Para reações de amplificação bem-sucedidas, é necessário que os componentes individuais da reação estejam presentes na concentração correta em cada preparação.Além disso, é importante que não ocorra contaminação.
Especialmente quando muitas reações têm que ser preparadas, foi estabelecido preparar uma chamada mistura mestre em vez de pipetar cada reagente separadamente em cada recipiente.Misturas pré-configuradas estão disponíveis comercialmente, nas quais são adicionados apenas componentes específicos da amostra (primer) e água.Alternativamente, o master mix pode ser preparado por você mesmo.Em ambas as variantes, a mistura é distribuída para cada recipiente de PCR sem molde e a amostra de DNA individual é adicionada separadamente no final.
Usar uma master mix tem diversas vantagens: Primeiro, o número de etapas de pipetagem únicas é reduzido.Desta forma, tanto o risco de erros do utilizador durante a pipetagem como o risco de contaminação são minimizados e, claro, poupa-se tempo.Em princípio, a precisão da pipetagem também é maior, uma vez que são dosados volumes maiores.Isto é fácil de entender ao verificar os dados técnicos das pipetas: Quanto menor o volume dosado, maiores podem ser os desvios.O facto de todas as preparações provirem do mesmo recipiente tem um efeito positivo na homogeneidade (se bem misturadas).Isso também melhora a reprodutibilidade dos experimentos.
Ao preparar a mistura principal, deve-se adicionar pelo menos 10% de volume extra (por exemplo, se forem necessárias 10 preparações, calcule com base em 11), para que até mesmo o último recipiente seja preenchido adequadamente.Desta forma, (ligeiras) imprecisões de pipetagem e o efeito da perda de amostra ao dosar soluções contendo detergente podem ser compensados.Os detergentes estão contidos em soluções enzimáticas, como polimerases e master mixes, causando formação de espuma e resíduos na superfície interna de detergentes normais.pontas de pipeta.
Dependendo da aplicação e do tipo de líquido a ser dispensado, deverá ser escolhida a técnica de pipetagem correta (1) e selecionado o equipamento apropriado.Para soluções contendo detergentes, recomenda-se um sistema de deslocamento direto ou as chamadas pontas de pipeta de “baixa retenção” como alternativa às pipetas com colchão de ar.O efeito dePonta ACE PIPETTEbaseia-se numa superfície particularmente hidrofóbica.Os líquidos que contêm detergentes não deixam película residual no interior e no exterior, pelo que a perda de solução pode ser minimizada.
Além da dosagem exata de todos os componentes, também é importante que não ocorra contaminação das preparações.Não é suficiente utilizar consumíveis de alta pureza, pois o processo de pipetagem em uma pipeta com almofada de ar pode produzir aerossóis que permanecem na pipeta.O DNA que pode estar contido no aerossol pode ser transferido de uma amostra para outra na etapa seguinte de pipetagem e, assim, levar à contaminação.Os sistemas de deslocamento direto mencionados acima também podem minimizar este risco.Para pipetas com almofada de ar, faz sentido usar pontas com filtro para proteger o cone da pipeta, retendo respingos, aerossóis e biomoléculas.
Horário da postagem: 06/12/2022