif gwaith PCR.
Paratoi adwaith
Mae dosbarthu cydrannau adwaith i mewn i lestri PCR, neu blatiau, yn y drefn honno, yn cynnwys sawl her y mae'n rhaid eu goresgyn:
Amodau adwaith
Mae dosio union a manwl gywir y cydrannau unigol yn hanfodol wrth anelu at yr amodau adwaith mwyaf union posibl. Yn ogystal â thechneg pipetio dda, mae dewis yr offeryn cywir yn hanfodol. Mae cymysgeddau meistr PCR yn aml yn cynnwys sylweddau sy'n cynyddu gludedd neu'n cynhyrchu ewyn. Yn ystod y broses pipetio, mae'r rhain yn arwain at wlychu sylweddol yawgrymiadau piped, gan leihau cywirdeb pipetio. Gall defnyddio systemau dosbarthu uniongyrchol neu bennau pipetio amgen sy'n llai tueddol o wlychu gwella cywirdeb a manylder y broses pipetio.
Halogiadau
Yn ystod y broses ddosbarthu, cynhyrchir aerosolau a all, os caniateir iddynt gyrraedd tu mewn i'r piped, halogi sampl arall yn ystod y cam pipetio nesaf. Gellir atal hyn trwy ddefnyddio pennau hidlo neu systemau dadleoli uniongyrchol.
Nwyddau traul felawgrymiadau, ni ddylai llestri a phlatiau a ddefnyddir yn y llif gwaith PCR gynnwys sylweddau sy'n peryglu'r sampl neu'n ffugio'r canlyniad. Mae'r rhain yn cynnwys DNA, DNases, RNases ac atalyddion PCR, yn ogystal â chydrannau a allai o bosibl ollwng o'r deunydd yn ystod yr adwaith – sylweddau a elwir yn ollyngadwy.
Gwall defnyddiwr
Po fwyaf o samplau sy'n cael eu prosesu, yr uchaf yw'r risg o wallau. Gall ddigwydd yn hawdd bod sampl yn cael ei pipedu i'r llestr anghywir neu'r ffynnon anghywir. Gellir lleihau'r risg hon yn sylweddol trwy farcio'r ffynhonnau yn hawdd eu canfod. Trwy awtomeiddio'r camau dosbarthu, mae'r "ffactor dynol", h.y. gwallau ac amrywiadau sy'n gysylltiedig â'r defnyddiwr, yn cael eu lleihau, gan gynyddu atgynhyrchadwyedd, yn enwedig yn achos cyfrolau adwaith bach. Mae hyn yn gofyn am blatiau o sefydlogrwydd dimensiynol digonol i'w defnyddio mewn gweithfan. Mae codau bar ynghlwm yn darparu darllenadwyedd peiriant ychwanegol, sy'n symleiddio olrhain samplau drwy gydol y broses gyfan.
Rhaglennu'r thermocycler
Gall rhaglennu offeryn fod yn cymryd llawer o amser yn ogystal â bod yn dueddol o wneud gwallau. Mae gwahanol nodweddion cylchredwr thermol PCR yn gweithio gyda'i gilydd i symleiddio'r cam proses hwn ac, yn bwysicaf oll, i'w wneud yn ddiogel:
Mae gweithrediad hawdd a chanllawiau da i ddefnyddwyr yn sail i raglennu effeithlon. Gan adeiladu ar y sylfaen hon, bydd gweinyddu defnyddwyr wedi'i ddiogelu gan gyfrinair yn atal rhaglenni rhywun rhag cael eu newid gan ddefnyddwyr eraill. Os oes sawl cylchredwr (o'r un math) yn cael eu defnyddio, mae'n fuddiol os gellir trosglwyddo rhaglen yn uniongyrchol o un offeryn i'r llall trwy USB neu gysylltedd. Mae meddalwedd gyfrifiadurol yn galluogi gweinyddiaeth ganolog a diogel o raglenni, hawliau defnyddwyr a dogfennau ar gyfrifiadur.
Rhediad PCR
Yn ystod y rhediad, caiff DNA ei fwyhau yn y llestr adwaith, lle dylid rhoi pob sampl dan amodau adwaith cyson, union yr un fath. Mae'r agweddau canlynol yn berthnasol i'r broses:
Rheoli tymheredd
Cywirdeb rhagorol wrth reoli tymheredd a homogenedd y bloc cylchdro yw'r sail ar gyfer cyflyru tymheredd cyfartal pob sampl. Ansawdd uchel yr elfennau gwresogi ac oeri (elfennau peltier), yn ogystal â'r ffordd y maent wedi'u cysylltu â'r bloc, yw'r ffactorau penderfynol a fydd yn pennu'r risg o anghysondebau tymheredd a elwir yn "effaith ymyl".
Anweddiad
Ni ddylai crynodiadau cydrannau unigol yr adwaith newid dros gyfnod yr adwaith oherwydd anweddiad. Fel arall, mae'n bosibl mai ychydig iawnCynnyrch PCRgellir ei gynhyrchu, neu ddim o gwbl. Felly mae'n hanfodol lleihau anweddiad trwy sicrhau sêl ddiogel. Yn yr achos hwn, mae caead cynnes y thermocycler a sêl y llestr yn gweithio law yn llaw. Mae gwahanol opsiynau selio ar gael ar gyferPlatiau PCR (dolen: Erthygl selio), lle cyflawnir y sêl orau trwy selio gwres. Gall cauadau eraill fod yn addas hefyd, cyn belled â bod modd addasu pwysau cyswllt caead y cylchwr i'r sêl a ddewiswyd.
Mae safoni prosesau ar waith er mwyn diogelu canlyniadau cywir ac atgynhyrchadwy yn y tymor hir. Mae hyn yn cynnwys cynnal a chadw'r offer yn rheolaidd i sicrhau ei fod bob amser mewn cyflwr gweithio da. Dylai pob nwyddau traul fod o ansawdd uchel yn gyson ar draws pob swp a gynhyrchir, a rhaid gwarantu eu bod ar gael yn ddibynadwy.
Amser postio: Tach-29-2022