Għal reazzjonijiet ta' amplifikazzjoni b'suċċess, huwa meħtieġ li l-komponenti tar-reazzjoni individwali jkunu preżenti fil-konċentrazzjoni korretta f'kull preparazzjoni.Barra minn hekk, huwa importanti li ma sseħħ l-ebda kontaminazzjoni.
Speċjalment meta jridu jiġu stabbiliti ħafna reazzjonijiet, ġie stabbilit li tiġi ppreparata l-hekk imsejħa taħlita prinċipali minflok kull reaġent jitqiegħed b'pipetta separatament f'kull reċipjent.Taħlitiet ikkonfigurati minn qabel huma disponibbli kummerċjalment, li fihom huma miżjuda biss komponenti speċifiċi għall-kampjun (primer) u ilma.Inkella, it-taħlita prinċipali tista 'tiġi ppreparata minnek innifsek.Fiż-żewġ varjanti, it-taħlita titqassam għal kull reċipjent tal-PCR mingħajr mudell u l-kampjun tad-DNA individwali huwa miżjud separatament fl-aħħar.
L-użu ta 'taħlita prinċipali għandu diversi vantaġġi: L-ewwel, in-numru ta' passi ta 'pipettar wieħed jitnaqqas.B'dan il-mod, kemm ir-riskju ta 'żbalji tal-utent waqt il-pipetta kif ukoll ir-riskju ta' kontaminazzjoni huma minimizzati u, ovvjament, il-ħin jiġi ffrankat.Fil-prinċipju, l-eżattezza tal-pipettar hija wkoll ogħla, peress li volumi akbar huma ddożati.Dan huwa faċli biex jinftiehem meta tiċċekkja d-dejta teknika tal-pipetti: Iktar ma jkun żgħir il-volum dożat, iktar ikun għoli d-devjazzjonijiet.Il-fatt li l-preparazzjonijiet kollha jiġu mill-istess bastiment għandu effett pożittiv fuq l-omoġeneità (jekk imħallat sew).Dan itejjeb ukoll ir-riproduċibbiltà tal-esperimenti.
Meta tħejji t-taħlita prinċipali, għandu jiżdied mill-inqas 10 % volum żejjed (eż. jekk ikunu meħtieġa 10 preparazzjonijiet, ikkalkula fuq il-bażi ta' 11), sabiex anke l-aħħar reċipjent jimtela sew.B'dan il-mod, ineżattezzi (ħfief) tal-pipettar, u l-effett tat-telf tal-kampjun meta jiġu dożati soluzzjonijiet li fihom id-deterġent jistgħu jiġu kkumpensati.Id-deterġenti jinsabu f'soluzzjonijiet ta 'enżimi bħal polimerasi u taħlitiet prinċipali, li jikkawżaw formazzjoni ta' ragħwa u residwi fuq il-wiċċ ta 'ġewwa ta' normaliponot tal-pipetta.
Skont l-applikazzjoni u t-tip ta’ likwidu li jrid jitqassam, għandha tintgħażel it-teknika tal-pipettar korretta (1) u jintgħażel it-tagħmir xieraq.Għal soluzzjonijiet li fihom deterġenti, sistema ta 'spostament dirett jew l-hekk imsejħa ponot tal-pipetti "ritenzjoni baxxa" bħala alternattiva għall-pipetti tal-kuxxin tal-arja huma rakkomandati.L-effett ta 'ACE PIPETTA pontahija bbażata fuq wiċċ partikolarment idrofobiku.Likwidi li fihom deterġenti ma jħallux film ta 'fdal fuq ġewwa u barra, sabiex it-telf tas-soluzzjoni jkun jista' jiġi minimizzat.
Minbarra d-dożaġġ eżatt tal-komponenti kollha, huwa importanti wkoll li ma sseħħ l-ebda kontaminazzjoni tal-preparazzjonijiet.Mhuwiex biżżejjed li tuża konsumabbli ta 'purità għolja, minħabba li l-proċess ta' pipetta f'pipetta tal-kuxxin tal-arja jista 'jipproduċi aerosols li jibqgħu fil-pipetta.Id-DNA li jista' jkun hemm fl-ajrusol jista' jiġi trasferit minn kampjun għall-ieħor fil-pass ta' pipettar li ġej u għalhekk iwassal għal kontaminazzjoni.Is-sistemi ta' spostament dirett imsemmija hawn fuq jistgħu wkoll jimminimizzaw dan ir-riskju.Għall-pipetti tal-kuxxin tal-arja jagħmel sens li tuża ponot tal-filtri biex tipproteġi l-kon tal-pipetta billi żżomm it-titjir, l-aerosols u l-bijomolekuli.
Ħin tal-post: Diċ-06-2022