প্রক্রিয়াগুলির মানীকরণের মধ্যে রয়েছে তাদের অপ্টিমাইজেশন এবং পরবর্তী প্রতিষ্ঠা এবং সমন্বয়, যা ব্যবহারকারীর উপর নির্ভর না করে দীর্ঘমেয়াদী সর্বোত্তম কর্মক্ষমতা প্রদান করে। মানীকরণ উচ্চমানের ফলাফল নিশ্চিত করে, সেইসাথে তাদের পুনরুৎপাদনযোগ্যতা এবং তুলনাযোগ্যতাও নিশ্চিত করে।
(ক্লাসিক) পিসিআর-এর লক্ষ্য হল একটি নির্ভরযোগ্য এবং পুনরুৎপাদনযোগ্য ফলাফল তৈরি করা। নির্দিষ্ট কিছু প্রয়োগের জন্য, এর ফলনপিসিআর পণ্যএটিও প্রাসঙ্গিক। এই প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য, নমুনাগুলি যাতে ক্ষতিগ্রস্ত না হয় এবং পিসিআর কর্মপ্রবাহ স্থিতিশীল থাকে সেদিকে অবশ্যই যত্ন নেওয়া উচিত। বিশেষ করে, এটি দূষণের প্রবর্তনকে কমিয়ে আনার জন্য অনুবাদ করে যা মিথ্যা ইতিবাচক বা মিথ্যা নেতিবাচক ফলাফলের দিকে পরিচালিত করতে পারে অথবা এমনকি পিসিআর প্রতিক্রিয়াকে বাধাগ্রস্ত করতে পারে। তদুপরি, প্রতিটি নমুনার জন্য প্রতিক্রিয়ার অবস্থা যতটা সম্ভব অভিন্ন হওয়া উচিত এবং পরবর্তী প্রতিক্রিয়াগুলিতে (একই পদ্ধতিতে) স্থানান্তরযোগ্য হওয়া উচিত। এটি প্রতিক্রিয়াগুলির গঠনের পাশাপাশি সাইক্লারে তাপমাত্রা নিয়ন্ত্রণের ধরণের কথাও বোঝায়। অবশ্যই, ব্যবহারকারীর ত্রুটিগুলি যতটা সম্ভব এড়ানো উচিত।
নিচে, আমরা পিসিআর প্রস্তুতির সময় এবং পুরো প্রক্রিয়া জুড়ে যে চ্যালেঞ্জগুলির মুখোমুখি হতে হয় তা প্রদর্শন করব - এবং পিসিআর কর্মপ্রবাহের মানকীকরণের জন্য ব্যবহৃত যন্ত্র এবং ভোগ্যপণ্যের ক্ষেত্রে বিদ্যমান সমাধানের পদ্ধতিগুলি।
প্রতিক্রিয়া প্রস্তুতি
পিসিআর-জাহাজ বা প্লেটে যথাক্রমে বিক্রিয়া উপাদান বিতরণের ক্ষেত্রে একাধিক চ্যালেঞ্জ রয়েছে যা অতিক্রম করতে হবে:
প্রতিক্রিয়া শর্তাবলী
সম্ভাব্য অভিন্ন প্রতিক্রিয়ার অবস্থার লক্ষ্যে পৃথক উপাদানগুলির সঠিক এবং সুনির্দিষ্ট ডোজ অপরিহার্য। একটি ভাল পাইপটিং কৌশল ছাড়াও, সঠিক সরঞ্জাম নির্বাচন করা অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। পিসিআর মাস্টার-মিক্সগুলিতে প্রায়শই এমন পদার্থ থাকে যা সান্দ্রতা বৃদ্ধি করে বা ফেনা তৈরি করে। পাইপটিং প্রক্রিয়া চলাকালীন, এগুলি উল্লেখযোগ্যভাবে ভেজা হয়ে যায়পাইপেট টিপস, ফলে পাইপেটিং নির্ভুলতা হ্রাস পায়। সরাসরি বিতরণ ব্যবস্থা বা বিকল্প পাইপেট টিপস ব্যবহার করা যা ভিজে যাওয়ার প্রবণতা কম, পাইপেটিং প্রক্রিয়ার নির্ভুলতা এবং নির্ভুলতা উন্নত করতে পারে।
দূষণ
বিতরণ প্রক্রিয়ার সময়, অ্যারোসল তৈরি হয় যা পাইপেটের ভেতরে পৌঁছাতে দেওয়া হলে, পরবর্তী পাইপেটিং ধাপে অন্য নমুনাকে দূষিত করতে পারে। ফিল্টার টিপস বা সরাসরি স্থানচ্যুতি সিস্টেম ব্যবহার করে এটি প্রতিরোধ করা যেতে পারে।
ভোগ্যপণ্য যেমনপরামর্শ, পিসিআর কর্মপ্রবাহে ব্যবহৃত জাহাজ এবং প্লেটগুলিতে এমন পদার্থ থাকা উচিত নয় যা নমুনার সাথে আপস করে বা ফলাফলকে মিথ্যা প্রমাণ করে। এর মধ্যে রয়েছে ডিএনএ, ডিএনএস, আরএনএস এবং পিসিআর ইনহিবিটর, সেইসাথে এমন উপাদান যা বিক্রিয়ার সময় উপাদান থেকে সম্ভাব্যভাবে বেরিয়ে যেতে পারে - লিচেবল নামে পরিচিত পদার্থ।
ব্যবহারকারীর ত্রুটি
