Для успешных реакций амплификации необходимо, чтобы отдельные компоненты реакции присутствовали в правильной концентрации в каждом препарате.Кроме того, важно, чтобы не произошло никакого загрязнения.
Особенно в тех случаях, когда необходимо организовать множество реакций, принято готовить так называемую мастер-микс вместо того, чтобы пипетировать каждый реагент отдельно в каждый сосуд.В продаже имеются заранее подготовленные смеси, в которые добавляются только компоненты, предназначенные для конкретного образца (праймер) и вода.Альтернативно, мастер-микс можно приготовить самостоятельно.В обоих вариантах смесь распределяется в каждый ПЦР-сосуд без матрицы, а в конце отдельно добавляется индивидуальный образец ДНК.
Использование мастер-микса имеет ряд преимуществ: во-первых, сокращается количество отдельных этапов пипетирования.Таким образом, сводится к минимуму как риск ошибок пользователя во время дозирования, так и риск загрязнения, и, конечно же, экономится время.В принципе, точность пипетирования также выше, поскольку дозируются большие объемы.Это легко понять при проверке технических данных пипеток: чем меньше дозируемый объем, тем выше могут быть отклонения.Тот факт, что все препараты происходят из одного сосуда, положительно влияет на однородность (если хорошо перемешать).Это также улучшает воспроизводимость экспериментов.
При приготовлении мастер-микса следует добавить как минимум 10 % дополнительного объема (например, если требуется 10 приготовлений, рассчитывайте на основе 11), чтобы даже последний сосуд был заполнен должным образом.Таким образом можно компенсировать (небольшие) неточности пипетирования и потери проб при дозировании растворов, содержащих детергенты.Моющие средства содержатся в растворах ферментов, таких как полимеразы и мастер-миксы, вызывая образование пены и остатков на внутренней поверхности обычных стиральных машин.наконечники для пипеток.
В зависимости от применения и типа дозируемой жидкости следует выбрать правильную технику пипетирования (1) и соответствующее оборудование.Для растворов, содержащих детергенты, рекомендуется использовать систему прямого вытеснения или наконечники с так называемым «низким удерживанием» в качестве альтернативы пипеткам с воздушной подушкой.ЭффектНаконечник пипетки ACEимеет особо гидрофобную поверхность.Жидкости, содержащие моющие средства, не оставляют остаточной пленки внутри и снаружи, поэтому потери раствора можно свести к минимуму.
Помимо точного дозирования всех компонентов, важно также, чтобы не произошло загрязнения препаратов.Недостаточно использовать расходные материалы высокой чистоты, поскольку в процессе дозирования в пипетке с воздушной подушкой могут образовываться аэрозоли, которые остаются в пипетке.ДНК, которая может содержаться в аэрозоле, может быть перенесена из одного образца в другой на следующем этапе пипетирования и, таким образом, привести к загрязнению.Упомянутые выше системы прямого вытеснения также могут минимизировать этот риск.Для пипеток с воздушной подушкой имеет смысл использовать наконечники с фильтром для защиты конуса дозатора путем удержания брызг, аэрозолей и биомолекул.
Время публикации: 06 декабря 2022 г.