A sikeres amplifikációs reakciókhoz szükséges, hogy az egyes reakciókomponensek minden készítményben a megfelelő koncentrációban legyenek jelen.Ezenkívül fontos, hogy ne történjen szennyeződés.
Különösen akkor, ha sok reakciót kell beállítani, úgy nevezett mesterkeveréket kell készíteni ahelyett, hogy minden reagenst külön-külön pipettáznának minden egyes edénybe.Kereskedelmi forgalomban kaphatók előre konfigurált keverékek, amelyekbe csak mintaspecifikus komponenseket (primer) és vizet adnak hozzá.Alternatív megoldásként a mesterkeveréket saját maga is elkészítheti.Mindkét változatban a keveréket mindegyik PCR-edénybe templát nélkül osztják szét, és a végén külön adják hozzá az egyedi DNS-mintát.
A mesterkeverék használata számos előnnyel jár: Először is, csökken az egyes pipettázási lépések száma.Ily módon mind a pipettázás során bekövetkező felhasználói hibák, mind a szennyeződés kockázata minimálisra csökken, és természetesen időt takarít meg.Elvileg a pipettázási pontosság is nagyobb, mivel nagyobb mennyiségeket adagolnak.Ez könnyen érthető a pipetták műszaki adatainak ellenőrzésekor: Minél kisebb az adagolt térfogat, annál nagyobbak lehetnek az eltérések.Az a tény, hogy minden készítmény ugyanabból az edényből származik, pozitív hatással van a homogenitásra (ha jól keverjük össze).Ez a kísérletek reprodukálhatóságát is javítja.
A mesterkeverék elkészítésekor legalább 10 % extra térfogatot kell hozzáadni (pl. ha 10 készítményre van szükség, akkor 11 alapján számoljunk), hogy az utolsó edény is megfelelően megteljen.Ezzel kompenzálható a (kis) pipettázási pontatlanság és a mintaveszteség hatása a mosószer tartalmú oldatok adagolásakor.A mosószereket enzimoldatok, például polimerázok és mesterkeverékek tartalmazzák, ami habképződést és maradványokat okoz a normál belső felületén.pipettahegyek.
Az alkalmazástól és az adagolandó folyadék típusától függően a megfelelő pipettázási technikát (1) és a megfelelő felszerelést kell kiválasztani.Mosószereket tartalmazó oldatokhoz a légpárnás pipetták alternatívájaként a közvetlen kiszorításos rendszer vagy az úgynevezett „alacsony visszatartású” pipettahegyek javasoltak.A hatásaACE PIPETTA hegykülönösen hidrofób felületen alapul.A mosószert tartalmazó folyadékok nem hagynak maradék filmet sem belül, sem kívül, így minimalizálható az oldatveszteség.
Az összes komponens pontos adagolása mellett az is fontos, hogy a készítmények ne szennyeződjenek.Nem elegendő a nagy tisztaságú fogyóeszközök használata, mert a légpárnás pipettában történő pipettázás során aeroszolok keletkezhetnek, amelyek a pipettában maradnak.Az esetlegesen az aeroszolban lévő DNS a következő pipettázási lépésben átvihető egyik mintából a másikba, és így szennyeződéshez vezethet.A fent említett közvetlen eltolási rendszerek szintén minimalizálhatják ezt a kockázatot.Légpárnás pipettáknál célszerű szűrőhegyeket használni a pipettakúp védelmére a kifröccsenő folyadékok, aeroszolok és biomolekulák visszatartásával.
Feladás időpontja: 2022. december 06