เพื่อให้ปฏิกิริยาการขยายผลประสบความสำเร็จ ส่วนประกอบของปฏิกิริยาแต่ละส่วนจะต้องมีความเข้มข้นที่ถูกต้องในการเตรียมแต่ละครั้งนอกจากนี้สิ่งสำคัญคือต้องไม่มีการปนเปื้อนเกิดขึ้น
โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อต้องตั้งค่าปฏิกิริยาหลายอย่าง ได้มีการจัดตั้งขึ้นเพื่อเตรียมสิ่งที่เรียกว่าส่วนผสมหลัก แทนการปิเปตแต่ละรีเอเจนต์แยกกันลงในภาชนะแต่ละใบส่วนผสมที่กำหนดค่าไว้ล่วงหน้ามีจำหน่ายในท้องตลาด โดยเติมเฉพาะส่วนประกอบเฉพาะตัวอย่าง (ไพรเมอร์) และน้ำเท่านั้นหรือคุณสามารถเตรียมส่วนผสมหลักได้ด้วยตัวเองในทั้งสองรูปแบบ ของผสมจะถูกกระจายไปยังภาชนะ PCR แต่ละใบโดยไม่มีเทมเพลต และตัวอย่าง DNA แต่ละรายการจะถูกเพิ่มแยกกันในตอนท้าย
การใช้ส่วนผสมหลักมีข้อดีหลายประการ ประการแรก จำนวนขั้นตอนการปิเปตเดี่ยวจะลดลงด้วยวิธีนี้ ทั้งความเสี่ยงต่อข้อผิดพลาดของผู้ใช้ในระหว่างการปิเปตและความเสี่ยงของการปนเปื้อนจะลดลง และแน่นอนว่าประหยัดเวลาได้ด้วยตามหลักการแล้ว ความแม่นยำในการปิเปตก็จะสูงขึ้นเช่นกัน เนื่องจากมีปริมาณที่มากขึ้นข้อมูลนี้ง่ายต่อการเข้าใจเมื่อตรวจสอบข้อมูลทางเทคนิคของปิเปต: ยิ่งปริมาตรที่ให้ยาน้อยเท่าไร ความเบี่ยงเบนก็จะยิ่งสูงขึ้นเท่านั้นความจริงที่ว่าการเตรียมการทั้งหมดมาจากภาชนะเดียวกันมีผลดีต่อความเป็นเนื้อเดียวกัน (หากผสมกันดี)นอกจากนี้ยังช่วยปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำของการทดลองอีกด้วย
เมื่อเตรียมส่วนผสมหลัก ควรเพิ่มปริมาตรพิเศษอย่างน้อย 10 % (เช่น หากจำเป็นต้องเตรียม 10 รายการ ให้คำนวณตามเกณฑ์ 11) เพื่อให้สามารถเติมภาชนะสุดท้ายได้อย่างเหมาะสมด้วยวิธีนี้ สามารถชดเชยความไม่ถูกต้องในการปิเปต (เล็กน้อย) และผลกระทบของการสูญเสียตัวอย่างเมื่อจ่ายสารละลายที่ประกอบด้วยผงซักฟอกได้ผงซักฟอกมีอยู่ในสารละลายของเอนไซม์ เช่น โพลีเมอเรส และมาสเตอร์มิกซ์ ทำให้เกิดฟองและตกค้างบนพื้นผิวด้านในตามปกติเคล็ดลับปิเปต.
ควรเลือกเทคนิคการปิเปตที่ถูกต้อง (1) และเลือกอุปกรณ์ที่เหมาะสม ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับการใช้งานและประเภทของของเหลวที่จะจ่ายสำหรับสารละลายที่มีสารซักฟอก แนะนำให้ใช้ระบบการแทนที่โดยตรงหรือที่เรียกว่าทิปปิเปต "การกักเก็บต่ำ" เพื่อเป็นทางเลือกแทนปิเปตแบบเบาะลมผลกระทบของทิป ACE PIPETTEขึ้นอยู่กับพื้นผิวที่ไม่ชอบน้ำโดยเฉพาะของเหลวที่มีผงซักฟอกจะไม่ทิ้งฟิล์มตกค้างทั้งภายในและภายนอก เพื่อลดการสูญเสียสารละลายให้เหลือน้อยที่สุด
นอกจากการจ่ายส่วนประกอบทั้งหมดอย่างถูกต้องแล้ว สิ่งสำคัญอีกประการหนึ่งคือต้องไม่มีการปนเปื้อนในการเตรียมการเกิดขึ้นการใช้วัสดุสิ้นเปลืองที่มีความบริสุทธิ์สูงนั้นไม่เพียงพอ เนื่องจากกระบวนการปิเปตในปิเปตแบบกันกระแทกสามารถผลิตละอองลอยที่ค้างอยู่ในปิเปตได้DNA ที่อาจมีอยู่ในละอองลอยสามารถถ่ายโอนจากตัวอย่างหนึ่งไปยังอีกตัวอย่างหนึ่งได้ในขั้นตอนการปิเปตต่อไปนี้ และนำไปสู่การปนเปื้อนระบบการเคลื่อนที่โดยตรงที่กล่าวถึงข้างต้นอาจลดความเสี่ยงนี้ได้เช่นกันสำหรับปิเปตแบบเบาะลม ควรใช้ทิปตัวกรองเพื่อปกป้องกรวยปิเปตโดยกักเก็บการกระเด็น ละอองลอย และชีวโมเลกุล
เวลาโพสต์: Dec-06-2022