پی سی آر مکسچر کو پائپ کرتے وقت کن چیزوں پر غور کرنا چاہیے؟

کامیاب امپلیفیکیشن ری ایکشنز کے لیے ضروری ہے کہ ہر ایک تیاری میں انفرادی رد عمل کے اجزاء صحیح ارتکاز میں موجود ہوں۔اس کے علاوہ، یہ ضروری ہے کہ کوئی آلودگی نہ ہو۔

خاص طور پر جب بہت سے رد عمل کو ترتیب دینا ہوتا ہے، یہ ہر برتن میں ہر ریجنٹ کو الگ الگ پائپ کرنے کے بجائے ایک نام نہاد ماسٹر مکس تیار کرنے کے لئے قائم کیا گیا ہے۔پہلے سے تشکیل شدہ مکس تجارتی طور پر دستیاب ہیں، جس میں صرف نمونے کے لیے مخصوص اجزاء (پرائمر) اور پانی شامل کیے جاتے ہیں۔متبادل طور پر، ماسٹر مکس خود تیار کیا جا سکتا ہے۔دونوں قسموں میں، مرکب کو بغیر کسی ٹیمپلیٹ کے ہر پی سی آر برتن میں تقسیم کیا جاتا ہے اور آخر میں انفرادی ڈی این اے کا نمونہ الگ سے شامل کیا جاتا ہے۔

ماسٹر مکس استعمال کرنے کے کئی فوائد ہیں: سب سے پہلے، سنگل پائپنگ کے مراحل کی تعداد کم ہو جاتی ہے۔اس طرح، پائپنگ کے دوران صارف کی غلطیوں کا خطرہ اور آلودگی کا خطرہ دونوں کم ہو جاتے ہیں اور یقیناً وقت کی بچت ہوتی ہے۔اصولی طور پر، پائپنگ کی درستگی بھی زیادہ ہوتی ہے، کیونکہ بڑی مقدار میں خوراک کی جاتی ہے۔پائپیٹس کے تکنیکی ڈیٹا کو چیک کرتے وقت یہ سمجھنا آسان ہے: خوراک کا حجم جتنا چھوٹا ہوگا، انحرافات اتنے ہی زیادہ ہوسکتے ہیں۔حقیقت یہ ہے کہ تمام تیاریاں ایک ہی برتن سے آتی ہیں یکسانیت پر مثبت اثر پڑتا ہے (اگر اچھی طرح سے ملایا جائے)۔یہ تجربات کی تولیدی صلاحیت کو بھی بہتر بناتا ہے۔

ماسٹر مکس تیار کرتے وقت، کم از کم 10% اضافی حجم شامل کیا جائے (مثلاً اگر 10 تیاریوں کی ضرورت ہو تو 11 کی بنیاد پر حساب لگائیں)، تاکہ آخری برتن بھی ٹھیک سے بھر جائے۔اس طرح، (معمولی) پائپنگ کی غلطیاں، اور ڈٹرجنٹ پر مشتمل حل کی خوراک کرتے وقت نمونے کے نقصان کے اثر کی تلافی کی جا سکتی ہے۔ڈٹرجنٹ انزائم سلوشنز جیسے پولیمریزس اور ماسٹر مکسز میں موجود ہوتے ہیں، جس سے عام کی اندرونی سطح پر جھاگ کی تشکیل اور باقیات پیدا ہوتے ہیں۔پائپیٹ کی تجاویز.

درخواست اور تقسیم کیے جانے والے مائع کی قسم پر منحصر ہے، پائپٹنگ کی صحیح تکنیک (1) کا انتخاب کیا جانا چاہیے اور مناسب آلات کا انتخاب کیا جانا چاہیے۔صابن پر مشتمل حل کے لیے، ایک براہ راست نقل مکانی کا نظام یا نام نہاد "کم برقرار رکھنے والے" پپیٹ ٹپس کو ایئر کشن پائپیٹ کے متبادل کے طور پر تجویز کیا جاتا ہے۔کا اثرACE PIPETTE ٹپخاص طور پر ہائیڈروفوبک سطح پر مبنی ہے۔ڈٹرجنٹ پر مشتمل مائعات اندر اور باہر ایک باقی فلم نہیں چھوڑتے ہیں، تاکہ محلول کے نقصان کو کم سے کم کیا جا سکے۔

تمام اجزاء کی صحیح خوراک کے علاوہ، یہ بھی ضروری ہے کہ تیاریوں میں کوئی آلودگی نہ ہو۔اعلیٰ پاکیزگی کی اشیا استعمال کرنا کافی نہیں ہے، کیونکہ ایئر کشن پپیٹ میں پائپٹنگ کے عمل سے ایسے ایروسول پیدا ہو سکتے ہیں جو پپیٹ میں رہتے ہیں۔ایروسول میں موجود ڈی این اے کو مندرجہ ذیل پائپٹنگ مرحلے میں ایک نمونے سے دوسرے نمونے میں منتقل کیا جا سکتا ہے اور اس طرح آلودگی کا باعث بنتا ہے۔مذکورہ بالا راست نقل مکانی کے نظام بھی اس خطرے کو کم کر سکتے ہیں۔ایئر کشن پائپیٹس کے لیے یہ سمجھ میں آتا ہے کہ فلٹر ٹپس استعمال کریں تاکہ سپلیشز، ایروسولز اور بائیو مالیکیولز کو برقرار رکھ کر پپیٹ شنک کی حفاظت کی جا سکے۔