Hvað ætti að hafa í huga þegar PCR blöndur eru lagðar með pípettum?

Fyrir árangursrík mögnunarhvörf er nauðsynlegt að einstakir hvarfefnisþættir séu til staðar í réttum styrk í hverri blöndu.Að auki er mikilvægt að engin mengun eigi sér stað.

Sérstaklega þegar setja þarf upp mörg hvarf hefur verið komið á að útbúa svokallaða mastermix í stað þess að pípa hvert hvarfefni fyrir sig í hvert ílát.Forstilltar blöndur eru fáanlegar í verslun, þar sem aðeins sýnissértækum hlutum (grunnur) og vatni er bætt við.Að öðrum kosti er hægt að útbúa masterblönduna sjálfur.Í báðum afbrigðum er blöndunni dreift í hvert PCR ílát án sniðmáts og einstöku DNA sýni er bætt við sérstaklega í lokin.

Notkun masterblöndu hefur nokkra kosti: Í fyrsta lagi er fjöldi stökum píptuþrepum fækkað.Þannig er bæði hætta á mistökum notenda við píptun og hættu á mengun lágmarkað og að sjálfsögðu sparast tími.Í grundvallaratriðum er nákvæmni píptingarinnar einnig meiri, þar sem stærra magn er skammtað.Þetta er auðvelt að skilja þegar tæknileg gögn um pípettur eru skoðuð: Því minni sem skammturinn er, því meiri geta frávikin verið.Sú staðreynd að allar efnablöndur koma úr sama íláti hefur jákvæð áhrif á einsleitni (ef vel blandað).Þetta bætir einnig endurgerðanleika tilraunanna.

Þegar aðalblandan er útbúin skal bæta við að minnsta kosti 10% aukarúmmáli (td ef 10 undirbúningar eru nauðsynlegar, reiknaðu út á grundvelli 11), þannig að jafnvel síðasta ílátið fylltist rétt.Þannig er hægt að bæta (smá) ónákvæmni í píptun og áhrif sýnistaps við skömmtun á lausnum sem innihalda þvottaefni.Þvottaefni eru í ensímlausnum eins og pólýmerasum og masterblöndum, sem veldur froðumyndun og leifum á innra yfirborði eðlilegrapípettuábendingar.

Það fer eftir notkun og gerð vökvans sem á að skammta, velja rétta píptutækni (1) og velja viðeigandi búnað.Fyrir lausnir sem innihalda þvottaefni er mælt með beinu tilfærslukerfi eða svokölluðum „low retention“ pípettuoddum sem valkostur fyrir loftpúðapípettur.Áhrifin afACE PIPETTU þjórféer byggt á sérstaklega vatnsfælinum yfirborði.Vökvar sem innihalda þvottaefni skilja ekki eftir sig leifar að innan sem utan, þannig að hægt sé að lágmarka tap á lausn.

Fyrir utan nákvæma skömmtun allra efnisþátta er einnig mikilvægt að engin mengun verði á efnablöndunum.Það er ekki nóg að nota rekstrarvörur af miklum hreinleika, því pípettunarferlið í loftpúðapípettu getur framleitt úða sem verða eftir í pípettunni.DNA sem kann að vera í úðanum er hægt að flytja úr einu sýni yfir í það næsta í eftirfarandi pípulagningarþrepi og þannig leitt til mengunar.Beinu tilfærslukerfin sem nefnd eru hér að ofan geta einnig lágmarkað þessa áhættu.Fyrir loftpúðapípettur er skynsamlegt að nota síuspár til að vernda pípettukeiluna með því að halda eftir skvettum, úðabrúsum og lífsameindum.