Uğurlu gücləndirmə reaksiyaları üçün fərdi reaksiya komponentlərinin hər bir preparatda düzgün konsentrasiyada olması lazımdır.Bundan əlavə, heç bir çirklənmənin baş verməməsi vacibdir.
Xüsusilə bir çox reaksiyaların qurulması lazım olduqda, hər bir reagenti ayrı-ayrılıqda hər qaba pipetləmək əvəzinə, əsas qarışığın hazırlanması müəyyən edilmişdir.Əvvəlcədən konfiqurasiya edilmiş qarışıqlar ticari olaraq mövcuddur, burada yalnız nümunə üçün xüsusi komponentlər (primer) və su əlavə edilir.Alternativ olaraq, master mix özünüz hazırlana bilər.Hər iki variantda qarışıq şablon olmadan hər bir PCR qabına paylanır və sonunda fərdi DNT nümunəsi ayrıca əlavə edilir.
Əsas qarışığın istifadəsi bir sıra üstünlüklərə malikdir: Birincisi, tək pipetləmə addımlarının sayı azalır.Bu yolla həm pipetləmə zamanı istifadəçi xətaları riski, həm də çirklənmə riski minimuma endirilir və təbii ki, vaxta qənaət edilir.Prinsipcə, pipetləmə dəqiqliyi də daha yüksəkdir, çünki daha böyük həcmlər dozalanır.Pipetlərin texniki məlumatlarını yoxlayarkən bunu başa düşmək asandır: dozanın həcmi nə qədər kiçik olsa, sapmalar bir o qədər yüksək ola bilər.Bütün preparatların eyni qabdan gəlməsi homojenliyə (yaxşı qarışdırıldıqda) müsbət təsir göstərir.Bu da təcrübələrin təkrar istehsalını yaxşılaşdırır.
Əsas qarışığı hazırlayarkən ən azı 10% əlavə həcm əlavə edilməlidir (məsələn, 10 preparat tələb olunarsa, 11 əsasında hesablayın), belə ki, hətta sonuncu qab düzgün doldurulsun.Bu yolla (cüzi) pipetləmə qeyri-dəqiqlikləri və yuyucu tərkibli məhlulların dozalanması zamanı nümunə itkisinin təsiri kompensasiya edilə bilər.Yuyucu vasitələr polimerazlar və əsas qarışıqlar kimi ferment məhlullarının tərkibində olur və normal səthdə köpük əmələ gəlməsinə və qalıqlara səbəb olur.pipet ucları.
Tətbiqdən və paylanacaq mayenin növündən asılı olaraq düzgün pipetləmə texnikası (1) və müvafiq avadanlıq seçilməlidir.Tərkibində yuyucu vasitələr olan məhlullar üçün hava yastıqlı pipetlərə alternativ olaraq birbaşa yerdəyişmə sistemi və ya “aşağı tutma” adlanan pipet ucları tövsiyə olunur.-nin təsiriACE PİPET ucuxüsusilə hidrofobik səthə əsaslanır.Tərkibində yuyucu vasitələr olan mayelər içəridə və xaricdə qalıq filmi qoymur, beləliklə məhlul itkisi minimuma endirilir.
Bütün komponentlərin dəqiq dozası ilə yanaşı, preparatların heç bir çirklənməsinin olmaması da vacibdir.Yüksək təmizliyə malik istehlak materiallarından istifadə etmək kifayət deyil, çünki hava yastığı pipetindəki pipetləmə prosesi pipetdə qalan aerozollar yarada bilər.Aerozolun tərkibində ola biləcək DNT növbəti pipetləmə mərhələsində bir nümunədən digərinə ötürülə bilər və beləliklə, çirklənməyə səbəb ola bilər.Yuxarıda qeyd olunan birbaşa yerdəyişmə sistemləri də bu riski minimuma endirə bilər.Hava yastıqlı pipetlər üçün sıçrayışları, aerozolları və biomolekulları saxlamaqla pipet konusunu qorumaq üçün filtr uclarından istifadə etmək məna kəsb edir.
Göndərmə vaxtı: 06 dekabr 2022-ci il