যত বেশি নমুনা প্রক্রিয়াজাত করা হবে, ত্রুটির ঝুঁকি তত বেশি হবে। সহজেই একটি নমুনা ভুল পাত্রে বা ভুল কূপে পাইপেট করা হতে পারে। কূপগুলির সহজে স্পষ্ট চিহ্নিতকরণের মাধ্যমে এই ঝুঁকি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করা যেতে পারে। বিতরণ পদক্ষেপগুলির স্বয়ংক্রিয়করণের মাধ্যমে, "মানব ফ্যাক্টর", অর্থাৎ ত্রুটি এবং ব্যবহারকারী-সম্পর্কিত বৈচিত্র্য, হ্রাস করা হয়, ফলে পুনরুৎপাদনযোগ্যতা বৃদ্ধি পায়, বিশেষ করে ছোট প্রতিক্রিয়া আয়তনের ক্ষেত্রে। এর জন্য একটি ওয়ার্কস্টেশনে পর্যাপ্ত মাত্রিক স্থিতিশীলতার প্লেট ব্যবহার করা প্রয়োজন। সংযুক্ত বারকোডগুলি অতিরিক্ত মেশিন-পঠনযোগ্যতা প্রদান করে, যা সমগ্র প্রক্রিয়া জুড়ে নমুনা ট্র্যাকিংকে সহজ করে তোলে।
থার্মোসাইক্লারের প্রোগ্রামিং
একটি যন্ত্রের প্রোগ্রামিং সময়সাপেক্ষ এবং ত্রুটি-প্রবণও হতে পারে। বিভিন্ন পিসিআর থার্মাল সাইক্লার বৈশিষ্ট্যগুলি এই প্রক্রিয়াটি সহজ করার জন্য এবং সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণভাবে এটিকে নিরাপদ করার জন্য একসাথে কাজ করে:
সহজ পরিচালনা এবং ব্যবহারকারীর ভালো নির্দেশনা হলো দক্ষ প্রোগ্রামিংয়ের ভিত্তি। এই ভিত্তির উপর ভিত্তি করে, পাসওয়ার্ড-সুরক্ষিত ব্যবহারকারী প্রশাসন অন্য ব্যবহারকারীদের দ্বারা নিজস্ব প্রোগ্রামগুলিকে পরিবর্তন করা থেকে বিরত রাখবে। যদি একাধিক সাইক্লার (একই ধরণের) ব্যবহার করা হয়, তাহলে USB বা সংযোগের মাধ্যমে একটি প্রোগ্রাম সরাসরি এক যন্ত্র থেকে অন্য যন্ত্রে স্থানান্তর করা উপকারী। কম্পিউটার সফ্টওয়্যার একটি কম্পিউটারে প্রোগ্রাম, ব্যবহারকারীর অধিকার এবং নথিগুলির কেন্দ্রীয় এবং নিরাপদ প্রশাসন সক্ষম করে।
পিসিআর রান
দৌড়ের সময়, বিক্রিয়া পাত্রে ডিএনএ প্রশস্ত করা হয়, যেখানে প্রতিটি নমুনাকে অভিন্ন, সামঞ্জস্যপূর্ণ বিক্রিয়া অবস্থার অধীনে রাখা উচিত। প্রক্রিয়াটির জন্য নিম্নলিখিত দিকগুলি প্রাসঙ্গিক:
তাপমাত্রা নিয়ন্ত্রণ
তাপমাত্রা নিয়ন্ত্রণে চমৎকার নির্ভুলতা এবং সাইক্লার ব্লকের একজাততা হল সমস্ত নমুনার সমান তাপমাত্রা কন্ডিশনিংয়ের ভিত্তি। গরম এবং শীতলকারী উপাদানগুলির (পেল্টিয়ার উপাদান) উচ্চ মানের, সেইসাথে ব্লকের সাথে এগুলি কীভাবে সংযুক্ত করা হয়, তা হল "প্রান্ত প্রভাব" নামে পরিচিত তাপমাত্রার অসঙ্গতির ঝুঁকি নির্ধারণকারী নির্ধারক কারণ।
বাষ্পীভবন
বাষ্পীভবনের কারণে বিক্রিয়ার সময়কালে পৃথক বিক্রিয়ার উপাদানগুলির ঘনত্বের পরিবর্তন হওয়া উচিত নয়। অন্যথায়, এটি সম্ভব যে খুব কমপিসিআর পণ্যউৎপন্ন হতে পারে, অথবা একেবারেই না। তাই একটি নিরাপদ সীল নিশ্চিত করে বাষ্পীভবন কমানো অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। এই ক্ষেত্রে, থার্মোসাইক্লারের উত্তপ্ত ঢাকনা এবং জাহাজের সীল একসাথে কাজ করে। এর জন্য বিভিন্ন সিলিং বিকল্প উপলব্ধপিসিআর প্লেট (লিঙ্ক: সিলিং নিবন্ধ), যার মাধ্যমে তাপ সিলিংয়ের মাধ্যমে সর্বোত্তম সিল অর্জন করা হয়। অন্যান্য ক্লোজারগুলিও উপযুক্ত হতে পারে, যতক্ষণ না সাইক্লার ঢাকনার যোগাযোগের চাপ নির্বাচিত সিলের সাথে সামঞ্জস্য করা যায়।
দীর্ঘমেয়াদে সঠিক এবং পুনরুৎপাদনযোগ্য ফলাফল সুরক্ষিত করার জন্য প্রক্রিয়ার মানদণ্ড নির্ধারণ করা হচ্ছে। এর মধ্যে রয়েছে সরঞ্জামের নিয়মিত রক্ষণাবেক্ষণ যাতে এটি সর্বদা ভাল কাজের অবস্থায় থাকে। উৎপাদিত সমস্ত লটে সমস্ত ভোগ্যপণ্য ধারাবাহিকভাবে উচ্চ মানের হওয়া উচিত এবং তাদের নির্ভরযোগ্য প্রাপ্যতা নিশ্চিত করা উচিত।
পোস্টের সময়: নভেম্বর-২৯-২০২২